传染性支气管炎病毒的分离提纯及蛋白电泳分析

通过ＳＰＦ鸡胚接种分别对传染性支气管炎病毒的２个标准毒株Ｍ４１、ＩＢＶ－Ｔ株，４山东分离株及１株北京分离株进行扩增敏殖；利用差速离心法、蔗糖不连续密度梯度离心法进行提纯；用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行蛋白分析。结果表明：各毒株都含有四种结构蛋白，且各每结构蛋白分子量基本相似，其中仅Ｍ和Ｓ蛋白略有区别。     

传染性支气管炎病毒北京毒株与标准毒株结构蛋白的比较

利用鸡传染性支气管炎Ｇｒａｙ，Ｈｏｌｔｅ、Ｍ４１、Ｃｏｎｎ、Ｈ５２、Ｈ１２０标准毒株和北京Ｂ株的特异性多克隆血清，通过Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ技术，对Ｂ株和上述各标准株的结构蛋白进行了分析，并进行了不同血清与毒株结构蛋白间的交叉反应。结果表明，各株病毒都含有四种结构蛋白，从分子量看，Ｈ１２０、Ｈ６２、Ｍ４１的Ｍ蛋白比上述其他株的都小；Ｂ株和Ｇａｒｙ株的Ｓ２蛋白大于其它毒株的。在交叉实验中，Ｂ株和Ｇ     

鸡毒支原体株间结构蛋白及其抗原性变异的比较研究

本研究以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ技术,应用鸡毒支原体国外强毒株Ｓ６、标准株ＰＧ３１,疫苗株Ｆ,北京分离 ＢＧ４４Ｔ、ＮＢ７２特异性多克隆抗血清对以上五株及疫苗株Ｖ、北京分离株Ｃ的结构及其抗原性进行了比较结果表明ＭＧ结构蛋白及其抗原性存在着株间的多样性和一定相似性,其中以Ｆ与Ｓ６、ＢＧ４４Ｔ与ＰＧ３１、ＮＢ７２与Ｃ更为接近,可能具有同源性。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示出了ＭＧ株间结构蛋白微     

传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株(ZJ971毒株)结构蛋白和S1基因的结构分析

对来自浙江地区的传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株（ＺＪ９７１株）的结构蛋白进行了ＳＤＳ电泳分析，用ＲＴ－ＰＣＲ扩增其Ｓ１基因ｃＤＮＡ，并作了测序分析。结果显示，ＺＪ９７１株结构蛋白由２１２０００、１４６０００、９７４００等８条蛋白带组 其他传染性支气管炎病毒株相比缺损１１６０００蛋白条带；Ｓ１基因全长为１７２０ｎｔ，编码１条５５１个氨基酸组成的多肽，其核心苷酸与其他传染性支气管炎病毒株的同源性为９９．     

鸡传染性贫血病毒的分离鉴定

在山东省从死亡率达７２％,混合感染多种病原微生物的海兰蛋白鸡和艾维茵肉鸡群中分离到３株鸡贫血病毒（ＣＡＶ）这些毒株耐体积分数５０％氯仿和７０℃水浴１５ｍｉｎ,能在ＭＤＣＣ－ＭＳＢ１的细胞内增殖,用分离的细胞毒接种１日龄ＳＰＦ鸡呈现典型的难传染性贫血特征性的临床症状和病理变化;用间接免疫荧光检查感染的ＭＤＣＣ－ＭＳＢ１细胞涂片和鸡组织触片,可见特异的核内荧光,分离毒株能被ＣＡＶ－ＴＫ５８０３株抗血清     

狂犬病病毒糖蛋白基因主要功能区的克隆和序列比较分析

对我国不同来源的狂犬病野毒株８２０２、ＢＲＶ、ＭＲＶ以及无毒疫苗株ＳＲＶ９的Ｇ基因４０５～１１４４位核苷酸序列进行了ＲＴ－ＰＣＲ扩增、克隆和序列测定，并应用计算机对其进行了分析比较。结果证明，鹿源８２０２株与中国人用疫苗株为同源株（同源性达９７．０％），因此我国鹿狂犬病极可能是人用疫苗毒株污染所致；同地不同动物分离的ＭＲＶ株和ＢＲＶ株为亲缘关系较远毒株，表明ＢＲＶ引起的牛狂犬病不是由于ＭＲＶ感染所致；疫苗株ＳＲＶ９与３个野毒株同源性在８３％～８４％之间。３个野毒株８２０２、ＢＲＶ、ＭＲＶ及疫苗株ＳＲＶ９的糖基化位点和抗原决定簇内某些氨基酸亦不同。由计算机建立的系统树首次证明我国存在着狂犬病病毒基因亚型。８２０２、ＭＲＶ、ＳＲＶ９和其他对照株的同源性在８５．３％以上，为Ⅰａ亚型；ＢＲＶ与它们的同源性仅为８２．３％，被分为Ⅰｂ亚型。从而证明我国存在亲缘关系较远的狂犬病野毒株     

