抗口蹄疫病毒血清的制备试验

由于复制口蹄疫病毒(FMDV)须要通过对豚鼠足底垫的适应,故制备口蹄疫病毒分型鉴定用的抗血清被认为是难度很大的工作。这个方法在大多数 FMD 实验室已广为应用。Hyslop和 Morrow 二氏研究了通常用作 FMD 灭活疫苗佐剂的氢氧化铝凝胶。他们的报告指出,这种佐剂的数量是提高疫苗效力的一个重要因素。关于其他细小核糖核酸病毒群的病毒,Kadoi等发现若给豚鼠和兔以适当的加强注射,无佐剂的猪肠病毒能产生较高效价的抗体。这篇科技通讯介绍一种用豚鼠制备抗 FMDV 血清的简易方法:将混于氢氧化铝凝胶中的活 FMDV作为豚鼠接种物。并将其疫苗血清经中和反应与补体结合试验测得的抗体效价,与按常规方法制备的疫苗抗体效价作了比较。     

牛魏氏梭菌浓缩氢氧化铝灭活苗的制备及其免疫兔的抗体动态 …

将牛源魏氏梭菌磐石,双阳,德惠菌株作为生产菌苗株,制备浓缩甲醛氢氧化铝灭活苗,该苗安全性好,免疫后３０天以２个致死量强毒攻击,可获１００％保护,免疫后２００天以同样剂量攻击可获９０％保护。经氢氧化铝与蜂胶佐剂比对试验,氢氧化铝佐剂经蜂胶佐剂免疫效果好,抗体动态试验表明,免疫后３０～５０天,菌体抗体和毒素抗体均达最高峰,用兔血清进行中和试验表明,免疫后３０天兔血清能中和８（ＭＬＤ）毒素,小鼠全部存活     

牛魏氏梭菌浓缩氢氧化铝灭活苗的制备及其免疫兔的抗体动态变化研究

将牛源魏氏梭菌磐石、双阳、德惠菌株作为生产菌苗株,制备浓缩甲醛氢氧化铝灭活苗,该苗安全性好,免疫后３０天以２个致死量强毒攻击,可获１００％保护,免疫后２００天以同样剂量攻击仍可获９０％保护。经氢氧化铝与蜂胶佐剂对比试验,氢氧化铝佐剂比蜂胶佐剂免疫效果好。抗体动态试验表明,免疫后３０～５０天,菌体抗体和毒素抗体均达最高峰。用兔血清进行中和试验表明,免疫后３０天兔血清能中和８（ＭＬＤ）毒素,小鼠全部存活。     

“兔瘟”疫苗中不同佐剂对免疫效果的影响

利用“兔瘟”病毒枣(?)毒株(RVZ85)制备的不含佐剂疫苗,甘油佐剂疫苗、氢氧化铝佐剂疫苗和矿物油佐剂疫苗免疫接种易感家兔,定期测 HI 抗体效价并进行人工攻毒试验.结果证明,不含佐剂的疫苗产生的保护力最早,免疫后三天即4/4保护.用四种疫苗免疫接种后一年内,对攻毒的保护率均为100%.四种疫苗中,以矿物油佐剂疫苗免疫兔的HI抗体效价最高,氢氧化铝佐剂疫苗次之,甘油佐剂疫苗及不含佐剂疫苗的HI效价较低。氢氧化铝佐剂疫苗在室温保存8.5个月,免疫兔4/4保护;室温保存14个月.免疫兔2/3保护:4℃保存14个月,免疫兔4/4保护.     

