miR172超表达载体的构建及其在micro-Tom番茄中的遗传转化

为了进一步阐明mi RNA在番茄不同生长发育阶段尤其是在果实成熟阶段的调控途径,利用聚合酶链式反应（PCR）从番茄（Solanum lycopersicum）的c DNA克隆出mi R172基因核心片段,将该基因片段,以及p CAMBIA1300-221载体通过特异性的限制性内切酶双酶切,然后将mi R172片段正向连接到载体上,转化大肠杆菌Trans5α,鉴定重组质粒正确后,利用冻融法将重组载体转入农杆菌EHA105中。再次回转大肠杆菌验证获得的重组载体,通过PCR以及双酶切鉴定是否符合预期结果,将测序结果与NCBI上的基因序列相比较,同源性高达100%。结果成功构建了适用于番茄农杆菌遗传转化的植物表达载体,继续进行转基因植株的培育和鉴定。为通过mi R172基因进一步研究果实成熟衰老机理奠定了物质基础。     

绞股蓝粗提物抗氧化作用的研究

绞股蓝具有很强的抗氧化能力,为了确定绞股蓝抗氧化过程中起主要作用的功能成分,对绞股蓝进行初步分离、提取,并研究各提取片段的体外抗氧化活性。实验数据显示,在绞股蓝3种相提取物中,乙酸乙酯相在试验的浓度范围内所具有的抗氧化活性最强,是绞股蓝抗氧化作用的主要成分。     

番茄果实成熟关键调控因子MADS-RIN的研究进展

果实的成熟过程涉及一系列的生理生化变化,如色素的积累,果实的软化、香气和风味物质的形成等。这一过程在分子层面上受到多基因形成的复杂网络的调控,由许多转录因子单独或协同调控实现。为了清晰表述LeMADS-RIN的研究进展,首先对MADS-RIN做了简要介绍,然后论证了LeMADS-RIN是番茄果实成熟过程中关键调控因子,再对LeMADS-RIN影响果实成熟过程的许多生理生化过程和代谢途径进行了详细的归纳分析,如乙烯的生物合成、糖代谢、脂类代谢、色素形成、细胞壁代谢等。之后对LeMADS-RIN的调控模式的相关研究做了系统的回顾总结,随着RIN调控因子以及调控模式研究的深入,依赖于RIN调控而影响果实成熟的网络得到了进一步完善。笔者通过约60篇文献论证了果实成熟关键调控因子LeMADS-RIN对果实成熟调控的重要意义及相关的研究进展,最后对其研究前景提出了展望。     

钙与钙调素对番茄果实乙烯生物合成和信号转导基因表达的调控

为了研究CaM和Ca^2 在调控乙烯生物合成和信号转导组分基因表达中的相互关系，利用272mmol／L CaCl2及272mmol／L CaCl2 100μmol／L W5(或W7)处理绿熟期番茄果实圆片，然后采用无菌培养的方法在20℃的条件下进行培养。结果表明：CaCl2处理能够抑制番茄果实圆片的乙烯生成，抑制LeACO1，NR，LeERF2基因的表达，而CaCl2 W5(或W7)能消除Ca^2 对果实圆片乙烯生成及LeACO1，NR，LeERF2基因的表达的抑制作用，但CaCl2和CaCl2 W5(或W7)处理均对LeACS2基因表达影响不明显。以上研究结果表明外源钙处理对乙烯生物合成和信号转导途径中相关基因表达的影响可能与CaM有关。     

转基因（反义ACS和反义Nr）番茄伤流中植物激素的运输＊

以转反义ACS（ACC合成酶）和反义NR（乙烯受体蛋白）基因番茄和普通番茄（Lycopersicon escclentum Mill．）作为试材，通过ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）方法研究了抑制乙烯合成的外源基因转入番茄后，伤流中植物激素的变化。发现转基因番茄和普通番茄在盛花期和盛果期伤流中各种植物激素的含量变化不显著；而到了成熟期伤流中IAA、GA，和CTKs（细胞分裂素）仍然没有显著变化，但转基因番茄伤流中ABA含量与普通番茄相比却显著减少，说明ABA和乙烯对番茄成熟衰老的控制是共同起作用的，乙烯释放量的改变和信号转导途径的抑制都会影响ABA的伤流运输。     

