猪丁型冠状病毒在悬浮培养猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性分析

旨在分析猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)在悬浮培养的猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性,为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供细胞材料。采用逐步降血清法优化LLC-PK1细胞悬浮培养工艺;利用有限稀释法筛选PDCoV适应性细胞株;利用间接免疫荧光法鉴定PDCoV对LLC-PK1细胞的感染性;分别对PDCoV接种LLC-PK1悬浮细胞的初始密度、MOI、收毒时间、TPCK胰酶浓度等参数进行优化,确定最佳悬浮培养条件。成功筛选出可高效增殖PDCoV的单克隆悬浮细胞株LLC-PK1Sa,且利用其增殖的PDCoV可特异性的感染LLC-PK1细胞;PDCoV按MOI为10^-3接种于密度为2×10⁶ cells·mL^-1的LLC-PK1Sa细胞,当TPCK胰酶终浓度达到7.5 μg·mL^-1时,接毒后48 h收获的病毒液滴度最高。本研究首次实现了PDCoV在LLC-PK1Sa悬浮细胞中的高效增殖,并对悬浮培养条件进行了初步优化,可为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供理论参考。     

台风“浣熊”过程分析

利用常规气象和卫星资料,对0801号台风“浣熊”的特点及环流形势与台风路径、强度变化的关系进行了分析。该结果可为今后台风路径、强度及登陆地点等的预报提供参考。     

灰色理论在肇庆地区干旱预测中的应用

采用1979~2008年肇庆地区近30年的降水资料,根据《干旱评估标准》,确定肇庆干旱的灾变数据序列,建立GM（1,1）模型,采用最小二乘法求解参数a、b,得到肇庆地区GM（1,1）数列预报模型。经后验差方法检验,预测精度为＂好＂等级,故可用该模型对肇庆地区未来20年可能发生干旱的年份进行预测。预测结果显示,肇庆地区将在2009~2010、2013~2014、2018~2019、2022~2023、2028~2029年期间发生干旱。     

猪细小病毒感染PK-15细胞抗病毒相关因子转录变化的分析

为了解猪细小病毒(PPV)感染后引起干扰素及其相关细胞因子的反应,探讨宿主一病毒之间的作用关系,作者运用荧光定量PCR技术,测定和分析PPV感染PK-15细胞引起的病毒DNA量的变化和细胞因子IFN-β、IFN-γ、IFNAR-1、IFNAR 2、MHC-I、MHC一Ⅱ、MX1、iNOS、2-5AS、RNase L和IRF-3的转录水平.结果显示,PPV感染PK-15细胞12h病毒开始大量迅速增殖,48 h达到最高峰;PPV感染后可引起PK-15细胞中IFN-β、IFN-γ、IFNAR-1、IFNAR-2、MHC-I、MHC-Ⅱ、Mxl、iNOS、2-5AS、RNase I.和IRF-3的转录量显著增加,其中Mχ1基因在24 h转录量达到8 423倍.猪细小病毒感染可引起PK-15细胞抗病毒相关因子转录增加.     

一起鸡传染性支气管炎的RT-PCR诊断

2008年11月,河南焦作某鸡场发生一起疑似鸡传染性支气管炎的疫情。根据鸡传染性支气管炎S1基因序列设计、合成1对引物,应用RT-PCR技术对病死鸡的气管和肾脏等组织进行RT-PCR扩增,扩增出预期目的基因。结合临床症状和病理剖检变化初步诊断为鸡传染性支气管炎。     

小鹅瘟冻干卵黄抗体被动免疫持续期研究

为探索小鹅瘟冻干卵黄抗体的被动免疫保护期及抗体效价与免疫持续期的平行相关性,试验采用3种琼扩效价分别为1∶16、1∶32和1∶64的实验室试制冻干卵黄抗体各3批,分别接种1日龄、4日龄健康易感雏鹅,1日龄雏鹅每只注射0.5 m L,4日龄雏鹅每只注射1.0 m L,并于注射后0 h、12 h、24 h、120 h、144 h、168 h、192 h、216 h对试验组和攻毒对照组接种小鹅瘟强毒W株,每只0.2 m L(含100 LD_(50))。结果显示:不同效价的卵黄抗体免疫后144 h内攻毒,卵黄抗体均可对雏鹅提供100%的免疫保护,雏鹅日龄越小,相对保护率越高,卵黄抗体琼扩效价越高,对雏鹅的免疫保护持续期越长。     

