鲤鱼蛋白生物活性肽的制备及功能性研究

本文以鲤鱼鱼肉为原料,采用酶解技术制备鲤鱼生物活性肽,研究结果表明：碱性蛋白酶酶用量100U／g,酶作用时间5h,酶解温度50℃,ph值=8．5,鲤鱼鱼肉蛋白肽的得率为63．48％。     

鲤鱼蛋白生物活性肽的制备及功能性研究

本文以鲤鱼鱼肉为原料,采用酶解技术制备鲤鱼生物活性肽,研究结果表明:碱性蛋白酶酶用量100U/g,酶作用时间5h,酶解温度50℃,ph值=8.5,鲤鱼鱼肉蛋白肤的得率为63.48%.     

鲤鱼鱼鳞蛋白的酶解制备工艺及其抗氧化活性

[目的]确定鲤鱼鱼磷蛋白的酶解制备工艺,并分析所得的鱼磷抗氧化肽的抗氧化性能。[方法]以鲤鱼鱼鳞为原料,选用胰蛋白酶考察其加酶量、反应温度、酶解时间、pH、底物浓度等因素对鱼鳞蛋白水解程度的影响,用单因素及正交试验的方法优选出鱼鳞蛋白酶解的最佳条件并测定其抗氧化活性。[结果]试验得到鲤鱼鱼磷抗氧化肽酶法制备的最佳工艺条件为pH 8.4、酶解温度45℃、加酶量4000 U/g、酶解时间3 h、底物浓度15%,此条件下得到的鱼磷抗氧化肽水解度较佳(29.97%),抗氧化能力较好。[结论]胰蛋白酶有溶解鲤鱼鱼鳞蛋白的能力,并且酶解产物的抗氧化活性与水解度有关。     

胃蛋白酶制备鲤鱼鳞胶原肽及其特性研究

以鲤鱼鳞为原料,用胃蛋白酶制备胶原肽。以水解度为指标,采用正交试验的方法对酶解条件进行优化。对制备的胶原肽的抗氧化性、清除羟自由基能力以及清除DPPH的能力进行测定。结果表明：胃蛋白酶水解鲤鱼鱼鳞的最佳水解条件为：底物浓度为8％、酶的添加量为8％、水解温度为35℃、水解时间为48h、此时的水解度为47．06％,且具备以上特性。     

鲢头酶解物对ACE的抑制活性

通过测定鲢Hypophthalmichthys molitrix头酶解物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制率(I),确定了蛋白酶酶解鲢头制取ACE抑制肽(ACEI)的酶种及其最佳酶解工艺条件,并用Sephadex G-15凝胶柱对酶解物进行分离,测定酶解物中ACE抑制肽的相对分子质量分布。结果表明：在胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶和复合风味蛋白酶5种酶中,胃蛋白酶为酶解鲢头制备ACE抑制肽的理想蛋白酶;其最佳酶解工艺条件为温度37℃、pH2．0、酶解时间3h、酶的质量分数为1．4％、底物浓度ω(原料)：ω(水)=1：3,在该条件下得到的酶解物对ACE的抑制活性最强,其I=83．58％;在最佳酶解工艺条件下得到的酶解物经层析分离,在最大洗脱峰处得到的ACE抑制肽抑制活性最高,其I=86．72％,相对分子质量为1096。     

鲤鱼酶解液化技术研究

为了确定木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶酶解鲤鱼的最佳酶解条件及其酶解效果,应用正交试验和对比试验对鲤鱼酶解液化技术进行了研究,并对酶解前后游离氨基酸含量进行了分析。结果表明,胰蛋白酶酶解鲤鱼的最佳酶解条件为:酶用量24 g/kg,酶解温度50℃,pH值7.0,在此条件下酶解3 h后氨基态氮含量为59.2 mg/L;枯草杆菌蛋白酶的最佳酶解条件为:酶用量0.16 g/kg,酶解温度45℃,pH值8.0,在此条件下酶解4 h后氨基态氮含量为44.6 mg/L;木瓜蛋白酶的最佳酶解条件为:酶用量10 g/kg,酶解温度60℃,pH值7.0,在此条件下酶解4 h后氨基态氮含量为102.6 mg/L。枯草杆菌蛋白酶酶解鲤鱼后,游离氨基酸含量由185.91 mg/L增加到779.91 mg/L,增加了76.16%。通过对3种蛋白酶在最佳条件下酶解鲤鱼的比较可知,枯草杆菌蛋白酶酶解效果较好。     

