鸡传染性贫血病毒的分离鉴定

在山东省从死亡率达７２％,混合感染多种病原微生物的海兰蛋白鸡和艾维茵肉鸡群中分离到３株鸡贫血病毒（ＣＡＶ）这些毒株耐体积分数５０％氯仿和７０℃水浴１５ｍｉｎ,能在ＭＤＣＣ－ＭＳＢ１的细胞内增殖,用分离的细胞毒接种１日龄ＳＰＦ鸡呈现典型的难传染性贫血特征性的临床症状和病理变化;用间接免疫荧光检查感染的ＭＤＣＣ－ＭＳＢ１细胞涂片和鸡组织触片,可见特异的核内荧光,分离毒株能被ＣＡＶ－ＴＫ５８０３株抗血清     

鸡马立克氏病活疫苗免疫效力比较试验

用ＨＶＴ冻干苗、ＨＶＴ细胞结合苗、ＣＶＩ９８８细胞结合苗、ＳＢ１＋ＦＣ１２６双价活疫苗、３０１Ｂ／１＋ＦＣ１２６双价活疫苗和Ｚ４＋ＦＣ１２６双价活疫苗等６种鸡马立克氏病（ＭＤ）疫苗免疫ＳＰＦ白来航鸡或普通伊莎鸡，用鸡马立克氏病病毒（ＭＤＶ）强毒ＧＡ株、京－１血毒以及鸡马立克氏病超强毒ｖｖＭＤＶ－Ｍｄ５毒株分别攻击进行免疫效力比较试验。试验表明，ＭＤ单价苗的免疫效力强弱顺序依次是ＣＶＩ９８８、ＨＶＴ细胞结合苗和ＨＶＴ冻干苗，这３种ＭＤ单价苗均能给免疫鸡群提供有效的免疫保护力。ＳＢ１＋ＦＣ１２６、Ｚ４＋ＦＣ１２６和３０１Ｂ／１＋ＦＣ１２６等３种ＭＤ双价苗免疫效力显著高于ＭＤ单价苗，均能给免疫鸡群提供较强的免疫保护力，并能有效地抵抗ｖｖＭＤＶ－Ｍｄ５毒株的致瘤作用。Ｚ４＋ＦＣ１２６和３０１Ｂ／１＋ＦＣ１２６ＭＤ双价苗免疫效力无显著差异     

京—1株鸡马立克氏病强毒对BWEL—SPF鸡群的感染试验

用京－１株鸡马立克氏病（ＭＤ）强毒感染１￣１０个家系１日龄的ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡,观察比较临床症状和剖检病变及病理切片,以此评估该ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡群每个家系鸡对京－１株ＭＤ强毒的敏感性。结果,１,５,８,９号家系的ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡对京－１株ＭＤ强毒最敏感;３,４,５,６,１０号家庭系次之,２、７号家系敏感性相对较差。     

鸡法氏囊国外弱毒病毒的分离与鉴定（初报）

我们对国外引入的ＩＢＤ弱毒疫苗进行了分离，复制和测定，该病毒可接种ＳＰＦ鸡胚增殖，致难胚死亡，并产生ＩＢＤ病变；在ＳＰＦ鸡胚ＣＦＦ上繁殖，产生ＣＰＥ变化，并可被行异性ＩＢＤ抗血清中和；琼脂扩散与ＩＢＤ（＋）血清有明显的沉淀线，因此说明所分离的毒株是ＩＢＤ病毒，并测得其毒价为１０＾－６ＴＣＩＤ５０。     

应用间接免疫荧光法检测鸡传染性贫血病病毒抗体的研究

用鸡传染性贫血病病毒（ＣＩＡＶ）ＭＳＢＩ－ＴＫ５８０３毒株感染的ＭＤＣＣ－ＭＳＢ；细胞涂片为抗原，建立了检测ＣＩＡＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＩＦＡ）。应用该ＩＩＦＡ方法对人工感染的ＳＰＦ鸡进行了检测１５只１日龄ＳＰＦ鸡在接种后第７、１４天时均呈阴性反应；２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，３５天时呈明显阳性反应；１４只４０日龄ＳＰ     

