基于CRISPR/Cas9系统的MDCK细胞IFN-β1编码序列的敲除

为了建立高品质的犬肾(MDCK)单克隆细胞系,使用CRISPR/Cas9技术实现MDCK细胞IFN-β1基因的敲除,构建细胞培养禽流感病毒(AIV)增殖体系。首先,根据CRISPR/Cas9系统的技术要求构建了Cas9表达载体和sgRNA载体;然后,用3种载体共转染MDCK细胞,通过GFP阳性特征分选单细胞克隆,单细胞克隆培养在96孔板中。通过PCR扩增和对IFN-β1靶序列进行测序,确定了阳性MDCK单细胞克隆中IFN-β1的敲除。结果成功构建了具有IFN-β1敲除的MDCK单细胞克隆细胞系,与原始细胞相比,该细胞系的病毒增殖能力提高。     

鸡痘病毒抗体在鹌鹑体内的消长规律

采用鸡痘弱毒疫苗按1个使用剂量、增加免疫剂量、2次免疫和对照组(生理盐水)对鹌鹑进行刺种,在免疫后的1～8周采血,检测特异性抗体和中和抗体,研究鸡痘病毒抗体在鹌鹑体内的消长规律,对鸡痘病毒疫苗应用于鹌鹑的免疫效果及生物安伞性进行初步评价.在试验期间试验动物精神状态良好,采食、饮水正常,未发生病理变化:抗鸡痘病毒特异性抗体和中和抗体效价免疫后1周显著升高,3周达到高峰,5周开始下降,8周时仍高于对照组的抗体水平,增加免疫剂量组产生的抗体水平高,但消长规律与使用剂量组相同.表明鸡痘病毒疫苗能刺激鹌鹑产生特异性抗体和中和抗体,维持时间较长,无毒副作用,生物安全性好.     

不同结构对囊素样肽的免疫活性影响

化学合成单拷贝（BS）、30拷贝串联（KG30）和30拷贝分支结构（MAP）3种不同结构的囊素样肽，通过体外外周血淋巴细胞刺激增殖试验、杂交瘤细胞抗体分泌刺激试验、E-玫瑰花环试验和体内小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、新城疫疫苗免疫应答的测定，比较了其免疫增强活性。结果表明，BS和MAP的活性显著高于KG30，BS体外试验活性优于MAP，而MAP体内试验活性优于KS。结构对囊素的活性有显著影响，以分支结构的囊素增强免疫效果最好。     

兔出血症病毒VP60蛋白T细胞表位优势区的筛选

应用戊二醛醛化的人的“O”型红细胞纯化兔出血症病毒(RHDV),对非免兔进行3次免疫后,经分段表达的重组杆状病毒、纯化的病毒、Con A分别刺激后进行细胞增殖检测、IL-2、IL-4、IFN-γ检测.WST检测结果表明,3号重组杆状病毒刺激的值最高,所有重组杆状病毒与空白对照组差异显著；IL-2和IFN-γ检测结果表明,3号重组杆状病毒刺激的值最高,其次为2号、4号,而1号、5号重组杆状病毒刺激指数较低,但均高于对照组；IL-4检测结果表明,2号、3号、4号重组杆状病毒刺激的值低于对照组,1号、5号重组杆状病毒刺激组略低于对照组.研究结果表明,重组病毒3号区域为RHDV VP60 T细胞表位的优势区,从而为后期的试验奠定了基础.     

猪链球菌2型与马链球菌兽疫亚种生物学特性的初步比较

1998年从病死猪分离了数株链球菌 ,其中 2株编号为 980 1,980 2。经鉴定 ,980 1株为猪链球菌 2型 ,980 2株为马链球菌兽疫亚种。 980 1株系从暴发流行地区的病猪中分离 ,同时在该流行地区还发生畜禽从业人员感染相同血清型的链球菌而死亡的病例 ;980 2株系从散发病猪中分离。临床有共同点 ,又有各自特点。病理变化均呈现典型的败血症变化 ,但肝、脾、肺等病变上有一些差别 ,而染色镜检基本一致。对兔均敏感 ,对小白鼠和猪的敏感性有所不同。 980 1株菌落灰色 ,中心浑浊 ,直径 0 5mm ,α溶血 ,有草绿色色素沉着 ;980 2株菌落湿润 ,半透明 ,直径 1 5～ 2mm ,β溶血。 980 1株对氧哌嗪青霉素、头孢他啶、氨苄青霉素最敏感 ;980 2株对氧哌嗪青霉素、复方磺胺、头孢哌酮、呋喃妥因最敏感     

肾型传染性支气管炎病毒M基因的遗传分析及其在杆状病毒表达系统中的表达

对肾型鸡传染性支气管炎病毒分离株Ck/Jiangsu/DS10/2008株(DS10株)膜蛋白(M)基因进行扩增、克隆和序列测定,并与GenBank中的其它25株参考株的M基因进行比对分析并构建进化树,研究其遗传进化关系。另将M基因克隆至杆状病毒表达系统pFastBac1载体并转染Sf9昆虫细胞进行表达,经间接免疫荧光鉴定,用琼扩试验验证表达产物的反应性,以研究M基因表达产物的生物学活性。测序结果表明DS10的M基因全长为678bp,编码225个氨基酸。遗传进化分析表明,DS10病毒与其它不同致病型的传染性支气管炎病毒共属同一大分支。间接免疫荧光检测表明,M蛋白在Sf9细胞中得到表达,琼扩试验验证表达产物具有良好的反应性,以上结果表明所表达的M蛋白具有良好的生物学活性。本研究表达的M蛋白可为其生物学活性研究及其诊断抗原、新型疫苗开发提供基础材料。     

猪传染性胸膜肺炎的流行病学和流行特点

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的一种接触性传染病,是猪的一种重要呼吸道疾病,在许多养猪国家流行,已成为世界性工业化养猪的五大疫病之一,给养猪业造成重大的经济损失。近年来该病的流行日趋严重,在我国也呈逐年上升趋势,严重阻碍了养猪业的健康发展。9～11月是猪传染性胸膜肺炎的高发季节,气温的骤变也可引起本病的发生或加速疾病的传播,使发病率和死亡率增加。众多的血清型以及血清型之间的交互免疫保护率低,使得本病的防控也较为困难。科学、全面的流行病学,快速、准确的诊断技术,合理、有效的防控方法,正确、安全的疫苗应用对防控猪传染性胸膜肺炎病尤为重要。     

猪圆环病毒2型与猪细小病毒混合 感染对仔猪致病性的研究

对35日龄健康仔猪进行人工单独或混合感染猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2),采用临床症状、组织病理学变化和血清学检测等手段,比较了不同实验组攻毒后仔猪的症状差异。实验结果显示:PPV和PCV2混合感染能够引起更加严重的断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)症状,并加重PCV2引起的间质性肺炎和仔猪消瘦的严重程度;混合感染后,仔猪病毒血症出现更早,持续时间更长,且病毒含量明显高于单独感染组;混合感染组仔猪的PCV2 ELISA抗体水平和血清抗体水平均显著高于PCV2单独感染组的。说明PPV能够明显增强PCV2的临床症状,加重PMWS的发病程度。     

自制微生态制剂在肉鸡中的应用

自制微生态制剂在肉鸡中的应用何家惠侯继波徐筠遐王继春刘冬霞邵春荣张顺珍胡来根（江苏省农业科学院畜牧兽医研究所南京２１００９５以往药物的应用在疫病防治中占有很重要的地位，长期使用的负面效应就是药物残留及病原菌抗药性的加剧。现代养禽业的管理方法阻断了雏鸡...