二乙烯亚胺对猪细小病毒的灭活作用

使用新型灭活剂二乙烯亚胺(binary ethylenimine,BEI)对猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)进行了灭活试验,通过ST传代细胞接种法观察病毒灭活后是否出现细胞病变,并结合血凝试验检测灭活效果,确定最佳灭活方法。用3～5日龄乳鼠检测BEI灭活后的病毒培养物和相应制备疫苗的安全性,并用豚鼠检测该灭活工艺制备疫苗的效果,与传统甲醛灭活进行了比较。结果显示,终浓度为1‰的BEI在32℃情况下经20 h即可彻底灭活PPV病毒;BEI灭活的病毒制备的疫苗免疫豚鼠较甲醛灭活病毒产生较高的血凝抑制抗体。     

猪流行性腹泻病毒分离鉴定及其灭活疫苗的研制

旨在对疑似猪流行性腹泻(PED)患猪的病料进行病毒分离,并制备灭活疫苗。从因腹泻病死的7日龄内仔猪的小肠组织及内容物中,分离出1株猪流行性腹泻病毒(PEDV),命名为PEDV-GS。用Vero细胞对病毒进行扩增,病毒液中加入终浓度为0.7 mg/mL甲醛,28℃灭活48 h,加入ISA 61 VG佐剂进行乳化,经稳定性、安全性和效力试验,初步研制出猪流行性腹泻的流行毒株灭活疫苗。疫苗免疫妊娠母猪后对仔猪进行母源中和抗体检测、安全性和有效性试验。结果表明,制备的猪流行性腹泻灭活疫苗稳定性和黏度检测都合格,且对仔猪安全有效,对妊娠母猪产仔数量及质量无影响,其被动免疫抗体至少持续到仔猪产后28 d。试验成功制备了具有安全性和高保护率的猪流行性腹泻灭活疫苗。     

5种塞内卡病毒灭活疫苗佐剂的比较研究

为研究比较5种塞内卡病毒疫苗佐剂,分别用4种自主研发佐剂和进口ISA206佐剂配制塞内卡病毒灭活疫苗,检测疫苗的理化性质、安全性及免疫效力,并对检测结果进行对比分析。结果显示,进口ISA206佐剂疫苗黏度为43.02 cP,自主研发佐剂疫苗黏度均在27.88 cP以下,其他理化性质无差异;5批疫苗安全性试验均未见明显异常;5批疫苗免疫动物后均可诱导机体产生中和抗体,二免后14 d抗体滴度在2¹¹以上,4批自主研发佐剂疫苗免疫组抗体滴度水平高于进口ISA206佐剂疫苗约1个滴度,攻毒保护结果均在4/5以上,2批自主研发佐剂疫苗免疫组保护率可达5/5。结果表明,用4种自主研发佐剂制备的塞内卡病毒灭活疫苗质量不低于用进口ISA206佐剂制备的塞内卡病毒灭活疫苗。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗免疫佐剂的比较试验

以猪圆环病毒2型(PCV2)遗传标记毒株为毒种,经细胞培养传代,优化了病毒增殖条件,获得较高滴度的病毒培养物用于PCV2灭活疫苗的研制。为了比较不同免疫佐剂的效果,本试验对国产矿物质白油和铝胶两种佐剂以及赛比克公司提供的MONTANIDETMISA206、ISA15VG、IMS1315VG3种佐剂配制的灭活疫苗进行了猪体免疫试验。通过临床观察、血清抗体效价测定,确认ISA15VG佐剂配制的疫苗在增强免疫效果方面优于其它佐剂。按5种佐剂免疫效果排序为ISA15VG、IMS1315VG、铝胶、ISA206、国产白油。ISA15VG佐剂属于水包油剂型,可刺激接种动物产生快速免疫应答反应,抗体产生效价高、持续时间长,有可能成为新型PCV2灭活疫苗佐剂的候选。     

牛传染性鼻气管炎病毒LN01/08株灭活疫苗的研制

为研制牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)灭活疫苗,本研究以国内分离鉴定的IBRV LN01/08株为种毒,优化病毒增殖条件,获得病毒滴度达108.0TCID50/mL,将其灭活制备疫苗.为比较不同免疫佐剂的效果,分别以矿物质白油和Montanide ISA206佐剂配制灭活疫苗,进行牛体免疫试验.临床观察和血清中和抗体检测结果表明,Montanide ISA206佐剂乳化的疫苗在降低副反应和增强免疫效果方面优于矿物质白油佐剂.应用Montanide ISA206佐剂制备3批灭活疫苗,并对其安全性和免疫保护效果进行测定.结果表明该疫苗安全可靠,对强毒攻击可产生较好的抵抗力,攻毒保护率达80%.疫苗在2℃～8℃保存12个月后仍能保持良好的免疫效果.     

