秀丽隐杆线虫fat-1基因密码子优化、克隆及家兔表达载体构建

提取秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)总RNA,采用RT-PCR法扩增出fat-1基因cDNA全长.根据家兔基因密码子使用偏好性,对引自GenBank的fat-1 cDNA序列进行密码子优化,通过全基因合成的方法获得优化后的fat-1基因(命名为opfat-1).将扩增的fat-1 cDNA和opfat-1基因分别与pGEM-T Easy和pUC57载体连接,转化大肠杆菌DH5α,获得2种重组克隆子.2种重组子经双酶切后获得的目的片段分别定向克隆入绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1中,构建重组表达载体,并对其进行PCR、限制性内切酶酶切分析和测序鉴定,结果表明,成功构建了fat-1基因家兔表达载体pEGFP-opfat-1和pEGFP-fat-1,且读码框正确.     

PEG处理对提高一串红种子活力的研究

本文以优，中，劣三个活力不等的一串红种子为材料，研究了PEG不同浓度和不同处理时间对种子发芽率的影响，结果表明，（1）PEG可明显改善中，低活力种子细胞膜透性，显著提高种子发芽率；（2）劣质一串红种子，用25%PEG处理1天或10%处理4天，其发芽率比对照提高16.12倍，19.2倍，中等活力一串红种子用10%PEG处理1天较佳；而优良种子经过处理，反而效果不好。     

布鲁氏菌病活疫苗加改良保护剂冻干后的效果观察

为了提高冻干产品的档次 ,对现有的老式冻干机进行了改造 ,冻干工艺由原来的间接板层冻干改变为直接板层冻干 ,由于冻干工艺的改变 ,使用明胶蔗糖保护剂冻干的布鲁氏菌病活疫苗 (M5株 )物理性状不好 ,出现结晶、不易脱壁、残余水分超标等现象。在原明胶蔗糖保护剂的基础上添加了规程容许的其它保护剂成分后 ,问题得到了解决 ,经活菌计数、残余水分测定、物理性状检查 ,保存 4个月、7个月、12个月后活菌计数等与 2 0 0 2 0 3批布鲁氏菌病活疫苗 (S19号 )比较 ,证明疫苗质量并没有下降。试验成果运用在布鲁氏菌病活疫苗(M5株 ) 2 0 0 2 0 7～ 2 0 0 2 15批的生产中 ,疫苗质量有了明显提高 ,完全达到了《规程》标准     

羔羊睾丸大小对山羊痘细胞苗生产的经济影响

一般常用绵羊羔羊睾丸细胞生产山羊痘细胞苗。在生产过程中选择羔羊的日龄极为重要 ,通过多年的生产实践发现绵羊羔羊的日龄选择应该控制在 3月龄以内 ,睾丸净重为 10～ 2 0g ,可保证细胞生长和形成致密单层 ,毒价较高 ,毒液收获量大 ,经济实用     

几种菌苗的冷冻温度和曲线的试验总结

以前冻干的仔猪副伤寒、猪肺疫、羊M5号等菌苗产品物理性状、残余水分及菌数都不符合规程要求。经过多年的努力摸索 ,找到了一条比较适合冻干条件的冷冻温度和曲线 ,使生产出的冻干菌苗产品大有改观 ,质量完全达到规程要求     

鸽新城疫病原的分离与鉴定

应用SPF鸡胚从送检发病鸽的脑、脾脏组织分离到 6株病毒 ,结合流行病学、临床症状、病理解剖变化、病原分离、鸡胚病变特征、病毒含量测定、分离病毒回归鸽试验、分离病毒电子显微镜形态学观察和HA与HI血清学试验证明近年来新疆鸽群中广泛流行的疫病为鸽新城疫 ,其病原为鸽新城疫病毒。     

猪ATGL基因5′调控区的SNPs检测及生物信息学分析

脂肪甘油三酯水解酶(ATGL)是脂肪组织脂肪动员过程中的水解限速酶,主要催化甘油三酯水解为甘油二酯。研究对金华猪、岔路黑猪、杜洛克、大约克和皮特兰5个猪种ATGL基因其5′调控区1.2 kb的片段进行SNPs检测和生物信息学分析。结果表明:ATGI基因5'调控区存在第-845位G→C和第-854位T→C的连锁突变。序列分析显示该区域可能存在启动子区,且2个突变都会导致其部分潜在转录因子结合位点的产生或消失。采用PCR-RFLP方法检测g-845G→C座位在金华猪、岔路黑猪、杜洛克、大约克和皮特兰中的分布情况,卡方分析结果显示,3种基因型在5个猪种中的分布存在极显著差异(P<0.01),提示不同猪种间脂肪性状的差异可能与ATGL基因5'调控区的基因突变有关。     

湖羊瘦素基因内含子2多态性及其与体重性状的相关性分析

利用测序和PCR-RFLP技术对85只湖羊个体瘦素(leptin)基因第2内含子进行多态性分析,检测到A99G和C150T两个SNPs,两座位的优势基因型均为野生基因型,基因型频率分别为0.7882和0.8000,突变纯合型均未检测到;卡方检验结果表明,两座位的基因型频率处于哈代—温伯格平衡(P＞0.05);统计分析结果表明,A99G和C150T座位的不同基因型与初生重、3月龄体重、6月龄体重之间的相关关系不显著(P＞0.05)。