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒变异株的比较研究

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）变异株Ｈ９５提纯样品经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ,证明Ｈ９５株单抗ＤＥ７和Ｍ４１株单抗６ＤＨ８均能识别Ｈ９５株５４０００蛋白多肽。采用单抗、多抗介导间接ＥＬＩＳＡ试验表明,Ｈ９５毒株能与抗ＩＢＶＭ４１Ｎ蛋白单抗６ＤＨ８和ＩＢＶＭ蛋白单抗ＭＣ发生反应,也能与抗Ｍ４１、Ｇｒａｙ、Ｈｏｌｔｅ、Ｔ、Ｈ５２、Ｎ１１５和分离株Ｃ９００１、ＤＬＺ９１１１的多抗血清反应,同时抗Ｈ９５株的４株单抗、多抗血清也能与上述毒株反应。卵磷脂酶Ｃ处理的Ｈ９５株的血凝活性能被相应的Ｈ９５株的单克隆抗体和高免血清所抑制,也能被Ｍ４１单抗和高免血清所抑制。通过ＲＴ－ＰＣＲ获得了Ｈ９５毒株的免疫原基因Ｓ１,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ和ＩＢＶ的Ｓ探针检测呈阳性。     

从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究

采用猪肺巨噬细胞和Ｍａｒｃ－１４５细胞培养对国内暴发流行ＰＲＲＳ的某地猪场进行了病毒分离，从流产胎儿分离出特征性致细胞病变因子，用ＰＲＲＳＶＳＤＯＷ－１７单克隆抗体进行间接免疫荧光染色，证明从４头流产胎儿分离到４株ＰＲＲＳＶ（ＣＨ－ｌａ，ＣＨ－１ｂ，ＣＨ－ｌｃ，ＣＨ－ｌｄ）这４株毒均可在猪肺巨噬细胞和Ｍａｒｃ－１４５ 细胞上生长，并产生特征性ＣＰＥ变化，用ＰＲＲＳＶ美国分离毒株ＶＲ－２３３２和ＮＶ     

贵州省传染性法氏囊病病毒野毒株核酸乃结构蛋白比较研究

采用氯仿抽提、聚乙二醇沉淀，再经差速离心和蔗糖密度梯度离心，从病变法氏囊组织中提取出较纯的传染性法氏囊病病毒。病毒核酸电泳分析表明，４株ＩＢＤＶ分离株均由双节段ＲＮＡ组成，大小基因片段的电泳迁移率毒株间无差异，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明，ＩＢＤＶ分离株均由４条主要的结构蛋白带组成，近年从免疫鸡群中分离的地方强毒ＪＨ株及引自中监所的Ｉ型强毒Ｊ１Ｃ７株，其主要结构蛋白带与早年分离的ＩＢＤＶ野毒株相似，电     

禽副粘病毒I型结构蛋白分析

鹅副粘病毒ＹＣ９７分离株,鸡源Ｖ９８分离株以及新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４８Ｅ８、ＬａＳＯｔａ和Ｃ３０毒株,鸽副粘病毒ＹＺＰＮＦ２分离株经鸡胚增殖纯化后,进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳,结果显示ＹＧ９７和Ｙ９８２个毒株在５６ｋＤ处比另外４个毒株多出一个条带。用单抗２０１０株进行Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ转印,结果该单抗只对ＹＧ９７和Ｙ９８２个毒株的５６ｋＤ条带反应,证明这２株病毒的结构蛋白与经典的新城疫病毒有     

