成疫病毒F基因疫苗接种剂量的研究

以新城疫病毒Ｆ基因的ｃＤＮＡ与真核表达载体ｐｃＤＮＡ３重组，构建了新城疫病毒Ｆ基因疫茵。采用不同剂量接种ＳＰＦ鸡后，通过抗体监测和强毒攻击试验，分析了其诱导的体液免疫应答及免疫保护作用。结果表明，接种剂量为１００，２００ｕｇ时，试验鸡在免疫后第２周出现较明显的抗体反应，接种剂量为１０ｕｇ时抗体变经不明显。以标准强毒Ｆ４８Ｅ９攻击后，空白对照组及接种剂量为１０，１００ｕｇ组的鸡只全部发病死亡，未获得     

新城疫病毒F基因疫苗接种剂量的研究

以新城疫病毒F基因的cDNA与真核表达载体pcDNA3重组 ,构建了新城疫病毒F基因疫苗。采用不同剂量接种SPF鸡后 ,通过抗体监测和强毒攻击试验 ,分析了其诱导的体液免疫应答及免疫保护作用。结果表明 ,接种剂量为1 0 0 ,2 0 0ug时 ,试验鸡在免疫后第 2周出现较明显的抗体反应 ,接种剂量为 1 0ug时抗体变化不明显。以标准强毒F4 8E9攻击后 ,空白对照组及接种剂量为 1 0 ,1 0 0ug组的鸡只全部发病死亡 ,未获得免疫保护 ;而 2 0 0ug组鸡只 30 %存活 ,获得部分免疫保护。表明基因免疫效果与接种的剂量有密切的关系     

感染鸡贫血病毒雏鸡ND免疫后血清Igs和HI抗体的动态变化

本试验对１日龄感染鸡传染性贫血病毒（ＣＩＡＶ）雏鸡接种新城疫（ＮＤ）疫苗及其强毒攻击后外周血液免疫球蛋白ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量和ＨＩ抗体滴度的动态变化进行研究。结果发现，ＣＩＡＶ感染雏鸡ＮＤ疫苗免疫后，其外周血液ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量和ＨＩ抗体滴度，于接种ＮＤ疫苗后７￣２８ｄ较未感染ＣＩＡＶ的免疫对照雏鸡明显减少，表明ＣＩＡＶ感染雏鸡对ＮＤ疫苗免疫的体液免疫应答功能明显降低。ＮＤ强毒攻击后     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因免疫对鸡的保护作用

将鸡传染性支气管炎病毒肾型 Ｔ 株 Ｓ１ 基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ 连接于ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 的 Ｈｉｎｄ Ｉ Ｉ Ｉ与 Ｂａ ｍ Ｈ Ｉ位点之间构建含有 Ｃ Ｍ Ｖ 启动子及 Ｂ Ｇ Ｈｐｏｌｙ Ａ 信号序列的鸡传染性支气管炎病毒 Ｓ１ 蛋白真核表达质粒。实验证明, Ｓ Ｐ Ｆ 鸡肌注免疫后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体逐渐升高,至第３５ 日龄左右达到高峰,攻毒后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体先下降而后升高,血清 Ｉｇ Ｇ 抗体升高幅度不及 Ｉ Ｂ 油苗免疫组。质粒 Ｄ Ｎ Ａ 免疫鸡攻毒后有４０ ％ 的鸡可耐过强毒的攻击,说明 Ｓ１ 基因在体内获得了表达并使鸡产生了一定的免疫力。     

鸡贫血病雏鸡ND免疫后局部免疫组织抗体生成细胞变化

对感染鸡贫血病毒（ＣＡＶ）雏鸡新城疫（ＮＤ）疫苗免疫及其强毒攻击后局部免疫组织——盲肠扁桃体和哈德尔腺的ＩｇＡ、ＩｇＧ和ＩｇＭ抗体生成细胞数量的动态变化进行了检测。结果发现,ＣＡＶ感染雏鸡ＮＤ免疫后７、１４、２８ｄ及新城疫强毒（ｖＮＤＶ）攻击后,上述免疫组织的三种抗体生成细胞数量均不同程度地低于未感染ＣＡＶ的ＮＤ免疫对照雏鸡。其中盲肠扁桃体弥散区的ＩｇＡ减少最为明显。表明ＣＡＶ感染雏鸡消化道和呼吸道局部免疫组织对新城疫疫苗的体液免疫应答功能降低。新城疫强毒攻击后ＣＡＶ感染ＮＤ免疫雏鸡的免疫保护率也明显低于未感染ＣＡＶ的免疫对照雏鸡。     

