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几个杏李品种成熟叶片基因组DNA的提取 总被引:7,自引:0,他引:7
用改良的CTAB法提取几个杏李品种成熟叶片的基因组DNA,裂解细胞核前先用洗液排除细胞质中的部分多糖、多酚、丹宁和果胶等物质的干扰;裂解细胞核时,在提取液中加入乙醇进一步去除多糖,结果表明,提取的基因组总DNA的纯度和完整性都较好,OD260/OD280值在1.70-1.93之间,DNA无降解现象,没有多糖污染,可被限制性内切酶消化,所提取的基因组DNA的SRAP扩增条带清晰,多态性好。说明用此方法提取到了质量合格的杏李基因组DNA,可以用于PCR和限制性内切酶分析。 相似文献
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优化醋酸钾(KAC)法提取蚜虫基因组DNA 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]探索一种简便、有效的单头蚜虫基因组DNA提取方法。[方法]以从不同地区采集的桃蚜为试材,采用改进的KAC法和优化的KAC法提取单头桃蚜的基因组DNA,用紫外分光光度计测定所提DNA的浓度(以OD260/280表示),用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测所提DNA的纯度,比较2种方法的提取效果;对优化KAC法所提DNA进行PCR扩增和电泳检测。[结果]优化KAC法提取的单头蚜虫基因组DNA的OD260/280为1.6-1.9,浓度为20-50 ng/g;改进KAC法提取的单头蚜虫基因组DNA的OD260/280为1.4-1.7,浓度为8-25 ng/g;来自同一地方桃蚜的基因组DNA PCR扩增产物的电泳条带基本相同。[结论]优化改进的KAC法提取的桃蚜基因组DNA浓度和纯度均较高。 相似文献
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目前已报道的常见的基因组DNA提取方法有经典酚醇法、盐析法、碘化钾法、煮沸法等,其中酚醇法根据其裂解液的不同又有CTAB、SDS、ROSE等具体方法,本试验对经典的CTAB法进行了改进,从酒精保存的西施舌组织中提取得到质量高的基因组DNA,以此为模板扩增ITS2效果很好。 相似文献
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贝氏肩孔南极鱼基因组DNA提取方法改进的初步研究 总被引:1,自引:1,他引:0
由于南极鱼的体内存在抗冻蛋白,不同于一般鱼类,常规基因组DNA的提取较为困难。为建立南极鱼基因组DNA提取的有效方法,利用贝氏肩孔南极鱼(Trematomus bernacchii)为材料,采用改进的酚 氯仿法提取基因组DNA,与传统酚 氯仿法和快速试剂盒抽提法作对比,并通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计测定、以及PCR扩增等手段进行基因组DNA质量的检测。结果表明:利用改进的基因组DNA提取方法,从贝氏肩孔南极鱼获得的基因组DNA,电泳条带整齐明亮,A260/A280值接近1.80,适合后续的PCR扩增实验,可满足基于PCR技术的相关分子生物学实验需要。 相似文献
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[目的]为辣椒的品种资源鉴定与遗传多样性分析奠定基础。[方法]采用改良的CTAB法对辣椒叶片基因组DNA进行提取,并采用正交试验设计法对辣椒RAPD-PCR反应进行优化筛选。[结果]采用改良的CTAB法获得了高质量的辣椒基因组DNA,用Tris-平衡酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1,V∶V∶V)进行抽提,最后再用氯仿抽提以除去其中含有的酚,避免了对后续PCR扩增的影响。基于一般的RAPD反应程序和调整试验,优化了PCR反应体系。结果表明,在模板20 ng 1.5μl、引物(20μmol/L)1.5μl、dNTPs(2.5 mmol/L)2.2μl、10×Buffer缓冲液(含Mg2+)2.5μl、Taq(5 U/μl)0.35μl条件下扩增效果较好。[结论]建立了最适的辣椒RAPD扩增体系。 相似文献
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采用酚-氯仿法和煮沸法从南疆绒山羊血液和早期胚胎中提取基因组DNA,分别以雄羊和雌羊的血液基因组DNA和早期胚胎基因组DNA(约20~30胚胎细胞)为模板,以AMEL引物进行PCR扩增和电泳分析.结果表明:绒山羊5ng量和10pg量血液基因组DNA经扩增后雌性只得到1条非特异性带,雄性得到1条非特异性带和1条特异性带;超微量血液基因组DNA样本(10pg)经巢式扩增和电泳分析能够鉴定绒山羊性别;32枚绒山羊胚胎鉴定结果,雄雌性别比17/15;移植胚胎产羔雄雌比15/14.采用牙釉质基因(AMEL),经巢式扩增和电泳分析能够鉴定绒山羊性别,并对胚胎无损伤;南疆绒山羊早期胚胎性别鉴定结果与胚胎移植后产羔性别结果对比,雌雄性别比率差异不显著(P>0.05). 相似文献