白细胞介素32研究进展

白细胞介素32（IL-32）是近年发现的一种细胞因子,主要由淋巴细胞,自然杀伤细胞,上皮细胞和外周血单核细胞分泌。IL-32具有特异的结合蛋白酶3,并与肽聚糖的胞壁酰二肽、核苷酸结合寡聚结构域具有协同作用,通过两条通路进行信号转导,决定了其前炎性细胞因子的特性,与多种疾病有密切相关,在治疗炎性疾病方面具有重要的临床意义。因此了解IL-32的背景及研究现状,已日益迫切。此文综述了IL-32的来源,结合蛋白及核酸结构,信号转导及协同作用,重点介绍了IL-32的生物学功能和与疾病的相关性。     

精液中猪细小病毒DNA三种提取方法效果比较

猪精液中含有高浓度的蛋白质,因此提取高纯度DNA较为困难;试验分别用水煮法、异硫氰酸胍法和Trizol法三种方法对连续稀释梯度猪精液提取猪细小病毒DNA,应用Taqman荧光定量PCR技术评价提取效果并加以对比。结果发现Trizol法可以提取出高纯度的DNA,但因Trizol试剂价格昂贵,不适用临床检测;比较另外两种方法,水煮法较异硫氰酸胍抽提法更为有效,是一种迅速、简便、经济、高效的DNA提取方法,适合于临床大量样品的检测。     

PPV感染PK-15细胞后对4种抗病毒细胞因子mRNA转录时相的影响

【目的】了解猪细小病毒(PPV)感染对抗病毒相关细胞因子mRNA转录时相的影响,探讨宿主-病毒之间的作用关系。【方法】对PPV感染PK-15细胞的病变进行了显微观察,运用荧光定量PCR技术,测定和分析PPV感染PK-15细胞后,细胞病毒DNA含量及巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)、转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸甘油酸激酶1(PGK1)和MURR1等细胞因子mRNA相对表达量的变化。【结果】PPV可以快速诱导PK-15细胞产生细胞病变。感染后1 h即可检测到PPV DNA,随着时间的延长,PPV DNA含量逐渐增加,并于48 h时达到峰值,相对含量为1 800左右。MIP-1α和PGK1 mRNA的相对表达量在感染后2 h显著增加,之后下降;TGF-β1 mRNA的相对表达量在72 h时显著增加;MURR1 mRNA的相对表达量在24 h时显著增加,48 h后下降。【结论】PPV感染可引起PK-15细胞抗病毒因子mRNA表达水平升高。     

猪圆环病毒2型ORF2可溶性表达条件的优化

为探索猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因在大肠杆菌中高效可溶性表达的条件,扩增ORF2基因构建重组表达质粒p ET30a-ORF2,转化入大肠杆菌BL21(DE3)感受态获得重组表达菌;通过改变菌体培养温度和时间、诱导温度和时间、溶解氧量、IPTG及CaCl_2浓度,实现目的蛋白高效可溶性表达。结果表明:重组表达质粒p ET30a-ORF2经酶切及测序证明构建正确,重组表达质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中实现可溶性表达,其最佳表达条件为:在500 mL培养瓶中加入200 mL LB卡那霉素阳性培养基,菌体于37℃培养4 h后,分别加入IPTG及Ca Cl2至终浓度为0.6 mmol/L及0.06 mol/L,30℃诱导表达4 h;重组Cap蛋白的最高表达量占总蛋白的55.9%。说明优化后可实现猪圆环病毒Cap蛋白的可溶性表达,这为进一步研究该蛋白的结构及其生物学特性奠定了基础。