复方中药提取物在新城疫B_1株免疫中的免疫增强作用

用自制的中药提取物与新城疫Ｂ１株混合后免疫５５日龄鸡，以血凝抑制试验测定新城疫抗体效价。结果表明，５５日龄鸡的中药提取物最佳用量为１．０ｍＬ，试验组鸡ＮＤ抗体效价明显高于对照组。免疫后６０ｄ用Ｆ４８Ｅ８新城疫强毒进行攻击，试验组的保护率达到１００％，而对照组相对较低。     

鸡新城疫腔上囊炎双联高滴度抗体卵的研制及效果

本试验在产卵前最佳免疫日期内胸肌接种中等毒力ＮＤＩ系苗，皮下接种ＩＢＤ灭活油乳剂疫苗，收集免疫后２．５－５个月卵，低温环境冻结，卵黄液中ＮＤＨＩ综合滴度平均值接近１０ｇ６４，ＩＢＤＡＧＰ综合滴度平均值接近１０ｇ３２卵为双联高滴度抗体卵。拌料喂服该卵黄液的ＮＤ，ＩＢＤ非免疫试验组，攻击ＮＤ，ＩＢＤ强毒株，保护率１００％。对照组致死率１００％。中间试验用该卵液治疗ＮＤ和ＩＢＤ阳性的ＡＡ商品代仔鸡１６３     

新城疫病毒F基因与传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒免疫保护产生时间的测定

为了检测表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因和新城疫病毒F基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB-F)的免疫产生期，将60只30日龄SPF鸡随机分为6组，以5d为间隔在试验开始第0、5、10、15、20d时选取10只进行免疫，经翅内侧皮下注射接种1000PFU rFPV-gB-F，另外的10只作为对照。在第1组免疫后的第25d，将不同日龄免疫组和对照组试验鸡再随机分为2组，分别用传染性喉气管炎病毒WG株和新城疫病毒F48E9株强毒攻击。结果表明，在rFPV-gBF免疫接种后第10d时，可以诱发抗gB的抗体，保护免疫鸡抵抗传染性喉气管炎病毒WG株强毒和新城疫强毒的攻击。由此确定，rFPVgB-F免疫产生的时间是接种后第10d。     

口服鸡新城疫V4株病毒免疫效果研究

经嗉囊接种１０＾８．５ＥＩＤ５０鸡新城疫Ｖ４株病毒，后第４￣８天，能从粪便中分离出病毒。５周龄鸡拌料一次口服１０＾８．５ＥＩＤ５０鸡新城疫Ｖ４株病毒，半年内ＨＩ抗体平均效价为２＾５左右，用１００ＥＩＤ５０鸡新城疫Ｆ系标准强毒攻击，保护率１００％，健康鸡与免疫鸡混养，１４天后可获得免疫鸡同样高的抗体反应。     

鸽禽Ⅰ型副粘病毒油佐剂灭活苗对肉种鸽免疫效果观察

用鸽Ａ／ＰＭＶ－１ ＳＸ株制成的油佐剂灭活苗与ＮＤＶ油佐剂灭活苗分别免疫肉种鸽,免疫后２０天抗体水平达到峰值,抗体水平在３ｌｏｇ２以上维持３０天以上。免疫后４０天鸽ＳＸ株和新城疫强毒对两种疫苗免疫鸽分别进行攻击,两种疫苗免疫组对ＮＤＶ强毒攻击的保护率均为１００％,鸽Ａ／ＰＭＶ－１油佐剂灭活苗免疫组对鸽ＳＸ株攻击的保护率为１００％,而ＮＤＶ油佐剂灭活苗免疫组对鸽ＳＸ株攻击的保护率仅为６６．７％。     