猪血凝性脑脊髓炎病毒不同佐剂灭活疫苗免疫BALB/c小鼠的比较试验

用血凝/血凝抑制试验（HA/HI）检测自制的猪血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）氢氧化铝胶灭活苗和蜂胶佐剂灭活苗免疫BALB/c小鼠后的抗体效价,依据小鼠抗体效价比较不同免疫佐剂的效果。结果表明,用氢氧化铝胶佐剂配制的疫苗可刺激接种动物产生快速免疫应答反应,抗体产生效价高、维持时间长,其效果优于其它佐剂,有望成为HEV灭活疫苗的候选佐剂。     

液相阻断酶联免疫吸附法检测O型口蹄疫免疫抗体

1 原理 滴定好的固定量病毒抗原与被检血清首先在液相中反应,然后将抗原抗体复合物转移到包被好了的含口蹄疫（FMD）型特异性抗体的酶联免疫吸附（ELISA）板中,没有完全被血清抗体阻断的病毒抗原被ELISA板中的抗体捕获,亦与随后加入的豚鼠抗血清中的抗体结合。     

新型纳米佐剂用于口蹄疫O型、Asia Ⅰ型双价灭活疫苗的研究

采用新型纳米佐剂按照不同比例配制口蹄疫O型、Asia Ⅰ型双价灭活疫苗,对疫苗的各项指标进行测定,同时免疫接种SPF豚鼠,通过测定血清抗体效价对新型纳米佐剂的免疫增强效果进行初步评估。结果初步表明新型佐剂疫苗黏度低易注射、稳定性好、安全、免疫副反应小、其免疫效果与采用ISA206佐剂制备的口蹄疫灭活疫苗免疫效果相当。     

3种不同类型佐剂的猪圆环病毒2型亚单位灭活疫苗免疫效果的比较研究

为制备猪圆环病毒2型商品化亚单位疫苗选择良好的佐剂,对由水性佐剂GEL 01、白油佐剂以及氢氧化铝胶佐剂分别制备的3种猪圆环病毒2型亚单位疫苗的免疫效果进行比较研究。本实验选取3~4周龄猪圆环病毒2型抗体阴性猪30头,根据试验疫苗接种情况分为6组,分别为:3种不同佐剂制备的亚单位疫苗(A组、B组和C组)、商品化疫苗(D组)以及空白对照组和攻毒对照组,然后进行临床观察、抗体水平监测和免疫效力评价,观察各组仔猪的不良反应情况、抗体水平以及攻毒保护情况。结果显示:3种不同类型佐剂制备的猪圆环病毒2型亚单位疫苗接种猪后均无任何不良反应、能刺激机体产生良好的ELISA抗体水平和免疫效果,但水性佐剂GEL 01制备的疫苗与另外2种佐剂制备的疫苗相比,综合抗体水平、免疫效果等因素,水性佐剂GEL 01制备的疫苗在临床使用上更具优势,为商品化亚单位疫苗佐剂的选择提供了重要的数据支持。     

口蹄疫A型油佐剂和leo佐剂弱毒灭活疫苗免疫持续期的研究

用实验室配制的口蹄疫油佐剂和leo佐剂A型弱毒灭活疫苗各免疫6月龄健康敏感牛（乳鼠中和抗体滴度小于1：4）5头，免疫后每月采血一次，分离血清；采用固定病毒稀释血清的方法，通过乳鼠中和试验检测免疫牛血清中的口蹄疫A型中和抗体的产生与消长情况，用karber法计算中和效价，绘制动态曲线图。结果显示，口蹄疫弱毒灭活疫苗免疫牛，可以产生高滴度的血清中和抗体，免疫牛血清中和抗体效价均在免疫后1个月左右达到高峰。油佐剂疫苗免疫的牛，血清中和抗体效价比较高，但下降比较迅速；leo佐剂疫苗免疫的牛，血清中和抗体效价比较低，但下降比较平缓。     

猪细小病毒灭活疫苗安全性试验及佐剂的筛选

本研究以猪细小病毒(PPV)现地分离株(BQ)第30代细胞培养毒株作为灭活疫苗研究用种毒,通过优化病毒增殖条件和培养方法,获得较高滴度的病毒传代细胞培养物用于PPV灭活疫苗的制备.PPV细胞培养毒株分别用甲醛和β-丙内酯进行灭活,对2种灭活剂灭活的病毒液分别用国产铝胶佐剂、进口矿物质白油佐剂以及法国赛比克公司的MONTANIDETM ISA 206、ISA15AVG、IMS251CVG 3种佐剂制备10种灭活疫苗,然后分别进行10日龄乳鼠、60日龄仔猪、不同妊娠阶段母猪的安全性试验及成年豚鼠的免疫效果对比试验.通过比较不同灭活疫苗的安全性和对成年豚鼠的免疫效果,初步确认甲醛灭活的病毒液与佐剂ISA15AVG的组合为PPV灭活疫苗的最佳灭活剂和佐剂组合.     