大豆活性肽酶解工艺的研究

采用物理方法与酶解技术相结合水解大豆分离蛋白制备大豆肽。确定了大豆肽的制备工艺参数，即：温度为55℃，pH为8．5，底物浓度为3％，酶与底物比为6％，水解时间为1．0h，此条件下水解度(DH)为92．27％，并分析了各工艺参数对水解效果的影响；微波处理能提高水解度(DH)和氮溶指数(NSI)5％以上。     

鲈鱼活性肽的制备工艺及其体外降血脂活性研究

以海洋鲈鱼为原料,采用胰蛋白酶酶解制备活性肽,以水解度为指标,采用正交试验法对酶解条件进行优化,运用胆酸盐结合试验比较制备的活性肽的体外活性.结果表明,胰蛋白酶酶解鲈鱼蛋白最佳酶解条件为:酶解温度40℃、酶添加量20 000 U/g、pH值8.5、酶解时间5h,此时水解度可达到12.5％;通过胆酸盐结合试验,发现其体外降血脂活性与酶解时间有关,酶解5h的酶解液降血脂活性最高(与降血脂药物考来烯胺相当).     

纳豆芽孢杆菌 NT-6 酶解猪肉骨粉生产抗菌饲用肽的工艺优化

【目的】为提高抗菌脂肽和活性小肽产量，以猪肉骨粉为主要基质，研究利用纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto）NT-6 生产抗菌营养饲用肽，并优化固态发酵和二次酶解工艺条件。【方法】考察固态发酵中肉骨粉与麸皮配比、稻壳添加量、初始基质水分含量和发酵时间对大肠杆菌抑菌率的影响，考察二次酶解中料水比、pH、酶解温度和酶解时间对小肽转化率的影响，通过单因素试验和响应面设计优化固态发酵及二次酶解工艺条件。【结果】最佳发酵工艺为：肉骨粉与麸皮配比 7.96 ∶ 2.04，稻壳添加量 1.58 g，水分含量 59.95%，发酵时间 99.10 h，大肠杆菌抑菌率可达 87.10%；最佳酶解工艺为：料水比 1 ∶ 2.35，pH 8.60，温度 40.48 ℃，酶解时间 2.91 h，小肽转化率可达 21.26%。【结论】优化和明确了 NT-6 发酵酶解肉骨粉生产抗菌饲用肽的最佳工艺参数，为复合型抗菌营养活性饲用肽的商业化应用提供数据。     

沙蚕不同酶解产物抗氧化效果研究

海洋生物蛋白资源是海洋生物资源的重要组成部分，对其进行高值化加工利用是海洋生物技术研究的重要内容，酶解是提高海洋蛋白功能性的有效方式，但酶种类不同,其作用位点不同，可能对酶解产物的活性有一定影响。为了探究了沙蚕不同酶解产物的抗氧化性，采用6种蛋白酶（碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶）酶解沙蚕，测定了不同酶解时间下的水解度、分子量分布、3种自由基（DPPH、O-2·、·OH）的清除率等反映抗氧化水平的指标。结果表明：胰蛋白酶小分子肽得率最高，为70.47%；胃蛋白酶次之，为68.12%。酶解液浓度为5 mg·mL-1时，胃蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解4 h时，DPPH清除率效果较好，分别为90.87%和90.52%。胃蛋白酶酶解3 h时，O-2·清除率效果最佳，为89.78%；木瓜蛋白酶酶解3 h时，O-2·清除率效果次之，为57.99%。碱性蛋白酶酶解4 h和胃蛋白酶酶解2 h时，·OH清除率效果较好，分别为85.07%和83.37%。胰蛋白酶和胃蛋白酶对提高酶解液水解度和小肽生成作用明显，胃蛋白酶的酶解产物对3种自由基清除率较好，更适用于制备沙蚕抗氧化肽。     