带母源抗体的青年鸡皮下接种传染性法氏囊病活疫苗的效果

在１日龄和３周龄鸡的脾粘着（ＣＳＡ）细胞中，检测到了被正常鸡血清（ＮＣＳ）中和过的传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）的感染性，有３周龄鸡的（ＣＳＡ）细胞中，检测到了被母源抗体（ＭＮ－Ａｂ）中和过的ＩＢＤＶ的感染性。此外，发现１日龄鸡制备的ＣＳＡ细胞含有补体受体（ＣＲ），１周龄鸡制备的ＣＳＡ细胞既含有ＣＲ又有Ｆｃ受体（ＦｃＲ）。然而，即使ＣＳＡ细胞上的ＦｃＲ被热凝集ＮＣＳ（５６℃，６０分钟）阻断的情况下，     

PCR结合分子杂交法检测鸡传染性支气管炎病毒

利用逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）特异性扩增鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）基因组中Ｍ基因和Ｎ基因之间一段核酸片段。以ｐＵＣ１９质粒载体将此片段克隆，用ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切此重组质粒，回收克隆片段后，制成生物素标记的核酸探针。用ＲＴ－ＰＣＲ及生物素核酸探针法分别对ＩＢＶ，ＩＢＤＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ及ＮＤＶ进行检测，结果证明该方法为ＩＢＶ特异性检测方法。对人工感染ＩＢＶ的ＳＰＦ鸡口腔棉拭样品进行跟踪检测，证明本方法能在ＳＰＦ鸡接毒后１～１０ｄ内检出ＩＢＶ。     

IBDCOB－C1强毒株与J1C7E3标准强毒株对雏鸡及鸡胚致病力的研究

对扬州地区某鸡场当前流行的ＩＢＤ强毒株进行分离，并在１０、３５日龄时对两批ＩＢＤ阴性鸡（北京白鸡）作人工感染，与Ｊ１Ｃ７Ｅ３标准强毒株的致病力进行了系统的比较。结果证实ＩＢＤＣＯＢ－Ｃ１强毒株的毒力致病性远远大于Ｊ１Ｃ７Ｅ３毒株，ＩＢＤ人工感染京白Ⅰ系非免疫雏鸡后发病快、病程急、死亡率高，发病率达１００％、死亡率为８０％。病死鸡病变典型一致，ＣＯＢ－Ｃ１强毒株能使ＳＰＦ鸡胚致死、死亡胚胎病变显著，头腹水肿，全身出血，头、趾尤为明显，对ＮＤⅣ系疫苗免疫后可造成明显的免疫抑制。扬州地区分离的ＣＯＢ－Ｃ１是一株超强毒株，其抗原性与标准毒株蛋白结构的差异正进一步研究     

从疑似IBD病鸡的法氏囊组织中分离到1株ARV

从暴发类似传染性法氏囊病（ＩＢＤ）的江苏省某鸡场采集病鸡法氏囊组织制成组织悬液，接种鸡胚卵黄囊，部分鸡胚３～５ｄ死亡，部分鸡胚不死亡但有病变。用感染胚卵黄囊和绒尿膜混合物，接种鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），盲传３代后，发现以合胞体为特征的细胞病变（ＣＰＥ）。感染细胞做超薄切片电镜观察，可见细胞浆内病毒粒子呈整齐的晶格状排列。用免疫沉淀法提取病毒抽提核酸，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，可见规律排列的１０条带，呈３－３－１－３排列。与禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）参考毒株Ｓ１１３３株的核酸谱带的数目和位置相同。血清学试验与ＡＲＶ呈阳性反应，与传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）呈阴性反应。证明分离病毒为ＡＲＶ     

用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究

用传染性支气管炎病毒Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒、鸡传染性喉气管炎病毒，减蛋综合症病毒等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７Ｃ孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗，进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＴＢＤＶ、ＩＬＴ     