不同佐剂对口蹄疫病毒样颗粒疫苗免疫效果的评价

口蹄疫(foot-and-mouth disease, FMD)是一种高度传染性疾病，严重影响着畜牧业的发展。近年来，病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)疫苗因具有安全、高效等优点，成为当前FMD疫苗研究热点。为解决FMDV VLPs疫苗免疫原性弱的问题，本研究选取CpG、GM-CSF和FliB佐剂，与ISA206联合后分别与FMDV VLPs配伍，免疫豚鼠后通过检测豚鼠特异性抗体、中和抗体、脾淋巴细胞增殖能力及FMDV的攻毒保护率，探究其对FMDV VLPs疫苗的免疫增强效果。结果表明，CpG与ISA206联合作为佐剂可有效地刺激机体产生更高水平的特异性抗体和中和抗体，同时能够提高动物的攻毒保护率，从而增强了FMDV VLPs疫苗的免疫效力，研究结果为FMDV VLPs疫苗及其他蛋白质类疫苗最优佐剂的选择提供了依据。     

口蹄疫双佐剂灭活疫苗免疫动物抗体持续期的研究

一、材料与方法1.疫苗佐剂:法国SEPPIC公司生产的206佐剂成品,双佐剂自行配制。2.口蹄疫病毒抗原:O型和Asia-1型病毒,按生产规程灭活后制备成疫苗用抗原。3.主要检测试剂盒:液相阻断     

口蹄疫双佐剂灭活疫苗免疫动物抗体持续期的研究

一、材料与方法1.疫苗佐剂:法国SEPPIC公司生产的206佐剂成品,双佐剂自行配制。2.口蹄疫病毒抗原:O型和Asia-1型病毒,按生产规程灭活后制备成疫苗用抗原。3.主要检测试剂盒:液相阻断     

O型口蹄疫病毒免疫层析试纸条检测方法的建立

为建立一种快速、准确检测O型口蹄疫病毒（FMDV）抗原的胶体金免疫层析方法,将兔、豚鼠抗O型FM-DV多抗用DEAE-Sephose层析柱纯化。胶体金标记O型豚鼠口蹄疫抗体,形成金标探针并将其喷涂于玻璃纤维上。兔抗O型FMDV抗体和羊抗豚鼠IgG分别标记于硝酸纤维素膜上作为检测带和质控带,各部件按顺序装配形成快速诊断试纸条。如果待检样品中含有O型FMDV,它将与玻璃纤维上的胶体金探针和兔抗O型FMDV抗体形成夹心复合物,并在检测带被固定,沉集反应形成肉眼可见的红色条带。在田间试验中,53份试验样本分别用试纸条和反向间接血凝试验进行检测,2种方法的阳性率分别为95.45%和90.91%。评价试验证实,本研究建立的胶体金免疫层析方法简便、快速,具有良好的特异性和敏感性,非常适于基层兽医实验室诊断时使用。     

不同佐剂对猪圆环病毒衣壳蛋白免疫原性的影响

试验旨在研究猪圆环病毒不同佐剂疫苗的制备及其对免疫原性的影响。将去除信号肽的PCV2（porcine circovirus type 2,PCV2）Cap蛋白基因连接在pET-28a载体上,进行诱导表达,用脱氧胆酸钠（DOC）和低浓度尿素对表达产物进行溶解,制备氢氧化铝胶体佐剂、脂质体佐剂、弗氏佐剂、白油佐剂、蜂胶佐剂,并与纯化的PCV2-Cap蛋白混合制成亚单位疫苗,以商品化的灭活疫苗作为阳性对照,免疫小鼠,并使用ELISA方法检测动物血清中抗体及细胞因子含量的变化,评估其免疫保护效果。结果显示,表达产物以包涵体的形式存在,使用DOC溶解包涵体可省略蛋白复性步骤,且纯化方法简单,获得纯度较高的衣壳蛋白;ELISA检测结果表明PCV2-Cap蛋白能诱导产生特异性较高的抗体;水系佐剂制备的亚单位疫苗具有较高的免疫活性,为亚单位疫苗的商品化提供重要的数据支持。     

