鸡新城疫病毒F基因疫苗接种剂量的研究

本研究以新城疫病毒 Ｆ 基因的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 与真核表达载体ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 重组，构建了新城疫病毒 Ｆ基因疫苗。采用不同剂量接种 Ｓ Ｐ Ｆ鸡后，通过抗体监测和强毒攻击试验，分析了其诱导的体液免疫应答及免疫保护作用。结果表明，接种剂量为１００μｇ、２００ μｇ 时，试验鸡在免疫后第 ２ 周出现较明显的抗体反应，接种剂量为 １０ μｇ 时抗体变化不明显。以标准强毒 Ｆ４８ Ｅ９ 攻击后，空白对照组及接种剂量为１０ μｇ 和１００ μｇ 组的鸡只全部发病死亡，未获得免疫保护；而２００ μｇ 组鸡只全部存活，获得完全免疫保护。表明基因免疫效果与接种的剂量有密切的关系。     

新城疫病毒F基因疫苗接种剂量的研究

以新城疫病毒F基因的cDNA与真核表达载体pcDNA3重组 ,构建了新城疫病毒F基因疫苗。采用不同剂量接种SPF鸡后 ,通过抗体监测和强毒攻击试验 ,分析了其诱导的体液免疫应答及免疫保护作用。结果表明 ,接种剂量为1 0 0 ,2 0 0ug时 ,试验鸡在免疫后第 2周出现较明显的抗体反应 ,接种剂量为 1 0ug时抗体变化不明显。以标准强毒F4 8E9攻击后 ,空白对照组及接种剂量为 1 0 ,1 0 0ug组的鸡只全部发病死亡 ,未获得免疫保护 ;而 2 0 0ug组鸡只 30 %存活 ,获得部分免疫保护。表明基因免疫效果与接种的剂量有密切的关系     

新城疫病毒F基因与传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒免疫保护产生时间的测定

为了检测表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因和新城疫病毒F基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB-F)的免疫产生期，将60只30日龄SPF鸡随机分为6组，以5d为间隔在试验开始第0、5、10、15、20d时选取10只进行免疫，经翅内侧皮下注射接种1000PFU rFPV-gB-F，另外的10只作为对照。在第1组免疫后的第25d，将不同日龄免疫组和对照组试验鸡再随机分为2组，分别用传染性喉气管炎病毒WG株和新城疫病毒F48E9株强毒攻击。结果表明，在rFPV-gBF免疫接种后第10d时，可以诱发抗gB的抗体，保护免疫鸡抵抗传染性喉气管炎病毒WG株强毒和新城疫强毒的攻击。由此确定，rFPVgB-F免疫产生的时间是接种后第10d。     

脂质体介导鸡新城疫病毒核酸免疫研究

用天然磷脂脂质体包囊鸡新城疫病毒血凝素神经胺酸酶（ＨＮ）基因的真核表达质粒ｐｃＨＮＭ ＤＮＡ,免疫５周龄雏鸡,１周免疫鸡血清中的特异性ＨＩ抗体开始升高,至第６周空白对照组抗体为２．３０ｌｏｇ２,裸ＤＮＡ免疫组为４．０９ｌｏｇ２,脂质体ＤＮＡ免疫组为４．７５ｌｏｇ２;用新城疫强毒Ｆ４８Ｅ９攻击后,未免疫组鸡的存活率为２７．２８％,裸ＤＮＡ免疫组存活率为８１．８２％,脂质体ＤＮＡ免疫组存活率为９０．０     

口服鸡新城疫V4株病毒免疫效果研究

经嗉囊接种１０＾８．５ＥＩＤ５０鸡新城疫Ｖ４株病毒，后第４￣８天，能从粪便中分离出病毒。５周龄鸡拌料一次口服１０＾８．５ＥＩＤ５０鸡新城疫Ｖ４株病毒，半年内ＨＩ抗体平均效价为２＾５左右，用１００ＥＩＤ５０鸡新城疫Ｆ系标准强毒攻击，保护率１００％，健康鸡与免疫鸡混养，１４天后可获得免疫鸡同样高的抗体反应。     