脑心肌炎病毒灭活疫苗佐剂的筛选及其效力评价

采用ISA201、ISA15A、GEL、CP940和1313佐剂分别与脑心肌炎病毒(EMCV)灭活抗原混合,配制成5种疫苗,采用BALB/c小鼠进行免疫保护试验。结果显示,5种佐剂疫苗对小鼠无明显不良反应,均能够诱导机体产生抗EMCV特异性ELISA抗体、中和抗体和淋巴细胞增殖反应,其中ISA15A、ISA201和GEL佐剂组抗体水平和淋巴细胞增殖转化刺激指数都显著高于抗原对照组(P0.01),而且,ISA15A佐剂组免疫应答反应高于ISA201和GEL佐剂组(P0.05)。采用EMCV强毒攻击,ISA15A、ISA201和GEL佐剂组免疫保护率均达90%,表明用ISA15A、ISA201和GEL这3种佐剂配制的EMCV灭活疫苗具有较高的免疫疫保护效力,为该病灭活疫苗研制奠定基础。     

二乙烯亚胺对猪伪狂犬病病毒灭活效果研究

为研究二乙烯亚胺(BEI)对猪伪狂犬病病毒的灭活效果,使用终浓度为0.03%、0.04%和0.05%的BEI在30℃条件下对猪伪狂犬病病毒(DQ株)进行了灭活试验,通过ST传代细胞接种法观察病毒的灭活效果,用2~2.5 kg大耳白兔和断奶仔猪检测BEI灭活后的病毒液所制备疫苗的安全性,用小鼠检测该灭活工艺制备疫苗的免疫效果,并与传统甲醛灭活进行了比较。结果表明,终浓度为0.05%的BEI在30℃情况下经24 h即可彻底灭活PRV病毒;BEI灭活的病毒制备的疫苗接种大耳白兔和猪的安全性良好,免疫小鼠较甲醛灭活病毒能提供更高的保护率。本研究可为猪伪狂犬病灭活疫苗灭活工艺研究提供依据。     

猪圆环病毒2型-肺炎支原体二联灭活疫苗佐剂的筛选

为了筛选出理想的猪圆环病毒2型(PCV2)-肺炎支原体(Mhp)二联灭活疫苗免疫佐剂,试验用灭活的PCV2病毒液和猪Mhp菌液,分别与进口白油佐剂、SEPPIC MONTANIDE ISA 206佐剂和卡波姆佐剂制成三种抗原含量相同的PCV2-Mhp二联灭活疫苗免疫仔猪,比较三种疫苗对仔猪的安全性和免疫效力。安全性试验结果表明:矿物白油佐剂疫苗免疫仔猪后,试验猪体温反应较大,部分试验猪注射部位出现肉芽肿;ISA 206佐剂疫苗和卡波姆佐剂疫苗免疫仔猪后,试验猪全身和局部反应较小。免疫效力试验结果表明:卡波姆佐剂疫苗PCV2部分的免疫效力优于矿物白油佐剂疫苗和ISA 206佐剂疫苗,保护率达100%;在Mhp保护方面,卡波姆佐剂也表现出明显的优势,卡波姆佐剂疫苗免疫后对仔猪的肺炎病变减少率达78.6%。说明卡波姆佐剂可作为PCV2-Mhp二联灭活疫苗进一步研究的佐剂。     

膜分离法纯化浓缩猪繁殖与呼吸综合征灭活病毒的效果试验

将效力检验不合格的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒灭活液采用不同孔径的微孔滤膜、超滤膜滤除杂蛋白、超滤浓缩、除菌处理得到纯化浓缩的PRRS灭活病毒液;将检验合格的纯化浓缩的病毒灭活液与注射用矿物白油佐剂制成油包水灭活疫苗;对制备的灭活疫苗进行各项检验及免疫效果试验。结果显示,纯化的PRRS灭活病毒液杂蛋白去除率平均达到66.8%以上;灭活疫苗的物理性状与无菌检验、安全检验、效力检验均合格,免疫猪体内抗PRRS病毒抗体消长幅度比同时期未纯化的常规灭活疫苗明显,其中免疫至63 d时中和抗体效价(ELISA)平均高达245.7稀释倍数,比常规疫苗中和抗体效价平均高出66.3稀释倍数。试验表明,灭活病毒进行膜纯化技术处理后,免疫效果显著高于传统的灭活疫苗。     

不同佐剂制备的猪伪狂犬基因缺失标记灭活疫苗免疫效果的比较研究

佐剂的剂型对疫苗稳定性、安全性及免疫效力均有一定的影响。为筛选优质佐剂以提高猪伪狂犬基因缺失标记灭活疫苗(JS2012ΔgE株)的免疫效果,分别使用水包油包水佐剂(ISA206)、水包油佐剂(ISA28VG)、油包水佐剂(ISA70VG)及水佐剂(Gel02)制备疫苗,并检测各组疫苗理化特性、安全性及免疫效力。结果显示：4种佐剂制备的猪伪狂犬灭活疫苗的理化特性、安全性均达到质量标准;免疫效力比较中,ISA70VG组相比其他免疫组具有较高的抗体水平且持续时间较长,其次为ISA206组;攻毒后,ISA70VG组和ISA206组无任何临床症状及病变。综合安全性及免疫效力,ISA206佐剂及ISA70VG更适合作为制备猪伪狂犬基因缺失标记灭活疫苗(JS2012ΔgE株)的佐剂。