犬瘟热发病期消化道细菌分离鉴定

为了更好地为胃肠型犬瘟热对症治疗提供更为确切的临床指导,本研究采集了昆明地区云南农业大学动物医院10份胃肠型犬瘟热粪便,进行细菌分离培养,鉴定出粪便中普遍存在的2种菌,分别为大肠埃希氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌。药敏实验结果表明:混合感染菌对新生霉素、链霉素敏感,而对阿莫西林、氯霉素、头孢氨苄、青霉素等无效。     

猪瘟病毒石门株NS3蛋白的原核表达及其抗体检测间接ELISA的建立

为配合猪瘟新型疫苗的研发,建立了猪瘟病毒NS3蛋白抗体检测间接ELISA,以期达到有效区分新型疫苗免疫猪与自然感染猪(包括常规疫苗接种猪)的目的。以接种猪瘟病毒(CSFV)石门株的PK-15细胞为模板提取总RNA,经特异性PCR扩增获得长度为2 049bp的CSFV NS3基因,将其克隆至插入了具有自聚集自切割功能短肽的原核表达载体pET-32a(+),在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中优化表达CSFV石门株NS3基因。Western blot分析表明重组蛋白NS3具有反应原性。将纯化的重组蛋白NS3作为包被抗原建立检测CSFV NS3抗体的间接ELISA,以美国爱德士(Idexx)猪瘟病毒抗体检测试剂盒抗体检测结果为标准,对502份血清样品进行检测。结果表明,所建立方法的特异性为96.9%,敏感性为89.7%,总符合率为95.8%,为猪瘟新型疫苗的推广应用提供了血清学检测方法。     

我国新发人畜共患传染病及其防控策略

近年来,各种生物学因素、自然因素以及社会因素加剧了新发人畜共患传染病的发生、传播与流行,给人类的健康带来了很大的威胁,也造成了很大的经济损失,同时,也导致了诸多的社会问题.面对新发人畜共患传染病的挑战,人类应重新认识人畜共患传染病对人类健康的危害和影响,提高警惕,采取切实有效的应对措施,预防和控制传染病的发生和流行.本文就新发人畜共患传染病对人类健康和生存的严重威胁、影响因素和预防控制对策进行了分析和探讨.     

黄芪多糖对奶牛乳房炎主要致病菌的体外抑菌作用

采用水提醇治法提取黄芪多糖,并应用琼脂扩散法研究了黄芪多糖对几种奶牛乳房炎主要致病菌的抑制效果。结果表明,10 mg/mL的黄芪多糖对3种细菌都有一定的抑制效果,其中对大肠埃希菌的抑制作用最强,抑菌圈达11.05 mm±0.31 mm,对链球菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈分别为8.50 mm±0.71 mm和9.32 mm±0.21 mm。3种细菌的最小抑菌浓度不同,对大肠埃希菌的最小抑菌浓度为6.6 mg/mL,而对金黄色葡萄球菌和链球菌则为10.0 mg/mL。     

一起猪圆环病毒病的诊治

猪圆环病毒病(PCVD)或猪圆环病毒相关性疾病(PC-VAD)是由猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)引起的一大类猪病的统称。PCVD的临床表现包括种猪的繁殖障碍、哺乳仔猪拉稀、保育猪的多系统衰竭综合征(PMWS)、保育猪与生长肥育猪的皮炎肾病综合征(PDNS)、猪呼吸道疾病综合征(PRDC)     

几种方法对奶牛乳房炎的治疗效果观察

乳房炎是奶牛最常见的疾病之一,严重制约着奶牛业的发展。乳房炎可降低奶产量;使奶中的营养成分减少;影响食品卫生;浪费饲料,加重经济损失。本试验选用青、链霉素为基础药,同时分别选用乳肿康,普朗头孢,奶牛三热灵,抗病毒1号等中草药复方制剂采用乳房灌注的方式治疗奶牛乳房炎,每天给药1次,21d为一个疗程。结果表明,中草药复方制剂的治疗效果由于基础治疗组,而且能够明显提高奶产量,本研究为奶牛乳房炎的临床治疗提供资料。     