传染性喉气管炎新城疫鸡痘重组病毒免疫效力的研究

在表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gB基因和新城疫病毒(NDV)F基因的重组鸡痘病毒(rF-PV-gB-F)安全性检验合格后,以5.0×101~5.0×104PFU不同含量按0.1mL/鸡的剂量免疫100只30日龄SPF鸡,30d后分组分别用ILTVWG株和NDVF48E9株强毒进行攻击。免疫鸡抗鸡痘病毒抗体都转为阳性,痘反应和接种剂量有关,重组疫苗的最小反应剂量为50PFU。重组疫苗可以诱发对新城疫和传染性喉气管炎的保护,0.1mL/鸡的接种量在500~5000PFU浓度范围内的免疫效果最好,对于ILTV攻击的发病保护率在70%以上,对NDV强毒攻击的抗死亡保护率可以达到80%,这为进一步考察疫苗的免疫效力试验以及进行田间试验奠定了基础。     

复方中药提取物在新城疫B_1株免疫中的免疫增强作用

用自制的中药提取物与新城疫Ｂ１株混合后免疫５５日龄鸡，以血凝抑制试验测定新城疫抗体效价。结果表明，５５日龄鸡的中药提取物最佳用量为１．０ｍＬ，试验组鸡ＮＤ抗体效价明显高于对照组。免疫后６０ｄ用Ｆ４８Ｅ８新城疫强毒进行攻击，试验组的保护率达到１００％，而对照组相对较低。     

鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因免疫的研究

将已经序列测定的鸡传染性支气管炎病毒ＨＢ株的核蛋白基因亚克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３的Ｋｐｎｌ酶切位点。快速筛选鉴定出含有ＨＢ核蛋白基因的重组质粒，经酶切、ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定为正向插入的重组ＨＢ核蛋白基因后，将其命名为ｐｃＤＮＡ－Ｎ。对重组质粒ｐｃＤＮＡ－Ｎ进行大量扩增，应用聚乙二醇方法进行纯化，将纯化后的 ｐｃＤＮＡ－Ｎ按 １００／只免疫１４日龄雏鸡，并以ＰＢＳ免疫作为空白艰照。免疫后的攻毒试验结果表明，在基因免疫组的１０只雏鸡中，有４只雏鸡存活，保护率为４０％（４／１０）；而空白对照组的１０只雏鸡则全部死亡，无保护率。本试验认为，ＩＢＶ核蛋白在抗感染和致死方面起着一定的免疫保护作用。     

从自然发病鸡中分离出一株新城疫病毒

应用电镜技术、血清学检查、生物学试验等方法,从未注射过疫苗的某自然发病鸡群分离出一株新城疫病毒。该分离株对１０日龄鸡胚的平均致死时间为１１６小时,静脉接种致病指数为０．０６,其毒力介于新城疫病毒的ＬａＳｏｔａ株与Ｖ４株之间。免疫原性试验结果表明,该分离株具有免疫后无不良反应、免疫后６天开始产生抗体、产生的抗体效价高、对新城疫强毒的攻击能１００％保护等特点,是一株良好的新城疫候选疫苗株     

鸡传染性喉气管炎病毒gD基因与ChIL-2重组禽痘病毒的构建及其免疫效力试验

将鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）gD基因和鸡白细胞介素2（ChIL-2）基因通过同源重组法重组禽痘病毒转移载体,构建含ILTVgD基因和ChIL-2基因的重组禽痘病毒转移载体rFPVIL2ILTV—gD,蓝色蚀斑纯化法纯化重组病毒,用IFA检测重组病毒中ILTVgD基因的表达和用ELISA试剂盒检测ChIL-2的表达。重组病毒rFPV—IL2-ILTV-gD免疫试验鸡,间接ELISA测定血清中ILTV抗体效价,动物试验用构建的ILTV强毒以滴鼻方式攻击各组试验鸡,结果表明,外源基因在重组禽疽病毒中得到了稳定表达;ELISA检测结果表明在免疫7d后能够检测到血清抗体,免疫21d后血清抗体达到高峰,此后便开始逐渐下降,符合疫苗免疫的消长规律;攻毒后每组鸡的发病情况可以看出重组病毒rFPV-IL2-ILTV-gD组和疫苗对照组对ILTV强毒攻击的保护率分别为96％和92％,而空白对照组为8％。说明构建的重组病毒rFPV-IL2-ILTV—gD免疫效力稍优于弱毒疫苗,能够较好的保护免疫鸡群。     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因免疫对鸡的保护作用