雏鸡新城疫母源抗体保护力及Clone-30弱毒疫苗点眼免疫效果观察试验

本试验对不同日龄、不同新城疫母源抗体水平的艾维茵商品肉鸡进行新城疫（ＮＤ）攻毒,同时对经Ｃｌｏｎｅ－３０弱毒疫苗１次点眼免疫后的鸡只攻毒,并对每只鸡的抗体水平作跟踪监测。结果表明,非经免疫的、１０日龄以内的雏鸡,只有在母源抗体水平很高（ＮＤ－ＨＩ效价＞６Ｌｏｇ２）的情况下才能抵抗新城疫强毒的攻击;母源抗体较低的鸡只（抗体效价６Ｌｏｇ２）大多数不能抵抗新城疫强毒的攻击。雏鸡经Ｃｌｏｎｅ－３０弱毒疫苗点眼免疫１周后,尽管其体液抗体水平很低,但在一定时期内可获得较好的保护力。     

鸡痘疫苗与新城疫疫苗免疫接种对新城疫血凝抑制抗体干 …

试验结果证明，鸡痘（ＦＰ）弱毒疫苗对新城疫（ＮＤ）弱毒疫苗血凝抑制（ＨＩ）抗体产生有严重的干扰作用，在ＦＰ疫苗接种后１５天内再接种ＮＤ疫苗，ＦＰ疫苗以 苗的ＨＩ抗体的产竽均膛同程度的干扰作用，其ＮＤ抗体平均效价低于单独用ＮＤ疫苗组０．１５￣１．３５个滴度。对雏鸡用ＦＰ弱毒疫苗和ＮＤ弱毒疫苗同时接种，或间隔１５天后再接种ＮＤ疫苗，其ＮＤ抗体平均值与单独用ＮＤ疫苗免疫组无明显差异。本实验观察结果表明，     

传染性喉气管炎新城疫鸡痘重组病毒免疫效力的研究

在表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gB基因和新城疫病毒(NDV)F基因的重组鸡痘病毒(rF-PV-gB-F)安全性检验合格后,以5.0×101~5.0×104PFU不同含量按0.1mL/鸡的剂量免疫100只30日龄SPF鸡,30d后分组分别用ILTVWG株和NDVF48E9株强毒进行攻击。免疫鸡抗鸡痘病毒抗体都转为阳性,痘反应和接种剂量有关,重组疫苗的最小反应剂量为50PFU。重组疫苗可以诱发对新城疫和传染性喉气管炎的保护,0.1mL/鸡的接种量在500~5000PFU浓度范围内的免疫效果最好,对于ILTV攻击的发病保护率在70%以上,对NDV强毒攻击的抗死亡保护率可以达到80%,这为进一步考察疫苗的免疫效力试验以及进行田间试验奠定了基础。     

禽流感病毒血凝素基因的克隆及其DNA疫苗的免疫原性

禽流感病毒（ＡＩＶ）的表面结构蛋白血凝素（ＨＡ）是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的Ｈ７亚型ＡＩＶ的ＨＡ基因序列，设计合成了１对Ｈ７ＨＡ特异引物，以ＡＩＶＡ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ．／Ｅｎｇ－Ｑ／９８３／７９／（Ｈ７Ｎ１）（Ａ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ．／Ｅｎｇ）核酸为模板，通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增出１条１．７ｋｂｃＤＮＡ片段。将这一片段定向克隆到ｐＵＣ１８中，对其５′端及３′端部分序列测定后，确证其为ＨＡｃＤＮＡ。将ＨＡ基因置于ＳＶ４０启动子和增强子下游，构建了这一基因的真核表达质粒ｐＳＶＨ７。以此质粒１００μｇ肌肉注射免疫３周龄ＳＰＦ鸡６只，４周后以１００倍鸡胚感染剂量（ＥＩＤ）的ＨＡ基因同源病毒对所有鸡进行攻毒，１周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离；免疫后１～６周每周对所有鸡翅静脉采血，分离血清，检测ＨＩ抗体。结果，１００μｇ免疫组鸡病毒分离数为０／６，对照组为６／６；攻毒后１周免疫组鸡ＨＩ效价为１∶３２～１∶６４，对照组为１∶４～１∶１６。表明所构建的ＨＡ基因表达质粒可作为基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应。     

雏鸡新城疫母源抗体保护力及Clone—30弱毒疫苗点眼免疫效果观察试验

本试验对不同日龄,不同新城疫母源抗体水平的艾维茵商品肉鸡进行了新城疫（ＮＤ）攻毒,同时对经Ｃｌｏｎｅ－３０弱毒疫苗１次点眼免疫后的鸡只攻毒,并对每只鸡的抗体水平作跟踪监测,结果表明,非经免疫的,１０日龄以内的雏鸡,只有在母源抗体水平很高（ＮＤ－ＨＩ效价〉６Ｌｏｇ２）的情况下才能抵抗瓣城疫强毒的攻击,母源抗体较低的鸡只（抗体效价≤６Ｌｏｇ２）大多数不能抵抗新城疫强毒的攻击,雏鸡经Ｃｌｏｎｅ－３０弱毒     

