牡蛎抗氧化活性肽的酶解工艺研究

以木瓜蛋白酶和中性蛋白酶为工具酶,利用正交试验法确定了木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解制备牡蛎抗氧化活性肽的最佳酶解工艺。结果表明：当时间为150min、酶用量为6％、温度为45℃、pH为7．0时,木瓜蛋白酶酶解液的抗氧化活性最强;当时间为110min、酶用量为3％、温度为65℃、pH为6．0时,中性蛋白酶酶解液的抗氧化活性最强。用SephadexG-15葡聚糖凝胶柱层析分析的结果表明,木瓜蛋白酶酶解液中最佳抗氧化活性组分的相对分子质量为1191和826左右,中性蛋白酶酶解液最佳抗氧化活性组分的相对分子质量为1074和735左右,其抗氧化活性峰值与蛋白肽在280nm下的吸收峰值分别相吻合。     

用肌动蛋白基因的PCR-RFLP法鉴别4种双壳类面盘幼体

利用部分肌动蛋白基因为靶序列,以PCR-RFLP技术研究了大连近海同期出现的虾夷扇贝、贻贝、加州扁鸟蛤和东方缝栖蛤4种双壳类幼体的鉴定方法。用保守序列作引物,可扩增出4种贝类的相应片段。用H inf I可将虾夷扇贝和其他3种贝类区分开,而用Taq I可以将4种贝类一一区分出来。     

蔬菜内生菌的分离及其生防功能初探

采用5种分离培养基从油菜和芹菜的茎和叶中分离得到215株内生菌，通过菌块对峙法对其拮抗植物病原真菌的性能进行初步的测定，并对发酵液的拮抗活性进行了进一步的筛选。结果表明，对蔬菜立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、直喙镰孢菌(Fusaritum orthoceras)、苹果黑腐皮壳(Valsa mali)有拮抗作用的菌株有18株，包括10株细菌和8株放线菌。分离自油菜茎的放线菌CHSHl9A有极强的抗立枯丝核菌活性，通过显微镜和电镜下的观察，初步判断为链霉菌；进而对其进行DNA提取，16SrDNA全长扩增和长度为l382bp的序列测定及序列分析证明，CHSHl9A为一株链霉菌Streptomyces sp。     

虾夷扇贝肌动蛋白基因cDNA序列克隆与分析

采用RT-PCR和RACE法从虾夷扇贝闭壳肌中分离和克隆了肌动蛋白基因cDNA全长序列.肌动蛋白基因cDNA全长1775 bp(不包括poly A),5′端非编码区94 bp,3′端非翻译区551 bp,阅读框1131 bp,编码376个氨基酸.在基因组DNA中,该基因被一个内含子分为两段,内含子位于第42和第43个氨基酸之间,长度为2041 bp.系统发育分析显示该肌动蛋白属于α类型.     

牡蛎酶解液的抗氧化活性

检测了牡蛎(Crassotera gigas)木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解液的抗氧化活性。由Sephadex G-15葡聚糖凝胶柱层析分析牡蛎酶解液,得到具抗氧化活性组分的分子量分布。分子量为1191 D和826 D左右的木瓜蛋白酶酶解活性肽组分的自由羟基清除活性最强,当其质量浓度分别为0.184 mg/mL和0.673 mg/mL时,体外自由羟基清除活性分别为53.6%和66.5%;分子量分别为1074 D和735 D左右的中性蛋白酶酶解活性肽的自由羟基清除活性最强,当其质量浓度分别为0.166 mg/mL和0.830 mg/mL时,体外自由羟基清除活性分别57.6%和70.5%。HPLC分析结果表明,木瓜蛋白酶与中性蛋白酶酶解的活性肽组分分别由几种抗氧化肽组成。抗氧化活性最强的木瓜蛋白酶与中性蛋白酶酶解的肽组分在质量浓度为2.5 mg/mL时,活性分别可达83.6%和80.8%。用牡蛎原浆与各酶解液灌胃昆明小白鼠。研究结果表明,用木瓜蛋白酶与中性蛋白酶酶解原液及经超滤纯化的酶解液对小白鼠实施灌胃,其肝脏组织的SOD活力都显著提高(P<0.05);灌胃经超滤纯化的木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解液,小白鼠肝脏组织GSH-PX活力、GSH含量显著提高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。