不同气体组分中臭氧浓度衰减速率初探

在(20±0.5)℃条件下,将设定的6种不同气体组分中通入一定量的臭氧,用磺-碘化钾吸收、硫代硫酸钠滴定法测定臭氧浓度的变化,并确定衰减速率.结果表明,在N2和4.4%CO2 95.6%N2中,臭氧浓度的衰减速率显著低于供试的其他4种气体组分(3.5%O2 99.5%N2:60%O2 94.0%N2;3.1%O2 4.4%CO2 92.5%N2;大气中的空气)中的衰减速率.     

番茄果实成熟关键调控因子MADS-RIN的研究进展

果实的成熟过程涉及一系列的生理生化变化,如色素的积累,果实的软化、香气和风味物质的形成等。这一过程在分子层面上受到多基因形成的复杂网络的调控,由许多转录因子单独或协同调控实现。为了清晰表述LeMADS-RIN的研究进展,首先对MADS-RIN做了简要介绍,然后论证了LeMADS-RIN是番茄果实成熟过程中关键调控因子,再对LeMADS-RIN影响果实成熟过程的许多生理生化过程和代谢途径进行了详细的归纳分析,如乙烯的生物合成、糖代谢、脂类代谢、色素形成、细胞壁代谢等。之后对LeMADS-RIN的调控模式的相关研究做了系统的回顾总结,随着RIN调控因子以及调控模式研究的深入,依赖于RIN调控而影响果实成熟的网络得到了进一步完善。笔者通过约60篇文献论证了果实成熟关键调控因子LeMADS-RIN对果实成熟调控的重要意义及相关的研究进展,最后对其研究前景提出了展望。     

钙与钙调素对番茄果实乙烯生物合成和信号转导基因表达的调控

为了研究CaM和Ca^2 在调控乙烯生物合成和信号转导组分基因表达中的相互关系，利用272mmol／L CaCl2及272mmol／L CaCl2 100μmol／L W5(或W7)处理绿熟期番茄果实圆片，然后采用无菌培养的方法在20℃的条件下进行培养。结果表明：CaCl2处理能够抑制番茄果实圆片的乙烯生成，抑制LeACO1，NR，LeERF2基因的表达，而CaCl2 W5(或W7)能消除Ca^2 对果实圆片乙烯生成及LeACO1，NR，LeERF2基因的表达的抑制作用，但CaCl2和CaCl2 W5(或W7)处理均对LeACS2基因表达影响不明显。以上研究结果表明外源钙处理对乙烯生物合成和信号转导途径中相关基因表达的影响可能与CaM有关。     

钙和ABA在番茄果实乙烯生物合成中的相互作用

研究了钙和ABA对不同成熟阶段和不同成熟模式番茄(Lycopersicon esculentum cv．Lichun)果实乙烯生成的影响，分析两者在乙烯生物合成系统中的相互作用。普通番茄绿熟果实组织圆片在用100μmol／L ABA和100mmol/L钙处理后，乙烯生成均很快增加。当用这两种试剂同时处理番茄果实圆片时，乙烯生成增加量明显比单一处理增加量大，表明两者在对绿熟番茄果实乙烯生成的影响中有协同作用关系。钙离子鳌合剂EGTA(乙二醇双乙胺醚-N，N’-四乙酸)对乙烯生成有抑制作用，用ABA和EGTA同时处理番茄圆片时，乙烯的生成量比EGTA单一处理的生成量要高。当用这些试剂处理未成熟番茄果实则产生不同的效果，ABA明显抑制乙烯生成，而钙却依然促进乙烯的生物合成，ABA和钙同时处理果实时，乙烯生成量介于二者单一处理之间，表明ABA和钙在未成熟番茄果实乙烯生成中表现出相互抑制作用。在转反义ACS番茄中，ABA和钙抑制未成熟果实的乙烯生成，而都促进了绿熟果实的乙烯生成。这表明ABA和钙在番茄果实不同成熟阶段和不同成熟模式的乙烯生物合成过程中有着不同的相互作用关系。     

实时荧光定量PCR方法检测大肠杆菌O157:H7

针对大肠杆菌(Escherichia coli )O157:H7的致病基因eae设计了特异性引物，并用荧光染料SYBR GreenⅠ 进行了实时定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）。熔解曲线显示产物特异性较强，无非目的条带和二聚体产生。并对反应程序进行了优化，确定了最佳的反应程序，最终在合适的模板浓度内得出了标准曲线。结果显示Real-time PCR 比普通PCR灵敏1 000倍。     