钙和ABA在番茄果实乙烯生物合成中的相互作用

研究了钙和ABA对不同成熟阶段和不同成熟模式番茄(Lycopersicon esculentum cv．Lichun)果实乙烯生成的影响，分析两者在乙烯生物合成系统中的相互作用。普通番茄绿熟果实组织圆片在用100μmol／L ABA和100mmol/L钙处理后，乙烯生成均很快增加。当用这两种试剂同时处理番茄果实圆片时，乙烯生成增加量明显比单一处理增加量大，表明两者在对绿熟番茄果实乙烯生成的影响中有协同作用关系。钙离子鳌合剂EGTA(乙二醇双乙胺醚-N，N’-四乙酸)对乙烯生成有抑制作用，用ABA和EGTA同时处理番茄圆片时，乙烯的生成量比EGTA单一处理的生成量要高。当用这些试剂处理未成熟番茄果实则产生不同的效果，ABA明显抑制乙烯生成，而钙却依然促进乙烯的生物合成，ABA和钙同时处理果实时，乙烯生成量介于二者单一处理之间，表明ABA和钙在未成熟番茄果实乙烯生成中表现出相互抑制作用。在转反义ACS番茄中，ABA和钙抑制未成熟果实的乙烯生成，而都促进了绿熟果实的乙烯生成。这表明ABA和钙在番茄果实不同成熟阶段和不同成熟模式的乙烯生物合成过程中有着不同的相互作用关系。     

番茄果实中LeERF1、LeERF2基因的克隆及序列分析

乙烯反应元件结合蛋白属于植物特有的一个转录因子家族，这个家族保守的DNA结合域称为ERF结构域。根据对番茄(Lycopersicon esculentum)和其它植物物种中EREBP基因家族的同源性比较，在保守区(ERF区域)设计合成一对简并引物，通过RT-PCR扩增得到一个114bp的片段，用此片段作探针筛选番茄cDNA文库(粉红期)，得到两个基因LeERF1和LeERF2。通过BLAST工具在GenBank中搜索表明，LeERF1和LeERF2基因属于EREBP家族，LeERF1与EREBP-4和DDTFR10／A在氨基酸水平上的序列相似性为35％，LeERF2与EREBP-3和p65在氨基酸水平上的序列相似性为46％，是新的基因。LeERF1和LeERF2的核酸序列在GenBank发表，登录号分别为AY077626和AY275554。     

从转基因大豆油看中国转基因食品市场的问题与对策

一、转基因食品的概念及作用 通过基因工程手段将一种或几种外源性基因转移至某种特定生物体（动、植物和微生物等）中,并使其有效地表达出相应的产物（多肽或蛋白质）,这样的生物体直接作为食品或以其为原料加工生产的食品就叫做转基因食品.     

壳聚糖涂膜藕带的护色工艺研究

以藕带为试材,研究了维生素C、植酸、亚硫酸氢钠和亚硫酸钠4种护色剂对藕带的护色效果及藕带品质的影响;比较分析了烫漂灭酶、浸泡和真空渗透工艺对壳聚糖涂膜藕带的护色效果.结果表明:藕带的最佳护色工艺为真空渗透护色保鲜液,保鲜液的成分为:0.2％维生素C+0.6％植酸+0.2％柠檬酸+1％氯化钙,该工艺既能达到优良的护色效果,同时可以保持藕带的脆度和硬度;保鲜液处理后,涂膜2％壳聚糖溶液,保鲜膜包裹,利于藕带的持久护色.     

番茄转录因子LeMADS-MC正反义植物表达载体的构建

为进一步阐明转录因子家族MADS—Box对番茄果实成熟的调控途径，本研究利用聚合酶链式反应技术（PCR）从番茄（Solariumlycopersicum）cDNA中克隆LeMADS-MC基因和LeMADS-antiMC基因核心片段，将这2个基因通过酶切分别正向连接到pCAMBIA1300-221载体和反向连接到pCXSN载体中，并用冻融法将重组载体导入农杆菌中。获得的重组载体分别通过PCR及酶切鉴定符合预期结果且测序结果与NCBI同源性高达100％。结果成功构建了适合于番茄农杆菌遗传转化的植物表达载体，为下一步通过LeMADS-MC基因研究果实成熟衰老机理奠定了物质基础。