| 李果实高质量RNA提取方法的比较和优化 |
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| 引用本文： | 邵毅,罗云波,张京声,陈安均,朱本忠.李果实高质量RNA提取方法的比较和优化[J].北京林业大学学报,2010,32(1):57-62. |
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| 作者姓名： | 邵毅 罗云波 张京声 陈安均 朱本忠 |
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| 作者单位： | 中国农业大学食品科学与营养工程学院 |
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| 基金项目： | “十一五”国家科技支撑计划重点项目(2006BAD22B01);;国家自然科学基金项目(30600421) |
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| 摘 要： | 李果实富含酚类和多糖,成熟李果实的总酚和总糖含量分别可达140.28μg/g和80.75mg/g,因此常规方法不能有效提取其RNA以进行分子生物学研究。比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的Trizol法、改良的CTAB法和高氯酸盐法提取李果实RNA的效果,结果表明高氯酸盐法效果较好。根据李果实材料的特点,进一步优化了高氯酸盐法,包括用0.1mol/LTris-硼酸缓冲液(pH7.4)取代0.3mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.3);提取缓冲液中β-巯基乙醇的浓度由1%提高到2%,可溶性PVP的浓度由8.5%降低至1%;联合使用10%乙醇和醋酸钾以除去多糖;用12000×g离心替代使用填充有玻璃丝的Centriflo柱实现分离提取缓冲液中杂质的目的等。在230、260和280nm下测定所提取RNA的吸光值,并用提取的RNA反转录后扩增β-actin基因片段验证RNA的质量,结果表明:用优化了的高氯酸盐法提取李果实的RNA完整性好,杂质少,得率较高,适用于RT-PCR等后续实验,并且也适合提取其他富含酚类物质或多糖果实的RNA。
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| 关 键 词： | RNA提取 高氯酸盐 李果实 酚 糖 |
| 收稿时间： | 1900-01-01 |
Comparison and improvement of extraction methods for high-quality RNA from plum fruits |
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| SHAO Yi,LUO Yun-bo,ZHANG Jing-sheng,CHEN An-jun,ZHU Ben-zhong.Comparison and improvement of extraction methods for high-quality RNA from plum fruits[J].Journal of Beijing Forestry University,2010,32(1):57-62. |
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| Authors: | SHAO Yi LUO Yun-bo ZHANG Jing-sheng CHEN An-jun ZHU Ben-zhong |
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| Institution: | College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing, 100083, P. R. China. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RNA extraction perchlorate plum fruit polyphenol polysaccharides |
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