鸭坦布苏病毒病-H9亚型禽流感二联灭活疫苗免疫佐剂筛选

为筛选出理想的鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗免疫佐剂,将灭活的坦布苏病毒液和禽流感病毒(H9亚型)尿囊液分别与白油佐剂、卡波姆佐剂、铝胶佐剂、蜂胶佐剂制成抗原含量相同的TMUV-AIV二联灭活疫苗。应用阻断ELISA方法和血凝抑制方法测定免疫鸭血清中坦布苏病毒和禽流感病毒抗体,比较不同佐剂疫苗对试验鸭的免疫效力。结果表明,以白油作为佐剂的灭活疫苗组免疫效果最好,抗体产生快、抗体水平优于其他各组,免疫2周后60%(6/10)血清样品HI抗体可达1∶8以上,80%血清样品呈TMUV抗体阳性,是制备鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗的理想佐剂。     

口蹄疫疫苗中免疫原含量和中和抗体滴度的关系

为了更好的进行口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)疫苗研制,本试验进行了口蹄疫疫苗免疫原含量和免疫效果的关系研究。试验中提取了口蹄疫疫苗中的主要免疫原、沉降系数为146S的口蹄疫完全病毒颗粒,分不同剂量免疫豚鼠,分别采集1次免疫和加强免疫的血清,用细胞微量中和试验检测中和抗体滴度,研究免疫效果。结果表明,当免疫的口蹄疫病毒颗粒含量大于1.5 μg 时,增加免疫量不能增加中和抗体滴度,当免疫量大于7.5 μg时,中和抗体滴度有所下降。该研究结果对于开发口蹄疫疫苗具有指导意义。     

口蹄疫疫苗效检模型动物测毒及口蹄疫种毒冻干试验

应用豚鼠作为口蹄疫疫苗效检模型动物检测口蹄疫病毒对模型动物的病原性.用体重400 g左右的豚鼠,将猪O型口蹄疫灭活疫苗效检攻毒毒株ORMF8经后肢蹠部皮内注射途径进行测毒.测毒结果表明,口蹄疫病毒可引起豚鼠出现典型发病,并产生明显病变,ORMF8种毒对豚鼠的毒价可达105.5ID50/0.2 mL.将乳鼠中和试验用种毒OMⅡ按一定比例加入5%蔗糖脱脂牛奶稳定剂进行冷冻真空干燥试验,3次冻干试验结果表明,种毒冻干后病毒含量有一定程度的下降,但下降程度不显著.     

不同佐剂大肠杆菌疫苗对免疫效果的影响

采用培养后大肠杆菌菌液、大肠杆菌与矿物油佐剂及氢氧化铝佐剂分别制备免疫原。对兔间隔14 d皮下免疫注射2次,每只兔的免疫剂量为1 ml/kg。最后一次免疫注射后20 d,取兔血清进行凝集试验测其抗体效价。结果表明：加矿物油佐剂苗的抗体效价最高（1∶256）,不加佐剂苗的抗体效价次之（1∶128）,加入氢氧化铝佐剂苗的抗体效价最低（1∶64）。     

纳米氢氧化铝吸附禽流感病毒灭活疫苗的研制及其对肉鸡抗体效价的影响

自制纳米氢氧化铝佐剂,通过吸附H5N1灭活抗原,制备了纳米铝佐剂疫苗,按照中华人民共和国农业行业高致病性禽流感免疫技术规范标准,免疫肉鸡。经检测发现纳米铝佐剂疫苗组肉鸡产生有效保护抗体时间较油佐剂疫苗和常规铝佐剂疫苗提前3d和7d,抗体峰值达到时间较油佐剂疫苗和常规铝佐剂疫苗提前14d。结果表明,纳米氢氧化铝作为高致病性禽流感H5N1的免疫佐剂,可以更早的刺激动物产生有效保护抗体,纳米铝佐剂禽流感疫苗具有广泛的应用价值。