鸡传染性法氏囊病免疫程序初探

用四种不同的免疫程序免疫肉雏鸡和蛋雏鸡：Ａ，分别于３、１０、２１日龄用ＩＢＤ弱毒疫苗饮水免疫；Ｂ，于１４、２８日龄用ＩＢＤ弱毒苗饮水；Ｃ，于３日龄弱毒苗饮水、１０日龄用油乳剂组织灭活苗皮下接种；Ｄ，１０日龄用油乳剂灭活苗皮下接种。试验表明，Ｃ、Ｄ两种免疫程序效果极佳，免疫鸡于２１日龄时就能检测出ＡＧＰ抗体，以后抗体上升较快，６０日龄时达高峰，其ＡＧＰ效价最高达１∶２８．４３、ＲＰＨＩ达１∶２１６．４３，蛋鸡至１２０日龄时，血清中仍可维持较高水平抗体，攻毒结果表明，各个日龄试验鸡对ＩＢＤ野毒攻击均具有１００％的保护率。而Ａ、Ｂ两种免疫程序效果不佳，只能产生低水平抗体，各个日龄试验鸡对野毒攻击均未获完全保护。     

鸽禽I型副粘病毒油佐剂灭活苗对肉种鸽免疫效果观察

用鸽Ａ／ＰＭＶ－１ＳＸ株（简称ＳＸ株）制成的油佐剂灭活苗与ＮＤＶ油佐剂灭活苗分别免疫肉种鸽,免疫后２０天抗体水平达到峰值,抗体水平在３ｌｏｇ２以上维持３０天以上。免疫后４０天用鸽ＳＸ株和新城疫强毒对两种疫苗免疫鸽分别进行攻击,两种疫苗免疫组对ＮＤＶ强毒攻击的保护率均为１００％,鸽Ａ／ＰＭＶ－１油佐剂灭活苗免疫组对鸽ＳＸ株攻击的保护率为１００％,而ＮＤＶ油佐剂灭活苗免疫组对鸽ＳＸ株攻击的保护率仅为６６７％。鸽Ａ／ＰＭＶ－１油佐剂灭活苗田间试验抽检４８份肉种鸽血清,抗体平均值为４３０±１１６ｌｏｇ２。     

新城疫病毒外膜蛋白脂质体疫苗的实验研究

本研究以冷冻干燥法制得新城疫病毒（ＮＤＶ）外膜蛋白脂质体疫苗，两次免疫后ＳＰＦ鸡的血清ＨＩ抗体效价结果显示：ＮＤＶ外膜蛋白脂质体疫苗免疫组的算术滴度要高于仅以ＮＤＶ外膜蛋白免疫组，二者间具有是生差异，且前者以ＮＤＶ强毒株攻击后的保护率也１００％，也优于单纯以ＮＤＶ外膜蛋白免疫组。     

口服鸡新域疫病毒V_4株免疫效果的研究

经嗉囊接种１０８．５ＥＩＤ５０鸡新域疫病毒Ｖ４株，接种后第４天到第８天能从粪便中分离出病毒。５周龄鸡拌料口服１０８．５ＥＩＤ５０鸡新域疫Ｖ４株病毒一次，半年内ＨＩ抗体平均滴度为２５左右，１００ＥＩＤ５０鸡新域疫Ｆ系标准强毒攻击，保护率１００％。健康鸡同免疫鸡混合饲养，１４天后可获得免疫鸡同样高的抗体反应     

间接夹心ELISA检测新城疫病毒抗原

以ＳＰＦ鸡抗新城疫病毒ＩｇＧ为包被抗体，兔抗ＮＤＶ ｖｅｒｏ细胞培养纯化毒ＩｇＧ为第二抗体，酶标记羊抗兔ＩｇＧ为指示抗体，建立了检测ＮＤＶ的间接夹心ＥＬＩＳＡ，并分别以兔抗ＮＤＶ鸡胚毒纯化ＨＮ糖蛋白，Ｆ糖蛋白ＩｇＧ为第二抗体进行了比较试验，并对攻毒鸡外分泌物样品进行了病原检测。