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2种提取猪肝基因组DNA方法的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]对2种猪肝基因组DNA提取方法,进行比较研究。[方法]分别采用试剂盒法和常规的氯仿/异戊醇抽提法,提取新鲜猪肝基因组DNA,并对其进行综合分析。[结果]试剂盒方法得到的DNA浓度较低,其OD260nm/OD280nm比值达到2.05,虽然蛋白质除的较干净,但是含RNA较高;而氯仿/异戊醇抽提法得到的DNA浓度高,其OD260nm/OD280nm比值1.88,纯度较高,且成本低。[结论]氯仿/异戊醇法对猪肝基因组DNA提取效果优于试剂盒法。 相似文献
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适于AFLP分析的柿树DNA提取方法研究 总被引:3,自引:0,他引:3
对柿基因组DNA的提取方法进行了研究,结果表明,采用提取液中含100mmol/LTris-HCl(pH8 0),20mmol/LEDTA,1 4mol/LNaCl,2%CTAB,1%PVP-40,10mmol/LNa2S2O5及100mmol/Lβ—巯基乙醇(用前加入)的改良CTAB法,可有效去除单宁、酚类、色素等,提取的柿叶片DNA质量和纯度较高,可用于AFLP分析。 相似文献
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大豆种子DNA快速提取方法的改良及应用 总被引:2,自引:0,他引:2
高质量的DNA是进行基因克隆等分子生物学试验的前提条件。因大豆种子中蛋白质和油脂含量丰富,利用传统方法提取DNA质量很难达到试验要求。研究在SDS提取液的基础上,通过添加表面活性剂NP-40和Tween-20,优化出一种适合于大豆种子DNA快速提取的方法。优化后的SDS方法提取的DNA质量较高,OD260/OD280在1.809~1.916之间,无蛋白质和RNA污染。对该方法提取的DNA进行了基因克隆和分子标记的试验验证,结果表明,它们能够用于大豆基因克隆、分子标记。 相似文献
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适于AFLP分析的核桃幼叶DNA提取方法 总被引:19,自引:0,他引:19
以核桃幼叶为材料,采用改良CTAB法对核桃DNA提取进行了研究。经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测,在CTAB提取液中添加3%PVP40、50mmol/Lβ-巯基乙醇和10mmol/LNa2S2O5,能得到高纯度的总DNA,OD260/OD280在1 8~2 0之间,蛋白、多糖、RNA等去除较彻底,适于AFLP分析。 相似文献
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实验运用改良的SDS碱裂解法对30株镰刀菌基因组DNA进行了抽提,并对rDNA ITS区域进行了特异性扩增。结果表明:被测菌株DNA片段大于20 kb,其OD260/OD280大都在1.6~2.0之间,可见用改进的方法抽提的基因组DNA比较完整,纯度较高。实验采用对镰刀菌属有特异性的寡聚核苷酸为引物,对镰刀菌基因组rDNA基因进行扩增,该引物可以扩增出18S、28S部分片段及ITS区域,电泳检测其片段大小在1 041~1 135 bp之间,且特异性良好,为进一步进行RFLP及核苷酸序列分析奠定了基础。 相似文献
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成熟石榴叶片DNA提取方法研究 总被引:4,自引:0,他引:4
[目的]为了从成熟石榴叶片中提取高质量、高产量的基因组DNA。[方法]针对成熟石榴叶片含多糖、多酚的特性,用改良CTABI及改良CTABⅡ法分别提取2个品种(墨石榴和青皮软籽石榴)的成熟石榴鲜叶、冻叶、干叶基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、酶切鉴定。【结果]改良CrABⅡ法提取的基因组DNA电泳时点样孔干净,无拖带,OD260nm/OD280nm为1.7—1.9,酶切完全,其质量、产量都高于改良CTABI法。[结论]改良CTABⅡ法是提取成熟石榴叶片中高质量、高产量基因组DNA的有效方法。 相似文献
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李果实高质量RNA提取方法的比较和优化 总被引:2,自引:0,他引:2
李果实富含酚类和多糖,成熟李果实的总酚和总糖含量分别可达140.28μg/g和80.75mg/g,因此常规方法不能有效提取其RNA以进行分子生物学研究。比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的Trizol法、改良的CTAB法和高氯酸盐法提取李果实RNA的效果,结果表明高氯酸盐法效果较好。根据李果实材料的特点,进一步优化了高氯酸盐法,包括用0.1mol/LTris-硼酸缓冲液(pH7.4)取代0.3mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.3);提取缓冲液中β-巯基乙醇的浓度由1%提高到2%,可溶性PVP的浓度由8.5%降低至1%;联合使用10%乙醇和醋酸钾以除去多糖;用12000×g离心替代使用填充有玻璃丝的Centriflo柱实现分离提取缓冲液中杂质的目的等。在230、260和280nm下测定所提取RNA的吸光值,并用提取的RNA反转录后扩增β-actin基因片段验证RNA的质量,结果表明:用优化了的高氯酸盐法提取李果实的RNA完整性好,杂质少,得率较高,适用于RT-PCR等后续实验,并且也适合提取其他富含酚类物质或多糖果实的RNA。 相似文献