禽病原性大肠杆菌6种血清型分离株外膜蛋白型的研究

从病鸡中分离的６ 种血清型（ Ｏ２、 Ｏ４６、 Ｏ１８、 Ｏ１２１、 Ｏ７６、 Ｏ１３１）及５ 种标准血清型（ Ｏ１、 Ｏ１５、 Ｏ３５、 Ｏ３６、 Ｏ７８）大肠杆菌中提取外膜蛋白（ Ｏｕｔｅｒ ｍ ｅｍ ｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ），经 Ｓ Ｄ Ｓ－ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 分析表明，分离株 Ｏ７６、 Ｏ１３１及标准株 Ｏ１、 Ｏ３５的外膜蛋白型由２ 条带组成，为 Ｏ Ｍ Ｐ－ １ 型；分离株 Ｏ２、 Ｏ４６、 Ｏ１８、 Ｏ１２１和标准株 Ｏ１５、 Ｏ３６、 Ｏ７８的外膜蛋白型由３ 条带组成，为 Ｏ Ｍ Ｐ－ ２ 型，结果表明，不同血清型菌株之间有相同的 Ｏ Ｍ Ｐ型。     

用SDS—PAGE进行鸡败血霉形体结构蛋白分析

利用SDS－PAGE方法对禽败血霉形体R，S6，F株和6株国内分离株进行了结构蛋白比较分析，电泳凝胶染色扫描结果显示，各株之间结构蛋白差异较大，R，S6株P64蛋白表达量较高，D9604株与其相似性较高，D9601，D9603和D9605与F株均有一条特异的75kDa条带，提示我国分离的MG强毒株可能存在着多样性。     

猪繁殖—呼吸道综合征病毒（PRRSV）CH—1a株基因型鉴定

根据猪繁殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）美洲型毒株和欧洲型毒株的基因组序列设计合成了２对引物,即１００８ＰＳ／１００９ＰＲ和１０１０ＰＬＳ／１０１１ＰＬＲ。我国分离的ＣＨ－１ａ株用这２对引物均能扩增出与预期大小相符的ＲＴ－ＰＣＲ产物,分别与美洲型代表株（ＶＲ－２３３２）的ＲＴ－ＰＣＲ产物大小相当。特异性试验表明,这２对引物均不能扩增其他常见的繁殖障碍相关病毒的ＲＮＡ或ＤＮＡ以及未感染的ＭＡＲＣ－１４５细胞ＲＮＡ。间接免疫荧光试验也证明,ＣＨ－１ａ株与ＰＲＲＳＶ核衣壳蛋白特异性单克隆抗体以及美洲型毒株抗血清均呈阳性反应。因此初步证实ＣＨ－１ａ株为美洲型ＰＲＲＳＶ。     

鸡传染性支气管炎病毒沈阳分离株生物学特性及其免疫原S1基因的克隆与序列分析

本研究对分离自沈阳地区的一株传染性支气管炎病毒（ＳＹ毒株）进行了生物学特性的研究,同时成功地对其免疫原Ｓ１基因进行了ＲＴ－ＰＣＲ扩增、克隆与序列分析。 通过电镜观察、动物回归试验、血凝特性研究等试验验证分离自沈阳地区的ＳＹ毒株确实为一株传染性支气管炎病毒。气管环组织培养交叉中和试验结果表明,分离株ＳＹ株不同于参考毒株澳大利亚Ｔ、Ｈ５２、Ｍ４１,且不同于国内其它流行株ＨＤ、ＨＢ、ＸＢ、ＤＢ等,是一个新的变异株。 利用ＩＢＶ Ｓ１基因特异性寡聚核苷酸引物,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增ＳＹ毒株的Ｓ１基因,得到预期的约１．７Ｋｂ片段;并将扩增所得ｃＤＮＡ插入克隆质粒ｐＵＣ１９的ＥｃｏＲⅠ／ＢａｍＨⅠ位点,在大肠杆菌ＤＨ５ａ中实现目的基因的克隆。经限制性核酸内切酶分析及ＰＣＲ鉴定,证实为阳性重组质粒,利用末端双脱氧链终止法对其测序,得到Ｓ１基因全长１６４０ｂｐ,包括整个开放阅读框。通过序列分析软件ＤＮＡＳＩＳ、ＰＲＯＳＩＳ、ＭＥＧＡ等软件对Ｓ１基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行分析,结果表明：分离株ＳＹ与７株参考株和国内流行株ＨＤ株相比,无论是核苷酸序列同源百分率还是氨基酸序列同源百分离都较低,均未达到８０％,这就提示我们ＳＹ毒     