将鸡传染性支气管炎病毒肾型 Ｔ 株 Ｓ１ 基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ 连接于ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 的 Ｈｉｎｄ Ｉ Ｉ Ｉ与 Ｂａ ｍ Ｈ Ｉ位点之间构建含有 Ｃ Ｍ Ｖ 启动子及 Ｂ Ｇ Ｈｐｏｌｙ Ａ 信号序列的鸡传染性支气管炎病毒 Ｓ１ 蛋白真核表达质粒。实验证明, Ｓ Ｐ Ｆ 鸡肌注免疫后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体逐渐升高,至第３５ 日龄左右达到高峰,攻毒后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体先下降而后升高,血清 Ｉｇ Ｇ 抗体升高幅度不及 Ｉ Ｂ 油苗免疫组。质粒 Ｄ Ｎ Ａ 免疫鸡攻毒后有４０ ％ 的鸡可耐过强毒的攻击,说明 Ｓ１ 基因在体内获得了表达并使鸡产生了一定的免疫力。     

鸡传染性喉气管炎病毒SA2疫苗株免疫效力的研究

鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）疫苗株尿囊膜乳剂原液经点眼接种２、７和１５日龄雏，２日龄雏鸡组在接种后第７天有２０％（１／５）鸡出现眼睑肿胀和流泪等眼部反应，７日龄和１５日龄雏鸡组无明显临床变化。用该疫苗株乳剂原液点眼接种１月龄以上鸡眼部无明显反应，但通过气管接种后，２６．７％（４／１５）鸡表现出ＩＬＴ临床症状。试验用ＳＡ２株点眼接种免疫１月龄以上鸡，免疫组保护率为１００％（２０／２０），对照组发病率为１００％（１０／１０）、死亡率为４０％（４／１０）。２、７和１５日龄雏鸡点眼毒力试验的３组鸡，于接种后２１～３４天用王岗株ＩＬＴ强毒攻击，１００％得到保护，而对照组鸡１００％发病。试验结果表明，ＳＡ２疫苗株是一株毒力温和、副作用小而且免疫效力好的疫苗用毒株     

表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒疫苗免疫持续期试验

用表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因的重组鸡痘病毒（rFPV～gB—F）制备的疫苗免疫4周龄SPF鸡，免疫后的7、14、21、30、60、90、120、150、180d分别采血，分离血清，检测抗FPV和gB的抗体。结果表明重组疫苗免疫后14d，免疫鸡血清抗体已经全部阳转，免疫后的21d血清抗FPV的抗体出现峰值；此后便开始回落，到免疫后的6个月抗体水平已经接近阴性对照的水平。抗gB的抗体在免疫后的第二周达到阳性，之后的六个月都为阳性。在免疫后的每个月将免疫鸡取20只再分成两组。分别用新城疫强毒与传染性喉气管炎强毒的攻击。在免疫后的第一个月对新城疫的保护率为8／10，第2个月对新城疫的保护为7／10，第3个月为2／10，因此对新城疫的免疫保护期为2个月。在免疫后的5个月内可以使免疫鸡对传染性喉气管炎强毒攻击的保护率达到8／10以上，免疫后的6个月对ILT为8／13．因此rF—PV-gB—F对传染性喉气管炎的免疫保护期为5个月。     

口服鸡新域疫病毒V_4株免疫效果的研究

经嗉囊接种１０８．５ＥＩＤ５０鸡新域疫病毒Ｖ４株，接种后第４天到第８天能从粪便中分离出病毒。５周龄鸡拌料口服１０８．５ＥＩＤ５０鸡新域疫Ｖ４株病毒一次，半年内ＨＩ抗体平均滴度为２５左右，１００ＥＩＤ５０鸡新域疫Ｆ系标准强毒攻击，保护率１００％。健康鸡同免疫鸡混合饲养，１４天后可获得免疫鸡同样高的抗体反应     

鸡新城疫Ⅰ系疫苗拌料口服免疫效果试验

建立鸡新城疫Ⅰ系疫苗不同剂量拌料口服和１．０头份／只肌肉注射组，于免疫后１８０ｄ时２．５头份／只和３．０头份／只口服免疫组的ＨＩ儿价均在免疫保护临界域２＾４．０以上，免疫后２１０ｄ从各组随机抽样，用新城疫病毒Ｆ４８Ｅ８强毒攻击，结果这两个组的保护率分别为４０％和１００％。     