传染性法氏囊病超强毒致弱株的一些特性

某些传染性法氏囊病强毒株（ＨＶ－ＩＢＤＶ）通过鸡胚连续传代适应于鸡胚，鸡胚适应的ＨＶ－ＩＢＤＶ成功地在鸡胚成纤维（ＣＥＦ）细胞上生长，表现致细胞病变作用，鸡胚－细胞适应株对实验感染雏鸡的致病性大大降低，无一只死亡，法氏囊病变与标准株的相似，交叉病毒中和试验表明，细胞培养适应与标准株的抗原性有差异，免疫学试验表明，适应株免疫鸡后，对ＨＶ－ＩＢＤＶ强毒感染有很好保护作用，特别是免疫接种后３天攻强毒，适     

微量PCR检测鸡马立克氏病病毒早期感染

为了建立一种监测鸡群马立克氏病病毒（ＭＤＶ）早期感染的微量ＰＣＲ方法,根据血清Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ１）基因组ＢａｍＨＩ－Ｌ片段的核酸序列设计了１对寡核苷酸引物,用含０．３ＵＴａｑ酶的１０μＬ反应体系分别扩增了ＭＤＶ１型（京－１株、ＭＤ１１／７５ｃ株）、ＭＤＶ２型（ＳＢ－１株）和ＨＶＴ（ＦＣ－１２６株）的核酸,并用京－１株感染细胞ＤＮＡ作了敏感性试验。结果显示,该引物对ＭＤＶ１型病毒特异,京－１株和ＭＤ１１／７５ｃ株都扩增到４２５ｂｐ的核酸条带,而ＳＢ－１株、ＦＣ－１２６株和正常ＣＥＦ细胞的ＤＮＡ都没有得到任何条带;敏感性试验结果表明,微量ＰＣＲ能够检测到０．１ｐｇ的京－１株感染细胞ＤＮＡ;对京－１株感染鸡,在接种后第５天就能在血液细胞中检测到ＭＤＶＤＮＡ。微量ＰＣＲ可望成为监测鸡群ＭＤＶ早期感染的一种快速、有效的方法。     

产蛋下降综合征（EDS－76）病毒DNA探针的制备及应用研究

用纯化的产蛋下降综合征（ＥＤＳ－７６）病毒（Ｈ９１毒株）悬液提取的核酸，经琼脂糖凝胶电泳只出现１条分子量较大、背景清晰的核酸带。用ＢａｍＨＩ酶消化产生４个片段，大小分别为１７ｋｂ、１０ｋｂ、４．０ｋｂ和２．０ｋｂ。将其中的２．０ｋｂ片段克隆进ｐＵＣ１８ＤＮＡ载体中，重组质粒ＤＮＡ用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记作为ＤＮＡ探针，在ｄｏｔｂｌｏｔ中该探针不与鹅胚尿囊液核酸抽提物、马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＤＮＡ、鸡传染性贫血病毒（ＣＡＶ）ＤＮＡ、ＳＰＦ鸡基因组ＤＮＡ等核酸反应，只与３株ＥＤＳ病毒（ＥＤＳ标准毒株ＡＶ－１２７、ＥＤＳＨ９１毒株和从健康鹅体中分离的ＥＤＳＹ８１毒株）ＤＮＡ呈阳性反应。人工感染产蛋母鸡和雏鸡后２４ｈ即可用该探针从泄殖腔棉拭子样品中检测出ＥＤＳ病毒ＤＮＡ，在感染后３５ｈ仍能从部分感染鸡样品中检出。对部分探针检测阳性鸡的泄殖腔棉拭子样品用ＳＰＦ鸡胚分离病毒，并用ＨＡ和ＨＩ试验检测分离病毒的特异性；在感染过程中，同时检测了血清中ＨＩ抗体的消长情况。结果表明，人工感染鸡排毒至少可以维持２个月左右，而且血清中ＨＩ抗体即使很高，也不能阻止感染鸡的排毒。     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因免疫对鸡的保护作用