传染性法氏囊病病毒野毒株与疫苗毒株核酸及结构蛋白的比较研究

H1、H2野毒株与D－78、Uv疫苗株的RNA都由两个基因片段组成，其电泳迁移率，各毒株之间无差异；H2野毒株大片段基因密度低于小片段基因，其他毒株的大小片段基因密度相同，所有毒株都有5种相同的结构蛋白，分子量分别为92K（Vp1）、48K（Vpx)、42K（Vp2)、32K（Vp3)和30K（Vp4)，此外，D－78、Vv株比H1、H2株多52K和67K两种蛋白；Uv和H2毒株比其他毒株多一种24K蛋白；H2株还多一种15K蛋白，其中Vpx、Vp2、Vp5、Vp4蛋白及52K和24K蛋白有抗原活必,有毒株的Vp2和Vp5蛋白是主要蛋白，H2野毒株Vp2蛋白相对百分含量明显高于其他毒朱，而Vp3和Vd4蛋白相对百分含量低于其他毒株，核酸和蛋白分析结果相对应，说明H2野毒株的分子特性与毒株不同。     

DNA—RNA杂交检测传染性支气管炎病毒

以光敏生物毒标记传染性支气管炎病毒Ａｒｋ株３’末端及部分Ｎ蛋白基因的ｃＤＮＡ克隆片段，进而与提取的ＩＢＶ标准毒株Ｍ４１，Ｈ５２和分离的ＹＧ以及新城疫病毒，传染性法氏囊炎病毒、病毒性关节炎病毒的标准株ＬａＳｏｔａ，Ｄ７８和Ｓ１１３３的ＲＮＡ进行斑点杂交试验。     

反转录-聚合酶链反应检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究

本研究成功地建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）的反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术。根据ＰＲＲＳＶ两个标准毒株（美洲ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２株及欧洲ＬＶ株）膜蛋白和核衣壳蛋白的编码序列差异,自行设计合成了各自的引物,对两标准毒株及广州分离株（ＣＤＧ９５１２）进行扩增,获得了预期久为１ｋｂ的扩增片段。酶切鉴定,结果进一步主宰两标准毒株间基因差异显著,分离株与美洲株更为接近,百不同于     

羊接触传染性脓疱性皮炎病毒核酸及蛋白类型分析

对从中国不同地区采集的１１株羊接触传染性脓疱性皮炎病毒（ｃｏｎｔａｇｉｏｕｓｅｃｔｈｙｍａｖｉｒｕｓ,ＣＥＶ;ｏｒｆｖｉｒｕｓ）的痂块毒ＤＮＡ进行提取,用ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ、ＨｐａⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＫｐｎⅠ酶切,琼脂糖凝胶电泳,确定了各毒株的核酸及分子量。结果表明,各毒株的核酸酶切片段在８～１５个之间,病毒基因组大小有１０～２５ｋｂ的差异。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了经ＮＰ－４０和２－巯基乙醇裂解蔗糖密度梯度离心纯化的各病毒株的囊膜蛋白,结果显示,各毒株可分离出１８～３３个不同的蛋白区带,毒株间的差异主要集中在３６４００～８００００区带之间。结合２次交互免疫试验结果,将以上１１株羊接触传染性脓疱性皮炎病毒分为４大类。     

禽源大肠杆菌O2,O78分离株外膜蛋白型的研究

从１７个禽大肠杆菌病病例的Ｏ２、Ｏ７８分离株提取的主要外膜蛋白（ＯＭＦ），在ＳＤＳ－ｐＡＧＥ中出现了２个ＯＭＰ型。其中，９个Ｏ２分离株属２个ＯＭＰ型，８个Ｏ７８分离株均属其中的１个ＯＭＰ型。结果表明，分离到的Ｏ２、Ｏ７８大肠杆菌具有多样性的ＯＭＰ型，而且两者存在着共同的ＯＭＰ型。     

兔出血症病毒JL株分离鉴定及VP60基因主要抗原表位分析

采用血凝试验、电镜观察、RT－PCR方法分离鉴定了1株JL株兔出血症病毒（RHDV），扩增衣壳蛋白VP60基因，将扩增片段克隆到pMDl8－T载体上，经酶切鉴定后测序。结果显示，VP60基因全长1740bp，编码580个氨基酸；JL株与其他RHDV分离株比较，核苷酸同源性为93．7％－99．2％，氨基酸同源性在97．3％－99．5％，在VP606个区中，A、B、D、F是稳定区，氨基酸变异多发生在衣壳蛋白C、E区，表明毒株具有高度保守性；将JL株与国内外标准株蛋白氨基酸变畀及其亲水性、柔性区、抗原区和表面结构进行比较分析，预测RHDV VP60细胞表位。