心肌特异性α-actin启动子重组腺病毒的构建及其鉴定

为了探讨心肌肌动蛋白(α-actin)基因启动子的心肌组织特异性及其表达活性,构建了心肌组织靶向性表达的基因载体,应用PCR从pEGFP-N1-α-actin-P质粒中克隆出α-actin启动子片段,将其插入到切除CMV启动子的腺病毒穿梭载体pAdTrack中,构建出pAdTrack-actin重组穿梭载体,经酶切和测序鉴定正确后用PmeI线性化,与含有腺病毒骨架DNA的pAdEasy-1质粒在BJ5183大肠杆菌细胞中同源重组成新的重组体pAd-easy-actin,抽提重组体DNA,经PacI酶切回收后以脂质体法转染人胚肾细胞株HEK293,包装出完整腺病毒pAd-actin进行PCR检测,并应用蚀斑形成试验测定病毒滴度。结果显示,重组腺病毒中含有α-actin启动子片段,病毒滴度为7×107pfu/mL。表明含心肌α-actin启动子的重组腺病毒pAd-actin构建成功。     

表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗 在小鼠体内的存留时间分析

研究E0-E2基因和表达蛋白及抗体水平在小鼠体内的最长存留时间,以确定表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在小鼠体内的存留规律。本试验选用30只SPF级别的健康小鼠,随机分为A、B组,各免疫组以1×106 IFU/只剂量接种rAd-E0-E2,对照组注射生理盐水。A组20只于接种后不同特定时间(2只/次)采集血液和组织进行PCR和IFA检测E0-E2基因及表达蛋白残留情况;B组10只于接种后1、3、5、7、10、14、21、28d采集血清检测猪瘟抗体水平。PCR和IFA检测显示,在接种12、24、36h后肝、脾、肾组织和血清中E0-E2基因和蛋白检出率为100%,接种48h后小鼠肝、脾组织检出率为50%,肾组织和血清检出率为100%。接种72h以后,小鼠血液和组织检测均为阴性。接种后7d试验组体内抗体阳性率为40%,接种后10d小鼠体内抗体阳性率为100%,抗体阻断率在43%～51.2%,接种后28d,猪瘟抗体阳性率为100%,抗体阻断率在75.6%～87.5%。表明rAd-E0-E2在小鼠体内的存留时间最长72h,接种时间与E2抗体水平呈正相关。     

猪ASC及Ub基因的克隆及真核表达重组质粒的构建

炎症小体不仅参与机体的天然免疫反应,同时还参与机体抗病毒等多种宿主防御反应。在多种疾病相关信号通路反应中都伴随着蛋白质的泛素化修饰。NOD样受体(NLRs)介导的炎症小体信号通路中,凋亡相关点状样蛋白(ASC)是关键的接头蛋白。为了解猪瘟病毒(CSFV)感染对ASC泛素化水平的影响,通过RT-PCR从猪血管内皮细胞(ECs)中扩增获得ASC和泛素(Ub)的全长cDNA双链片段,连接至克隆载体pMD-18T,获得重组克隆质粒pMD-ASC和pMD-Ub。双酶切pMD-ASC获得ASC目的序列,连接至pcDNA3.1-Flag,双酶切pMD-Ub获得Ub目的序列,连接至pcDNA3.0-HA,获得重组表达质粒pcDNA3.1-Flag-ASC和pcDNA3.0-HA-Ub。将pcDNA3.1-Flag-ASC和pcDNA3.0-HA-Ub转染ECs,Western blot在蛋白水平检测ASC和Ub的表达。结果表明,成功构建了带有Flag标签的ASC真核表达质粒和带有HA标签的Ub真核表达质粒,且在ECs中获得高效表达,为进一步体外研究CSFV调控猪血管内皮细胞ASC泛素化的机制提供了实验基础。     

猪瘟病毒石门株在ST细胞连续传代后E0基因变异分析

为了解猪瘟病毒(CSFV)石门(Shimen)株连续传代后变异情况,根据已发表的CSFV E0基因序列(AF092448.2),设计合成引物,以在ST细胞中连续传代培养的CSFV石门株细胞毒总RNA为模板,每5代通过RT-PCR方法扩增病毒的E0基因,测定其核苷酸序列和氨基酸序列,用DNA Star软件分析比较原代、5代、10代、15代、20代、25代接毒细胞中CSFV E0基因的变异性。结果显示,接种病毒第10代的病毒E0基因在630核苷酸位点出现变异,第15代病毒在632核苷酸位点出现变异。本研究通过分子生物学方法发现CSFV Shimen株在ST细胞连续传代过程中E0基因能保持遗传的稳定性。