将鸡传染性支气管炎病毒肾型 Ｔ 株 Ｓ１ 基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ 连接于ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 的 Ｈｉｎｄ Ｉ Ｉ Ｉ与 Ｂａ ｍ Ｈ Ｉ位点之间构建含有 Ｃ Ｍ Ｖ 启动子及 Ｂ Ｇ Ｈｐｏｌｙ Ａ 信号序列的鸡传染性支气管炎病毒 Ｓ１ 蛋白真核表达质粒。实验证明, Ｓ Ｐ Ｆ 鸡肌注免疫后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体逐渐升高,至第３５ 日龄左右达到高峰,攻毒后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体先下降而后升高,血清 Ｉｇ Ｇ 抗体升高幅度不及 Ｉ Ｂ 油苗免疫组。质粒 Ｄ Ｎ Ａ 免疫鸡攻毒后有４０ ％ 的鸡可耐过强毒的攻击,说明 Ｓ１ 基因在体内获得了表达并使鸡产生了一定的免疫力。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均     

用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究

用传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ），鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）、减蛋综合症病毒（ＥＤＳＶ）等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７℃孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗、进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２Ｏ、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＩＬＴＶ、ＥＤＳＶ均为阴性。结果表明、用此法检测鸡胚尿囊液中ＩＢＶ．具有快速、敏感、特异的优点。     

鸽新城疫病毒的分离及其生物学特性测定

用ＳＰＦ鸡胚从疑似鸽新城疫（鸽ＮＤ）病鸽群中分离到一株病毒ＱＬ株,该病毒株能凝集鸡红细胞（ＲＢＣ）,这种凝集作用能被抗新城疫病毒（ＮＤＶ）阳性血清抑制;用抗ＮＤＶ单抗ＰＥＧ夹心ＥＬＩＳＡ测定分离株为阳性。分离株经肌肉注射能使鸽发病和死亡,出现与自然发病鸽一致的症状和病变,但肌注ＳＰＦ鸡只感染,不见临床症状。对该分离株作进一步生物学特性鉴定,按照国际上规定的ＮＤＶ毒力判定标准,测定了该毒株最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间（ＭＤＴ）、１日龄雏鸡脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）和６周龄雏鸡静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）,结果ＭＤＴ为１０５小时、ＩＣＰＩ为１．３３、ＩＶＰＩ为１．０。试验结果表明本分离株为鸽新城疫病毒。     

传染性支气管炎病毒的分离提纯及蛋白电泳分析

通过ＳＰＦ鸡胚接种分别对传染性支气管炎病毒的２ 个标准毒株Ｍ４１、ＩＢＶ－ Ｔ 株，４ 株山东分离株及１ 株北京分离株进行扩增繁殖；利用差速离心法、蔗糖不连续密度梯度离心法进行提纯；用ＳＤＳ－ 聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行蛋白分析。结果表明：各毒株都含有四种结构蛋白，且各毒株结构蛋白分子量基本相似，其中仅Ｍ 和Ｓ蛋白略有区别     

表达传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫保护性研究

以脂质体转染技术构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２基因的重组鸡痘病毒ＦＰＶ－ＶＰ２，该病毒在鸡胚成纤维细胞及鸡体内均能稳定产生子代病毒，经翅皮下５×１０５ＰＦＵ／羽免疫１日龄ＳＰＦ鸡，免疫后４周以１００ＬＤ５０／羽ＩＢＤＶ超强毒株Ｇ株攻毒，获得了５／６的保护，但不能有效预防临床发病及法氏囊受损萎缩。实验结果证明了ＶＰ２是ＩＢＤＶ的宿主保护性抗原，提示Ｔ细胞介导的免疫可能在ＩＢＤＶ的免疫中起着较为重要的作用。本研究为ＩＢＤＶ重组病毒疫苗研制进行了有益探索。     

鸽I型副粘病毒的分离和鉴定

用分离的对鸽有致病性的４株禽副粘病毒通过电镜观察、病毒中和试验和动物回归试验结果显示,病毒粒子呈球形,直径１００￣４５０ｎｍ,表面有纤突;能凝集鸡红细胞,血凝反应能被新城疫病毒（ＮＤＶ）和鸽Ｉ型副粘病毒（ＰＰＭＶ－１）阳性血情所抑制;接种１月龄乳鸽能使其发病,出现明显症状和病变并有死亡,接种１月龄ＳＰＦ鸡不发病;能在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦｓ）上生长,并能产生细胞病变（ＣＰＥ）;对高温敏感,在５５℃