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1.
2.
YTH家族蛋白2(YTH domain-containing family protein,YTHDF2)作为一种m~6A修饰的结合蛋白,可对底物mRNA的剪接,翻译,降解等过程进行调控。本研究通过RT-PCR首次获得了猪YTHDF2编码基因序列,全长1 743 bp,编码580个氨基酸,基因进化树分析显示该基因在各物种间保守性较高。将猪YTHDF2编码基因克隆至原核表达载体pET-28a (+)中,重组质粒pET-28a (+)-YTHDF2在大肠杆菌BL-21菌株中进行原核表达,成功获得了大量带His标签的猪YTHDH2重组蛋白,大小约70 kD。以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备猪YTHDF2多抗血清,ELISA结果表明制备的兔抗猪YTHDF2多抗血清效价为1:204 800,间接免疫荧光(IFA)和Western blot试验均表明该多克隆抗体具有良好的反应性和特异性。猪YTHDF2基因序列的获得及多克隆抗体的制备为进一步研究YTHDF2在猪mRNA m~6A甲基化过程中的生物学功能奠定了基础。 相似文献
3.
近年来,随着检测技术的快速发展,蛋白质组学呈现了新的研究趋势,其中家禽病毒性病原感染蛋白质组学研究逐渐引起了国内外专家的兴趣,并在近几年取得了一定的成果,文章对家禽主要病毒蛋白质组学研究的进展进行了综述。 相似文献
4.
本研究从青海省14个不同的地区捕捉到的138只鼠兔的817份组织样品中分离到一株H9N2亚型流感病毒。通过RT—PcR技术扩增H9N2流感病毒基因组的8个基因片段,并将进行序列分析,绘制系统进化树。结果显示,从鼠兔分离的H9N2亚型禽流感病毒属于美洲谱系,与A/Turkev/Wiscnflsill/1/1966(H9N2)进化距离最近。鸡静脉指数(IVPI)及氨基酸序列分析显示病毒具有弱毒株的特征。 相似文献
5.
6.
采用辛酸一硫酸铵盐析和SuperdexTM-200 凝胶层析分离纯化猪血清IgG,免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术获得8株稳定分泌抗猪IgG 单克隆抗体的杂交瘤细胞.Ig 亚类分析表明,所制备单克隆抗体的轻链亚类均为K,重链除6H3为IgG2b外,其余7株均属于IgG1.Western blot分析显示,5株单克隆抗体识别猪IgG轻链,3株单克隆抗体识别猪IgG重链.以蛋白G亲和层析纯化单克隆抗体7H1腹水,用改良过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,结果显示,HRP 标记抗猪IgG单克隆抗体对纯化猪IgG的工作浓度达1:12 800.将HRP标记鼠抗猪IgG单克隆抗体与HRP标记羊抗猪IgG多克隆抗体应用于猪血清圆环病毒抗体检测,二者符合率为95.12%,其ELISA和Westem blot的工作浓度为1:2 000和1:10000,表明HRP标记抗猪IgG单克隆抗体具有高度的敏感性.本研究制备的酶标抗猪IgG单克隆抗体为猪病的免疫诊断试剂研究和猪细胞生物学研究提供了一种基础工具. 相似文献
7.
鸡传染性腺胃炎病原分离和初步鉴定 总被引:9,自引:0,他引:9
从1997年在浙江省建德市发生的一种新的以腺胃肿大为特症的鸡传染病病例中收集的腺胃组织(ZJ971)为鸡胚接种材料,感染鸡胚第1代可达33.3%的死亡率,长3代达75%的死亡率并出现规律性死亡,自第6代开始死亡率达100%,鸡胚尿囊液经1%胰酶处理后可凝集鸡和刀的红细胞,电镜观察可见直径90 ̄190nm的带囊膜和突起的冠状病毒粒子,中和试验结果显示低滴度的ZJ971可被IBV-H52和T株血清中和 相似文献
8.
规模猪场4大疫病的血清学检测及免疫抑制病因分析 总被引:4,自引:0,他引:4
选取杭州、绍兴、嘉兴和湖州4个地区的规模猪场为试验猪场,用正向间接血凝试验(IHA)检测猪瘟病毒(CSFV)和口蹄疫病毒(FMDV)抗体合格率;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)抗体阳性率,分析免疫抑制状况。同时,采取临床可疑病料,用RT-PCR技术检测PRRSV、PCV2、CSFV和伪狂犬病毒(PRV)的感染率。结果显示:不同年龄猪群中,PCV2抗体阳性率都在96.0%以上,而CSFV、FMDV抗体合格率及PRRSV抗体阳性率呈现一致的变化趋势,即母猪最高,哺乳仔猪其次,培育猪和肥育猪最低;在病原检测中,PRRSV和PCV2检出率最高,分别为44.3%和60.7%。另外,双重感染和多重感染明显,特别是PRRSV+PCV2+CSFV三重感染,阳性率达7.6%。本试验结果为制定有效的免疫程序等防治措施提供科学依据。 相似文献
9.
以纯化的重组鸡IL-2蛋白(rchIL-2)为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞进行筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,最终获得4株持续且稳定分泌抗鸡IL-2单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为:1A12、4A3、3E7和4E1.4株MAb的抗体类型均为IgG1,轻链为κ;MAb的ELISA效价分别为5.12×105、1.02×106、2.56×105和4.09×106.Western-blot分析表明,所获得的1A12、4A3、3E7和4E1 4株单克隆抗体与rchIL-2均有反应.MAb的制备成功为进一步开展chIL-2的功能研究奠定了基础. 相似文献
10.
鸭的类似鸡白细胞介素2基因的克隆及遗传进化分析 总被引:10,自引:0,他引:10
通过RT—PCR和DNA测序技术,克隆和测定了绍兴麻鸭的一种类似鸡白细胞介素2(IL-2)基因的核苷酸序列,并构建了该基因编码蛋白的三维结构分子模型。结果显示,绍兴麻鸭的类似于鸡IL-2基因的核苷酸长度由748个碱基组成,编码产物为由140个氨基酸残基组成的多肽,编码产物中含有21个氨基酸残基组成的信号肽。绍兴麻鸭的类似于鸡IL-2基因的核苷酸及编码产物,与鸡和火鸡IL-2的一致性分别为71.4%~72.1%和55.0%~57.9%,与哺乳类等动物IL-2的一致性分别为22.1%~28.8%和14.3%~17.1%。对绍兴麻鸭的类似于鸡IL-2基因蛋白编码产物的系统进化树分析表明,其编码产物与鸡和火鸡IL-2具有较远的亲缘关系。绍兴麻鸭的类似于鸡IL-2基因编码产物的三维结构,预测由4个α-螺旋结构和2个β折叠组成。这些研究结果预示。鸭的类似于鸡IL-2基因编码产物,在生物学功能上与哺乳动物和其他禽类具有很大的差异。 相似文献