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表达传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫保护性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以脂质体转染技术构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因的重组鸡痘病毒FPV-VP2,该病毒在鸡胚成纤维细胞及鸡体内均能稳定产生子代病毒,经翅皮下5×105PFU/羽免疫1日龄SPF鸡,免疫后4周以100LD50/羽IBDV超强毒株G株攻毒,获得了5/6的保护,但不能有效预防临床发病及法氏囊受损萎缩。实验结果证明了VP2是IBDV的宿主保护性抗原,提示T细胞介导的免疫可能在IBDV的免疫中起着较为重要的作用。本研究为IBDV重组病毒疫苗研制进行了有益探索。 相似文献
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根据已发表的IBDV基因组序列设计并合成一对特异扩增IBDV VP2cDNA的引物,以纯化的IBDV-D78弱毒疫苗株基因组为模板,利用RT-PCR技术扩增出约1.5kb产物。将PCR产物克隆到pUC19的Smal位点,经酶切图谱分析等方法鉴定出重组VP2cDNA质粒(pVP2)。将VP2基因正向插入FPV启动子LP23P2下游,连同痘苗病毒启动子P11启动的LacZ报告基因盒插入FPV转移载体中 相似文献
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传染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆和鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
以鸡胚成纤维细胞培养IBDV弱毒疫苗株D78,经蔗糖密度梯度离心纯化,电镜下见典型IBDV粒子。用SDS-蛋白酶K法提取病毒基因组,低熔点胶回收,琼脂糖凝胶电泳,可见IBDV典型双节段基因组。根据已发表的IBDV基因组序列,设计并合成了1对特异扩增IBDVVP2基因的引物。以IBDV基因组为模板,利用RT-PCR技术扩增出了1.5kb的cDNA产物,将PCR产物适当处理后与经SmaⅠ酶切的pUC19质粒平端连接,转化大肠杆菌DH5α,在含Amp、Χ-gal和IPTG的琼脂平板上培养,产生大量白色菌落。挑取白色菌落,经质粒大小比较分析初步筛选到一重组质粒。以重组质粒DNA为模板作PCR检测和部分酶切分析证实,该质粒为含D78IBDVVP2基因的重组pUC19 相似文献
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