肺炎克雷伯氏菌强毒株的分离鉴定及16-23SrRNAITS序列分析

为确诊疑似仔猪肺炎克雷伯氏菌(K.pneumonia)感染,并研究其病原的致病性、耐药性、16-23SrRNA ITS系统进化特征,本研究从云南因肺炎、腹泻而大量死亡的仔猪中分离到1株革兰氏阴性短粗杆菌,命名为KP14013,对其进行生化鉴定、16SrRNA鉴定,研究其对小白鼠和仔猪的致病性,并对其16-23SrRNA ITS基因进行测序和遗传进化分析。结果显示,KP14013分离株生化特征与肺炎克雷伯氏菌相符,其16SrRNA与GenBank中23株肺炎克雷伯氏菌代表株之间的同源性均为99%,将KP14013鉴定为肺炎克雷伯氏菌。KP14013对小白鼠半数致死量(LD50)为3×101.8 CFU,腹腔注射3×108 CFU可使仔猪100%致死。16-23SrRNA ITS系统进化关系结果表明,KP14013与GenBank中收录的15株肺炎克雷伯氏菌形成进化树的一个分支,属于同一个亚群,它们之间的核苷酸同源性为98.4%~99.2%。本研究证实了肺炎克雷伯氏菌是该起仔猪腹泻大量死亡的病原;KP14013分离株为毒力极强菌株,具有多重耐药性,其16-23SrRNA ITS与GenBank中收录的肺炎克雷伯氏菌代表株之间核苷酸存在差异,可用于肺炎克雷伯氏菌菌株间的鉴别。     

广南县一起非典型性猪伪狂犬病的诊治

正猪伪狂犬病病毒(PRV)属于疱疹病毒科猪疱疹病毒属,是引起家畜和某些野生动物发病的传染病病毒[1],对猪的危害最大,每年给养猪业造成巨大的经济损失。随着人们对猪伪狂犬病的重视程度越来越高,猪伪狂犬病疫苗的推广应用,几乎所有养猪场都进行猪伪狂犬病疫苗免疫,因此,典型的猪伪狂犬病越来越少。然而由于疫苗质量高低不一,免疫程序不合理,生物安全体系不完善等原因,猪伪狂犬病野毒在云南养猪场时有存在。     

用黄曲霉毒素B1单抗介导免疫组化法检测雏鸭感染黄曲霉毒素的分布规律研究

 【目的】（1）建立单抗介导的、能够对黄曲霉毒素AFB1进行亚细胞定位的免疫组化方法；（2）探明AFB1侵染和分布于雏鸭靶器官（细胞）规律，为阐明AFB1对雏鸭的致病机理提供基础实验数据，为AFB1感染人类提供研究模型。【方法】（1）利用AFB1单抗、免疫组化理论和方法，结合石蜡切片技术，建立检测感染雏鸭组织器官和细胞中AFB1方法；（2）7日龄樱桃谷鸭饲喂黄曲霉毒素（AFB1）含量为150 µg•kg-1的全价饲料，分别于6、12、24、48、72、96、120、144、168和192 h各剖杀2只，取心、肝、脾、肺、肾、脑、十二指肠、法氏囊、胸腺和胰腺等组织器官多聚甲醛固定、石蜡包埋，应用建立的单抗介导免疫组化对AFB1在感染雏鸭体内侵染的组织器官和细胞进行定位检测。【结果】（1）建立的单抗介导的免疫组化能够特异性检测到感染雏鸭组织中的AFB1，而对鸭病毒性肝炎病毒、鸭疫里默氏杆菌、鸭多杀性巴氏杆菌、鸭沙门氏菌和鸭大肠杆菌感染鸭组织呈现阴性反应；（2）雏鸭采食含AFB1饲料后，24 h可在肝脏和肾脏中检测到AFB1，随后在脾脏（48 h）、胰腺（96 h）、十二指肠（120 h）、心肌（144 h）及法氏囊（168 h）检测到AFB1，其中肝脏和肾脏的阳性结果最强；AFB1分布于肝脏肝窦及汇管区周围炎性反应带的肝细胞，肾脏肾小管、集合管上皮细胞以及肾小球毛细血管，脾脏白髓及炎性细胞，胰腺腺上皮细胞，十二指肠脱落的黏膜上皮细胞，心脏血管周围和心脏发生空泡变性的心肌纤维中；AFB1主要集中分布于细胞核内，而细胞膜和细胞浆内也有少量的分布。【结论】（1）单抗介导免疫组化能够特异检测AFB1感染雏鸭组织石蜡切片中的AFB1和亚细胞定位, 还可用于AFB1感染雏鸭的实验室诊断和甲醛固定组织的回顾性诊断；（2）AFB1可广泛侵害感染雏鸭各个组织器官,以肝脏和肾脏最为严重。AFB1主要蓄积于被感染的细胞核。     

