猪水疱病病毒致病和免疫的分子基础

猪水泡病病毒（Swinevesiculardiseasevirus，SVDV）属于小RNA病毒科（Picornaviriclae）肠道病毒属（Enterovirus），其抗原特性与柯萨奇病毒B5（CoxsackievirusB5，CVB5）关系密切，被认为是CVB5的一个猪变种或亚种。SVDV只有一个血清型，但对其分离株进行系统发生分析可进一步分为4个抗原群或基因群。     

猪瘟病毒E2基因与报告基因lacZ双表达质粒的构建及体外表达

利用反转录和套式PCR技术，从猪瘟病毒(CSFV)石门血毒中扩增出了E2基因，将其用N0tⅠ和XhoⅠ双酶切后，与同样处理的真核表达载体pBudCE4．1相连，获得了pBudCE Es2-22的阳性质粒。对后者再以HindⅢ和XbaⅠ双酶切，并与来自质粒pBudCE lacZ／CAT的lacZ基因片段连接，获得了含CSFV E2基因与lacZ报告基因的真核双表达质粒pBudCE lacZ／Es2—22。该质粒转染BHK21细胞后，用β-Gal Staining试剂盒原位染色可见许多着染蓝色的细胞；用CSFV Antigen试剂盒检测转染细胞的上清液和细胞沉淀，均可检测到含CSFV E2抗原。结果表明，构建的真核质粒pBudCE lacZ／Es2—22实现了2个外源基因的共表达。     

自杀性DNA疫苗

基因疫苗与传统疫苗相比,具有许多优势:比较稳定,便于保存和运输;将抗原以天然的形式提供给免疫系统,可同时引起全面的体液免疫和细胞免疫应答;对不同亚型的病原体有交叉抵抗作用,没有减毒活疫苗毒力回复的危险性等。基因疫苗一出现,就受到普遍关注,迅速成为疫苗研究领域的一大     

超小氧化石墨烯-氧化铁纳米粒子复合材料的可控制备及磁共振成像研究

利用超小氧化石墨烯(UGO)作为载体,一步法合成水溶性的超顺磁性氧化铁纳米粒子(UGO-SPIO)。然后利用BSA修饰UGOSPIO,形成具有良好生理稳定性和生物相容性的磁性复合材料(UGO-SPIO@BSA)。普鲁士蓝染色试验及磁共振成像试验显示,UGOSPIO@BSA能很好的标记细胞,而且复合物具有良好的MR成像能力。     

嵌合型口蹄疫病毒样颗粒组装研究

[目的]为研究和制备多联或多价口蹄疫病毒样颗粒疫苗奠定基础.[方法]将FLAG序列通过融合PCR技术插入口蹄疫结构蛋白VP1GH-loop可变区,并通过大肠杆菌原核表达技术表达口蹄疫病毒衣壳蛋白VP0、VP3和嵌合型VP1,在体外组装出嵌合FLAG外源多肽的口蹄疫病毒样颗粒.[结果]大肠杆菌表达的口蹄疫衣壳蛋白主要以可溶性存在,在缓冲体系中融合标签被切除衣壳蛋白VP0、VP3和FLAGVP1组装成病毒样颗粒,其大小约25 nm左右.FLAG序列成功插入GH-loop可变区第150-151氨基酸位点之间,外源多肽的插入没有影响衣壳蛋白VP1的空间结构.[结论]口蹄疫loop可变区引入外源抗原是可行的,但外源多肽的大小及理化性质会影响病毒样颗粒的组装效率.     

不同佐剂对口蹄疫病毒样颗粒疫苗免疫效果的评价

口蹄疫(foot-and-mouth disease, FMD)是一种高度传染性疾病，严重影响着畜牧业的发展。近年来，病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)疫苗因具有安全、高效等优点，成为当前FMD疫苗研究热点。为解决FMDV VLPs疫苗免疫原性弱的问题，本研究选取CpG、GM-CSF和FliB佐剂，与ISA206联合后分别与FMDV VLPs配伍，免疫豚鼠后通过检测豚鼠特异性抗体、中和抗体、脾淋巴细胞增殖能力及FMDV的攻毒保护率，探究其对FMDV VLPs疫苗的免疫增强效果。结果表明，CpG与ISA206联合作为佐剂可有效地刺激机体产生更高水平的特异性抗体和中和抗体，同时能够提高动物的攻毒保护率，从而增强了FMDV VLPs疫苗的免疫效力，研究结果为FMDV VLPs疫苗及其他蛋白质类疫苗最优佐剂的选择提供了依据。     

口蹄疫病毒诱导PK-15细胞发生自噬的研究

[目的]探究Asia1型口蹄疫病毒感染PK-15细胞后能否诱导自噬的发生,分析细胞自噬对口蹄疫病毒复制的影响。[方法]用未经处理的PK-15细胞和自噬抑制剂3-MA处理的PK-15细胞分别感染口蹄疫病毒,通过蛋白免疫印迹和共聚焦激光显微镜检测自噬的诱导情况。[结果]自噬标志分子LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ蛋白水平的比值增加,并且LC3特异的绿色荧光聚集;自噬抑制剂3-MA处理细胞后口蹄疫病毒复制水平显著上调。[结论]Asia1型口蹄疫病毒感染PK-15细胞后能够诱导发生自噬,而自噬又促进口蹄疫病毒的复制。     

O型口蹄疫病毒样颗粒编码基因的真核表达载体构建及表达

为了构建O型口蹄疫病毒(FMDV)病毒样颗粒编码基因的真核表达载体,将FMDV结构蛋白VP0、VP1、VP3的基因分别克隆到真核表达载体pVAX1中,再分别通过带有BsmBⅠ、EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的引物,分别对重组质粒pVAX-VP0、pVAX-VP1和pVAX-VP3扩增后进行酶切,用T4连接酶连接得到重组的真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3。对重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3进行PCR鉴定并测序。用脂质体将重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3转染BHK-21细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)及Western blot检测重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3在细胞中的表达情况。结果表明,成功构建了重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3,并在BHK-21细胞中得到表达。     

兔抗O型口蹄疫VLPs酶标抗体的制备及初步应用

为制备兔抗O型口蹄疫病毒样颗粒(VLPs)的酶标抗体,进一步建立O型口蹄疫病毒的ELISA检测方法,通过原核表达、体外纯化和组装O型口蹄疫VLPs,免疫家兔制备兔抗O型口蹄疫VLPs高免血清,并采用亲和层析法纯化IgG,改良过碘酸钠法制备兔抗O型口蹄疫VLPs的酶标抗体(rabbit anti-type O foot-and-mouth disease IgG-HRP)。结果显示,兔抗O型口蹄疫VLPs高免血清效价达1∶4 096,纯化后的IgG纯度达90%,效价达1∶512 000。表明获得了高纯度的兔抗O型口蹄疫VLP的酶标抗体,可用于O型口蹄疫的ELISA检测。