禽流感病毒血凝素基因的克隆及其DNA疫苗的免疫原性

禽流感病毒（ＡＩＶ）的表面结构蛋白血凝素（ＨＡ）是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的Ｈ７亚型ＡＩＶ的ＨＡ基因序列，设计合成了１对Ｈ７ＨＡ特异引物，以ＡＩＶＡ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ．／Ｅｎｇ－Ｑ／９８３／７９／（Ｈ７Ｎ１）（Ａ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ．／Ｅｎｇ）核酸为模板，通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增出１条１．７ｋｂｃＤＮＡ片段。将这一片段定向克隆到ｐＵＣ１８中，对其５′端及３′端部分序列测定后，确证其为ＨＡｃＤＮＡ。将ＨＡ基因置于ＳＶ４０启动子和增强子下游，构建了这一基因的真核表达质粒ｐＳＶＨ７。以此质粒１００μｇ肌肉注射免疫３周龄ＳＰＦ鸡６只，４周后以１００倍鸡胚感染剂量（ＥＩＤ）的ＨＡ基因同源病毒对所有鸡进行攻毒，１周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离；免疫后１～６周每周对所有鸡翅静脉采血，分离血清，检测ＨＩ抗体。结果，１００μｇ免疫组鸡病毒分离数为０／６，对照组为６／６；攻毒后１周免疫组鸡ＨＩ效价为１∶３２～１∶６４，对照组为１∶４～１∶１６。表明所构建的ＨＡ基因表达质粒可作为基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应。     

鸡痘疫苗与新城疫疫苗免疫接种对新城疫血凝抑制抗体干 …

试验结果证明，鸡痘（ＦＰ）弱毒疫苗对新城疫（ＮＤ）弱毒疫苗血凝抑制（ＨＩ）抗体产生有严重的干扰作用，在ＦＰ疫苗接种后１５天内再接种ＮＤ疫苗，ＦＰ疫苗以 苗的ＨＩ抗体的产竽均膛同程度的干扰作用，其ＮＤ抗体平均效价低于单独用ＮＤ疫苗组０．１５￣１．３５个滴度。对雏鸡用ＦＰ弱毒疫苗和ＮＤ弱毒疫苗同时接种，或间隔１５天后再接种ＮＤ疫苗，其ＮＤ抗体平均值与单独用ＮＤ疫苗免疫组无明显差异。本实验观察结果表明，     

CTAB脂质体介导鸡新城疫病毒核酸免疫研究

用CTAB／DOPE脂质体包裹新城疫病毒血凝素神经氨酸酶（HN）基因的真核表达质粒pcHNM免疫5周龄仔鸡，1周后免疫鸡血清中的特异性HI抗体开始升高，至第6周空白对照组抗体2．06，裸DNA免疫鸡4．09，脂质体DNA免疫组为5．20；此时用新城疫强毒F48E9攻击，未免疫组鸡的存活率为27．28％，裸DNA免疫组81．82％，CTAB脂质体DNA免疫组100．00％，表明该质粒DNA被脂质体包裹后，不仅增加了动物的特异性抗体产生能力，而且增加了动物对新城疫强毒的抵抗力。     

鸡传染性法氏囊病病毒超强株VP2基因重组新城疫病毒胚胎免疫安全性及效力试验

为研制能够同时预防传染性法氏囊病(IBD)和新城疫(ND)的疫苗,本研究选用表达IBD病毒(IBDV)超强毒株(vvIBDV)VP2基因的重组ND病毒(NDV)LaSota疫苗株(rL-VP2),测定其半数鸡胚感染量、平均鸡胚致死时间、脑内接种指数和静脉内致病指数等指标,按不同剂量接种18胚龄SPF鸡胚,分别于出雏后第9d、第14d和第21d采血,用微量凝集法和ELISA方法测定血清中抗NDV抗体和抗IBDV抗体水平,并于出雏后28d用NDV强毒(F48E9株)和vvIBDVGx株攻毒,评估重组疫苗的胚胎免疫效果。结果显示:按104EID50/枚剂量进行免疫不会影响SPF鸡胚出雏率和出雏后21d存活率,并且该免疫组雏鸡能够对NDV强毒和vvIBDV攻毒提供安全的免疫保护。     

雏鸡新城疫母源抗体保护力及Clone—30弱毒疫苗点眼免疫效果观察试验

本试验对不同日龄,不同新城疫母源抗体水平的艾维茵商品肉鸡进行了新城疫（ＮＤ）攻毒,同时对经Ｃｌｏｎｅ－３０弱毒疫苗１次点眼免疫后的鸡只攻毒,并对每只鸡的抗体水平作跟踪监测,结果表明,非经免疫的,１０日龄以内的雏鸡,只有在母源抗体水平很高（ＮＤ－ＨＩ效价〉６Ｌｏｇ２）的情况下才能抵抗瓣城疫强毒的攻击,母源抗体较低的鸡只（抗体效价≤６Ｌｏｇ２）大多数不能抵抗新城疫强毒的攻击,雏鸡经Ｃｌｏｎｅ－３０弱毒