云南奶（水）牛口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测及防控措施

本文报告了云南奶（水）牛口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测的结果,并在此基础上提出了相应的防控措施。2011年度,云南省现代农业（奶牛）产业技术体系奶牛疫病控制功能实验室在体系所属的2个综合试验站和4个区域推广站各示范场、养殖小区和养殖户采集奶牛、奶水牛血清样品共计311份。应用口蹄疫A型、亚洲Ⅰ型和O型免疫抗体液相阻断ELISA检测方法,检出口蹄疫O型抗体阳性数253份,阳性率81.35%;亚洲Ⅰ型抗体阳性数278份,阳性率89.39%;A型抗体阳性数110份,阳性率35.37%。应用口蹄疫3ABC抗体检测方法检出抗体阳性样品7份,阳性率2.25%。应用IDEXX牛布氏杆菌抗体检测方法检出布氏杆菌抗体阳性样品2份,阳性率0.64%。针对本次获得的口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测结果,提出了相应的防控措施,强化奶牛和奶水牛犊牛免疫、跟踪监测和完善生物安全措施。     

口蹄疫LPB-ELISA抗体滴度和中和抗体滴度符合性研究

血清中和抗体滴度的大小反映血清对病毒感染的中和能力,其是评价疫苗免疫效果和病毒感染状况的重要指标,而液相阻断酶联免疫吸附试验(liquid phase block ELISA, LPB-ELISA)是一种通过ELISA检测抗体滴度的方法,因此研究LPB-ELISA抗体滴度和中和抗体滴度的关系对疫苗评价和理论研究有重要意义。本研究采用野外采集的90份牛血清进行了中和试验和LPB-ELISA试验,结果表明中和抗体滴度和LPB-ELISA抗体滴度具有相关性,相关系数为0.642,但是试验证明有41%中和抗体阴性样品会被LPB-ELISA检测为阳性,通过改变LPB-ELISA的阳性判断标准,采用抑制率>0.7的抗体滴度计算方法和1/8判定标准,可以使改进的LPB-ELISA的计算结果和中和试验结果更好的符合,降低假阳性率,使LPB-ELISA更适合进行口蹄疫血清学监测和普查。     

一例人感染羊接触传染性脓疱皮炎的确诊

2013年6月6日,云南省江川县动物疫病预防与控制中心的一名兽医在保定可疑羊接触传染性脓疱皮炎发病羊时不慎被羊咬伤手指,10 d后在伤口愈合处形成丘疹,随后发展为水疱,最后形成结痂。随着痂皮的逐渐脱落,直至丘疹出现后1个多月感染病灶才完全愈合。经过对发病羊口唇痂垢及人手指丘疹、水疱液样品进行PCR、Real-time PCR及序列比对分析,2份样品均扩增出1225 bp的预期大小片段,Real-time PCR也扩增出标准S形曲线和Rn指数增长峰,2份病料测定出的序列（1133 bp）完全一致,与NCBI GenBank中的羊口疮病毒参考毒株NC-005336.1（1133/1133）对应序列的相似性达到100%,与AY386264.1（1115/1133）、AY386263.1（1114/1133）、HM133903.1（1113/1133）、KF837136.1（1110/1133）及普洱毒株PUER/YN/CHIA/2011（1113/1133）对应序列相似性达到98%,与DQ184476.1（1104/1133）对应序列相似性达到97%,与NCBI GenBank中同为副痘病毒属成员的伪牛痘参考毒株GQ329669.1（1052/1140）、GQ329670.1（1051/1140）对应序列的相似性达到92%,与牛丘疹性口炎病毒参考毒株AY386265.1（905/1130）的对应序列的相似性仅达到80%。由此,确诊此次病例为人感染羊传染性脓疱病毒。     

生物缓冲剂HEPES对促进口蹄疫抗原稳定性的研究

口蹄疫抗原在储存和疫苗制备过程中容易降解,影响疫苗效果。口蹄疫抗原的降解速度与维持液的pH值的稳定性有关,制备出pH稳定性强的维持液可提高口蹄疫疫苗质量。对生物缓冲剂HEPES进行研究,分别用含有和不含有HEPES的MEM维持液在BHK细胞上培养病毒,将病毒放在37℃温箱内,分别在0、24、48、72h取样,通过微量细胞中和试验检测病毒效价,并进行比较。结果表明,在37℃条件下,不含生物缓冲剂的病毒液TCID50下降幅度比含生物缓冲剂的病毒液大,72h时,前者毒价为零,后者TCID50为10-2.5。由此可知,HEPES可以有效地改善病毒培养液缓冲能力,促进病毒颗粒的稳定性。     

云南省生猪产业发展现状及可持续发展建议

通过收集云南省2012—2016年生猪存栏、出栏、猪肉产量、规模养殖情况、活猪价格、猪粮比及不同规模养殖盈利情况,分析了云南省作为西部地区的养猪大省生猪产业发展中存在的主要问题,提出了生猪产业可持续发展建议,以期为云南省生猪产业发展提供借鉴和参考。     

欧洲蚊媒疾病流行态势与媒介蚊虫控制

蚊虫是多种疾病的传播媒介,能够传播很多严重危害动物和人类健康的疾病,是重要的医学昆虫。长久以来,依靠蚊子传播的蚊媒疾病广泛流行于热带地区。但近年来,在全球化和全球变暖的大背景下,很多原先已经在欧洲绝迹的蚊媒疾病又开始卷土重来,造成很大的危害。我国的卫生和健康标准远低于欧洲,且我国幅员辽阔,气候多样,更适于蚊子的繁殖和蚊媒疾病的传播。论文通过对近年来欧洲流行的蚊媒疾病进行回顾,为我国蚊媒疾病流行和媒介蚊虫控制方面提供参考。