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猪血凝性脑脊髓炎病毒抗原捕获ELISA诊断方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
采用实验室保存的杂交瘤细胞,通过扩大培养、接种小鼠、收集腹水、腹水纯化等程序得到了猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)单克隆抗体,并对其效价进行了测定.用HEV单克隆抗体作为检测抗体,猪多抗作为捕获抗体,建立了检测HEV的抗原捕获ELISA方法,通过对各步反应条件的优化,最终获得最佳工作条件为:猪多抗1:2 000稀释,单抗1:4 000稀释,酶标抗体为1:4 000稀释.特异性和敏感性试验结果表明:该方法对TGEV、HCV、PEDV和PRV等病毒无特异性交叉反应,其最低检测下线为3.75 mg/L.与RT-PCR方法的对比试验证明,抗原捕获ELISA阳性检出结果与PCR方法相一致.上述结果说明,已成功建立特异、敏感的用于HEV检测的抗原捕获ELISA方法,为临床快速诊断HEV试剂盒的研制奠定了基础. 相似文献
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利用光学显微镜观察、间接免疫荧光(IFA)、Real-time PCR和病毒感染滴度(TCID50)等测定方法,分别从病毒抗原分布、病毒基因组复制水平以及病毒感染滴度变化等方面对猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV-67N)在猪肾上皮传代细胞系(PK-15细胞)上的增殖特性进行了研究。使用HEV-67N株感染24孔细胞培养板内的PK-15细胞,接种剂量为400个TCID50(104.37)/孔,间接免疫荧光检测结果显示,在感染后8h即可检测到被荧光抗体标记的感染细胞,且随着感染时间的延长,出现荧光的细胞数量逐渐增多,至感染后32h,几乎所有的细胞均出现有荧光。Real-time PCR检测结果显示,病毒基因组RNA的复制在感染后32~48h呈快速上升趋势,其基因组拷贝数在感染后48h达到最高值,之后增殖速度减慢,至感染后56h细胞出现CPE。TCID50的测定结果显示,HEV感染滴度的变化趋势与基因组RNA含量的变化相一致,在感染后32~48h增殖速度最快,之后逐渐减缓,至72h病毒感染滴度达到最高。 相似文献
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