米糠蛋白抗氧化肽的制备及初步分离

试验以米糠蛋白为原料,制备米糠蛋白抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为指标,采用正交试验,优化碱性蛋白酶酶解米糠蛋白制备抗氧化肽的工艺条件;采用超滤、SephadesG-25柱层析分离纯化米糠蛋白抗氧化肽。试验结果表明,制备米糠蛋白抗氧化肽的最优工艺条件为：酶解温度45℃,pH9．0,时间60rain,米糠蛋白底物浓度3％,碱性蛋白酶加酶量3000U·g-1。在米糠蛋白酶解产物中,Mrs〈5KDa组分的抗氧化活性最强,其对DPPH自由基清除率为68．7％。通过SephadexG-25凝胶层析柱进一步分离得到4个混合组分,混合组分Ⅱ活性最强,其DPPH自由基清除率为75．83％。     

牡蛎抗氧化活性肽的酶解工艺研究

以木瓜蛋白酶和中性蛋白酶为工具酶,利用正交试验法确定了木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解制备牡蛎抗氧化活性肽的最佳酶解工艺。结果表明：当时间为150min、酶用量为6％、温度为45℃、pH为7．0时,木瓜蛋白酶酶解液的抗氧化活性最强;当时间为110min、酶用量为3％、温度为65℃、pH为6．0时,中性蛋白酶酶解液的抗氧化活性最强。用SephadexG-15葡聚糖凝胶柱层析分析的结果表明,木瓜蛋白酶酶解液中最佳抗氧化活性组分的相对分子质量为1191和826左右,中性蛋白酶酶解液最佳抗氧化活性组分的相对分子质量为1074和735左右,其抗氧化活性峰值与蛋白肽在280nm下的吸收峰值分别相吻合。     

中性蛋白酶分步酶解花生分离蛋白制备花生短肽的研究

【目的】为了充分利用花生榨油之后的副产物,提高产品附加值,建立花生短肽制备工艺,研发功能性花生短肽产品。【方法】通过比较酶种类、底物浓度、酶解温度、酶解时间对水解度与短肽得率的影响,采用二次回归正交旋转组合设计优化分步酶解制备花生短肽的最佳工艺。【结果】中性蛋白酶分步酶解花生分离蛋白制备短肽的最佳工艺参数为：Neutrase水解花生分离蛋白2.04 h后加入Protamex继续酶解1.96 h,Neutrase添加量为5 200 U•g-1底物,Protamex添加量为422.32 U•g-1 底物,水解温度44.83℃,底物浓度8%,在此条件下,短肽得率为83.93%,水解度为38.25%,花生短肽纯度为93.85%±0.44%。经高效液相色谱测定,分子量小于1 000 D的水解产物占98.88%。【结论】采用Neutrase与Protamex分步酶解花生分离蛋白制备花生短肽,与现有碱性蛋白酶酶解制备花生短肽方法相比,避免了后续脱盐步骤,简化了工艺,且具有制备条件温和,DH和TCA-NSI高,纯度高,分子量集中分布于1 000 D以下等特点。     

风味蛋白酶酶解波纹巴非蛤制备小分子肽工艺研究

以波纹巴非蛤为原料,通过风味蛋白酶酶解制备小分子肽,并应用响应面分析法对波纹巴非蛤的酶解条件进行优化,确定酶解波纹巴非蛤制备小分子肽的最佳条件。试验结果表明:酶解温度50℃、酶解时间3.5 h、风味蛋白酶(E)与底物波纹巴非蛤肉(S)的质量比为3.1∶100时,酶解液的小分子肽得率为38.15%,与响应面模型所预测的小分子肽得率39.07%比较接近。     

鲍鱼性腺小肽的制备及抗氧化活性的初步研究

以雄性皱纹盘鲍性腺为原料,建立了蛋白酶酶解制备抗氧化活性蛋白肽的工艺条件．分别对木瓜蛋白酶和中性蛋白酶进行单因素研究,并以二者的复合酶为工具酶进行响应面分析．结果显示,雄性鲍鱼性腺的最优酶解条件为木瓜蛋白酶与中性蛋白酶的比例为1：4、pH=6．6、酶解温度为53．7℃、酶解时间为70．4min．高效液相色谱（HPLC）分析结果表明,酶解液中多肽的分子质量主要分布在1ku以下．制备的酶解液具有较强的清除自由基效果,清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）的EC50值为6．8mg／mL,还原力的AC0.5值为12．87mg／mL．     