转基因（反义ACS和反义Nr）番茄伤流中植物激素的运输＊

以转反义ACS（ACC合成酶）和反义NR（乙烯受体蛋白）基因番茄和普通番茄（Lycopersicon escclentum Mill．）作为试材，通过ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）方法研究了抑制乙烯合成的外源基因转入番茄后，伤流中植物激素的变化。发现转基因番茄和普通番茄在盛花期和盛果期伤流中各种植物激素的含量变化不显著；而到了成熟期伤流中IAA、GA，和CTKs（细胞分裂素）仍然没有显著变化，但转基因番茄伤流中ABA含量与普通番茄相比却显著减少，说明ABA和乙烯对番茄成熟衰老的控制是共同起作用的，乙烯释放量的改变和信号转导途径的抑制都会影响ABA的伤流运输。     

番茄中反义ACC合成酶基因的导入与乙烯生物合成的控制

利用农杆菌ＬＢＡ４４０４携带反义ＡＣＣ合成酶基因和卡那霉素抗性基因，采用叶盘法转化番茄栽培品种“丽春”子叶，通过组织培养获得了能在卡那霉素培养基上生长的再生植株并进一步培养获得了延缓成熟和衰老的番茄果实。经过ＤＮＡ杂交和ＲＮＡ杂交检测，证明反义ＡＣＣ合成酶基因已插入番茄基因组中，并顺利地表达。     

弹性蛋白酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

本研究以一株产弹性蛋白酶的铜绿假单胞菌基因组DNA为模板，经PCR扩增得到的弹性蛋白基因，与GenBank中的序列对比发现同源性为99%。将弹性蛋白酶基因连入到表达载体pPIC3.5K中，经过酶切和测序鉴定证实弹性蛋白酶基因已插入到载体启动子下游，成功构建了质粒pPIC3.5K/PAE。将pPIC3.5K/PAE线性化，通过电转化将目的基因转入毕赤酵母KM71中，利用MD培养基筛选到近400个转化子，再经G418抗性的筛选，获得48株含高拷贝的重组毕赤酵母转化子并用PCR和弹性蛋白平板验证。经过甲醇诱导表达得到高表达的重组酵母菌株，酶活为1060U/mL是出发菌株的26倍。本研究成功克隆到铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因,为实现活性弹性蛋白酶的高效表达奠定了基础。     

干旱和乙烯介导下番茄生长生理反应及NR基因的表达

通过干旱与乙烯介导下的番茄幼苗三重反应、植株的生理变化、幼苗生长表现及NR基因表达的研究,探讨干旱对乙烯信号转导的影响。结果表明:干旱诱导ABA和乙烯的产生,因而表现番茄幼苗三重反应;ABA又强烈地诱导乙烯受体蛋白NR基因的表达,促进了乙烯信号的转导;继而发生一系列与乙烯处理相同的生理、生长反应———细胞膜透性、蒸腾作用、呼吸作用和气孔导度增强,植株叶片黄化、衰老和脱落。干旱造成的危害与ABA诱导的NR基因的表达有密切关系。     

水杨酸对NR基因的表达和乙烯信号转导的影响

通过水杨酸与乙烯介导下番茄NR基因的表达、植株生理的变化、幼苗三重反应和幼苗生长表现,探讨了水杨酸对乙烯信号转导的影响。结果表明:水杨酸对野生型番茄植株的影响有双重作用。低浓度对植株有促进生长的作用,使黄化苗下胚轴伸长和维持正常的实生苗叶片细胞膜透性,促进根系的生长;较高浓度(≥100μmol·L~(-1))则促进幼苗表现三重反应,即诱导乙烯的合成,从而诱导NR基因的表达,使植株细胞膜透性增加、植株蒸腾作用和呼吸作用显著降低、气孔关闭(水杨酸处理后24h),最终番茄植株表现出叶片黄化等症状。乙烯不敏感型NR突变体番茄植株在高浓度处理时无外部受害症状,细胞中NR基因的表达被显著地抑制。可见抑制番茄NR基因的表达,增强了植株的抗性。