| 基于CRISPR/Cas9系统的MDCK细胞IFN-β1编码序列的敲除 |
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| 引用本文： | 曹兴林,恽君雯,陈丽,宋伟,侯继波,冯磊,徐业芬.基于CRISPR/Cas9系统的MDCK细胞IFN-β1编码序列的敲除[J].江苏农业科学,2020,48(7):59-65. |
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| 作者姓名： | 曹兴林 恽君雯 陈丽 宋伟 侯继波 冯磊 徐业芬 |
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| 作者单位： | 西藏农牧学院动物科学学院,西藏林芝860000;西藏农牧学院西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室,西藏林芝860000;江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009;西藏农牧学院动物科学学院,西藏林芝860000;江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;西藏农牧学院西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室,西藏林芝860000 |
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| 基金项目： | 江苏省自然科学基金面上项目;国家重点研发计划 |
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| 摘 要： | 为了建立高品质的犬肾(MDCK)单克隆细胞系,使用CRISPR/Cas9技术实现MDCK细胞IFN-β1基因的敲除,构建细胞培养禽流感病毒(AIV)增殖体系。首先,根据CRISPR/Cas9系统的技术要求构建了Cas9表达载体和sgRNA载体;然后,用3种载体共转染MDCK细胞,通过GFP阳性特征分选单细胞克隆,单细胞克隆培养在96孔板中。通过PCR扩增和对IFN-β1靶序列进行测序,确定了阳性MDCK单细胞克隆中IFN-β1的敲除。结果成功构建了具有IFN-β1敲除的MDCK单细胞克隆细胞系,与原始细胞相比,该细胞系的病毒增殖能力提高。
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| 关 键 词： | CRISPR/Cas9 犬肾(MDCK)细胞 IFN-β1 禽流感病毒(AIV) 增毒能力 |
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