豆粕蛋白酶解过程中呈味物质的释放规律

探讨了不同酶解条件对豆粕酶解过程中呈味物质释放规律的影响.结果表明,酶解液中肽态氮的含量随着酶解温度、酶解pH、酶解时间的增加均呈现先增加后降低的趋势.总酸含量的变化受酶解条件的影响较大,酶解3h时糖的释放量最大.高效液相色谱分析结果表明,酶解液中的肽分子量在酶解过程中逐渐降低.氨基酸分析结果显示,酶解后,游离氨基酸和肽态氨基酸含量迅速增加.当酶解工艺为温度50℃、pH=6.5、时间4h时,所得酶解液整体味感较佳,适于做调味基料.     

双酶直接酶解米糠制备短肽的工艺优化

 【目的】建立在中低温度下直接酶解米糠制备短肽的优化工艺。【方法】采用二次回归正交旋转组合设计优化直接酶解米糠制备短肽的工艺条件,其中总糖含量测定采用蒽酮比色法,水解度（degree of hydrolysis,DH）采用pH-stat法,蛋白质回收率采用凯氏定氮法。【结果】确定直接酶解米糠制备短肽最佳工艺条件为：米糠先经糖酶（viscozyme）反应2 h去除糖类杂质,然后用碱性蛋白酶（alcalase）和胰蛋白酶双酶水解,最适pH 8.2,温度45℃,alcalase与胰蛋白酶酶活比59﹕41,总酶活5 750 U/g底物,水解时间3 h。在此条件下,DH为23.04%,蛋白质回收率为84.33%,酸溶性多肽（TCA-SN）为68.40%,短肽分子量主要集中在1 000 D以下。【结论】在中低温和偏中性（pH 8.2）条件下,采用碱性蛋白酶和胰蛋白酶双酶直接酶解米糠制备短肽,与先提取蛋白后酶解制备短肽的方法相比,具有操作步骤简单、蛋白质利用率高等特点,是一种制备米糠肽的新途径。     

藜麦抗氧化肽制备工艺研究

采用酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶对藜麦蛋白提取液进行酶解制得抗氧化肽,通过单因素试验筛选出最佳蛋白酶。以DPPH自由基清除率为指标,通过响应面试验对酶解条件进行优化,并采用HPLC法对酶解液进行氨基酸种类及含量的测定。结果表明,藜麦抗氧化肽的最佳制备工艺为木瓜蛋白酶、酶解pH值6.63、加酶量2.36%、酶解温度58.44℃、酶解时间1.0 h。藜麦抗氧化肽中共含有18种氨基酸,其中丝氨酸的含量最高,为65.46%。     

蚯蚓蛋白酶解工艺及其产物分析

采用Asl.398枯草蛋白酶制备蚯蚓肽,通过单因素与正交试验设计(L9(34)),以氨基氮数,多肽浓度为衡量指标,对最佳酶条件进行筛选研究,并分析了酶解液氨基酸含量和相对分子量的分布。结果表明:最佳酶解条件为pH 6.5、酶浓度为1%、温度50℃反应、时间8 h,在此条件下,酶解蚯蚓蛋白的水解液氨基氮数可以达到16.55 mmol/100 mL,水解液多肽浓度达9.22 mg/mL,酶解液分子量大部分是在5 000以下的多肽、小肽及氨基酸的混合物,其中分子量在220以下的占了72.09%,氨基酸组成平衡,含量丰富,可用来制取新型氨基酸微量元素及小肽添加剂。     

蚯蚓蛋白酶解工艺及其产物分析

采用Asl.398枯草蛋白酶制备蚯蚓肽,通过单因素与正交试验设计(L9(34)),以氨基氮数,多肽浓度为衡量指标,对最佳酶条件进行筛选研究,并分析了酶解液氨基酸含量和相对分子量的分布。结果表明:最佳酶解条件为pH 6.5、酶浓度为1%、温度50℃反应、时间8 h,在此条件下,酶解蚯蚓蛋白的水解液氨基氮数可以达到16.55 mmol/100 mL,水解液多肽浓度达9.22 mg/mL,酶解液分子量大部分是在5 000以下的多肽、小肽及氨基酸的混合物,其中分子量在220以下的占了72.09%,氨基酸组成平衡,含量丰富,可用来制取新型氨基酸微量元素及小肽添加剂。