山羊痘病毒非必需基因区gp024基因的鉴定

为筛选山羊痘病毒(GTPV)的外源基因插入区,本研究以GTPV Pellor株为模板,设计2对引物,PCR扩增AV 41株GTPV_gp024基因相邻上下游长度约1.1 kb的同源重组片段,分别插入质粒pGPT-EGFP中.插入部位在痘病毒双向启动子p11～p7.5启动的报告基因EGFP-GPT上下游,构建转移载体pEG024,并转染已感染GTPV Av 41病毒的LT细胞,经GPT加压筛选7代后得到重组病毒.结果显示,重组病毒稳定表达报告基因EGFP,从而表明GTPV_gp024基因能够作为外源基因的插入区.     

IPTG诱导浓度、时间对AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1蛋白表达的影响

将口蹄疫病毒VP1基因插入原核表达载体pET-28a中,转化至大肠杆菌BL21.用不同的IPTG浓度与不同诱导时间诱导菌株表达VP1蛋向,分析不同IPTG浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响,以确定最佳表达条件.结果表明,在一定范围内,随IPTG浓度的增高,表达量并不会随之增大;而在菌体对数生长期内,随诱导时间的延长,表达量会随之增大.最后确定当IPTG浓度为3 mmol/L,诱导表达到最长时间9 h时,VP1蛋白表达量最大.     

口蹄疫病毒VP1基因的原核可溶性表达

针对重组原核表达载体表达目的蛋白以包涵体形式存在的问题,作者对影响外源蛋白表达的IPTG的浓度、温度、时间等因素均进行了探索,以观察VP1蛋白的可溶性情况。通过PCR技术将VP1基因克隆至pGEM-T载体中,然后将pET-28a(+)和pGEM-T载体分别进行双酶切,构建重组的pET-28a-VP1载体,将重组载体转化至BL21中,诱导后经SDS-PAGE检测可见约29 ku的目的蛋白条带。插入的外源目的蛋白主要以包涵体的形式存在,上清中的可溶性蛋白甚微。试验结果表明,这可能与蛋白本身的氨基酸组成有重要关联。     

布鲁氏菌病活疫苗加改良保护剂冻干后的效果观察

为了提高冻干产品的档次 ,对现有的老式冻干机进行了改造 ,冻干工艺由原来的间接板层冻干改变为直接板层冻干 ,由于冻干工艺的改变 ,使用明胶蔗糖保护剂冻干的布鲁氏菌病活疫苗 (M5株 )物理性状不好 ,出现结晶、不易脱壁、残余水分超标等现象。在原明胶蔗糖保护剂的基础上添加了规程容许的其它保护剂成分后 ,问题得到了解决 ,经活菌计数、残余水分测定、物理性状检查 ,保存 4个月、7个月、12个月后活菌计数等与 2 0 0 2 0 3批布鲁氏菌病活疫苗 (S19号 )比较 ,证明疫苗质量并没有下降。试验成果运用在布鲁氏菌病活疫苗(M5株 ) 2 0 0 2 0 7～ 2 0 0 2 15批的生产中 ,疫苗质量有了明显提高 ,完全达到了《规程》标准     

抗犬细小病毒高免血清的制备和应用

应用差速离心和密度梯平衡离心技术从患ＣＰＶ性肠炎的犬粪便和肠内容物中提纯的ＣＰＶ抗原接种犬，制备了高效价的抗血清，用该血清共治疗７８头病犬，治愈率达８２％（６４／７８），实践表明，自制的高免血清对患ＣＰＶ性肠炎的病犬具有治疗和控制疾病发展的作用，特别是早期病例，仅用抗血清即可治愈，对中期病犬结合支持和对症疗法，可大大提高治愈率，有很高的应用价值。     

羔羊睾丸大小对山羊痘细胞苗生产的经济影响

一般常用绵羊羔羊睾丸细胞生产山羊痘细胞苗。在生产过程中选择羔羊的日龄极为重要 ,通过多年的生产实践发现绵羊羔羊的日龄选择应该控制在 3月龄以内 ,睾丸净重为 10～ 2 0g ,可保证细胞生长和形成致密单层 ,毒价较高 ,毒液收获量大 ,经济实用     

抗绵羊进行性肺炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用提纯的OPPV细胞抗原免疫BALB/c小鼠脾脏与SP2/0小鼠骨髓细胞融合,融合率为70%,以ELISA双抗体夹心法进行检测,阳性率为20%,经过有限稀释法克隆出1A₆、2B₈、1G₃、2G₄4株分泌抗OPPV抗原的单克隆体杂交瘤细胞株.选择抗体分泌滴度高的1A₆细胞进行了较详细的研究,结果表明,其核内染色体数为96～110条,抗体属性为IgG1,轻链为K链,IFA试验表明产生的McAb对OPPV有特异性,细胞传30代并在液氮中保存半年后复苏仍能稳定地分泌抗OPPV McAb,细胞分泌抗体的ELISA滴度腹水为6.4×10⁴,上清为640,McAb经硫基乙醇还原后在SDS-PAG上呈现2条区带,一条为重链部分,MW50000,另一条为轻链部分,MW为25000.     

中国美利奴（新疆型）绵羊进行性肺炎的研究──XM—MDV_（30）毒株的分离和初步鉴定

中国美利奴（新疆型）绵羊进行性肺炎的研究──ＸＭ—ＭＤＶ_（３０）毒株的分离和初步鉴定胡尔玛西，符子华，李淑霞，呼西且，易中，王进城（新疆畜牧科学院兽医研究所，乌鲁木齐８３００００）王静，胡端铭，刘彬（阿克苏地区兽医防疫站）绵羊进行性肺炎（Ｏｖｉｎｅ?..