硒蛋白X基因克隆、定点突变、原核表达及多克隆抗体制备

本试验旨在克隆鉴定猪硒蛋白X(Sel X)基因,将其定点突变后进行原核表达,获得重组蛋白,并制备猪Sel X多克隆抗体,为以猪为模型Sel X功能研究奠定基础。利用c DNA末端快速克隆(3'-RACE)技术从猪肝脏总RNA扩增出含开放阅读框(ORF)至poly(A)共1 215 bp的Sel X基因c DNA片段,其348 bp的ORF编码区和对应的氨基酸残基与人相应序列分别有88%和91%序列同源性,猪Sel X基因提交NCBI Gen Bank数据库,序列号为EF113597。ORF编码氨基酸残基中硒代半胱氨酸(Sec)位于C-端第95个残基,其编码密码子TGA经定点突变为半胱氨酸(Cys)的TGT后,将其插入载体p ET30,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,在0.5 mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导2 h获得融合表达产物,经His-tag亲和层析后,获得分子质量为18.0 ku的纯化蛋白。将纯化获得的Sel X基因突变体融合蛋白(Sel Xm)免疫兔子,得到效价高达1∶20 000的多克隆抗体,免疫印迹(Western-blot)结果显示该抗体能特异性识别纯化的Sel Xm和猪肝脏中相应Sel X。本试验成功克隆并鉴定了猪Sel X基因,并制备了其多克隆抗体。     

microRNA在骨骼肌发育中的功能及其表达的营养调控

microRNA( miRNA)是真核生物中一类参与调控基因表达的非编码小分子RNA,它通过翻译抑制和使靶mRNA降解,在基因表达中起着负调控作用,与骨骼肌发育、疾病等密切相关.营养可以调控miRNA及其靶基因的表达,这将为更深层次诠释营养素的作用机理提供新的研究方向.本文综述了miRNA的结构和作用机制、骨骼肌miR...     

板栗IFRs启动子分离及表达载体构建

以湖北省罗田板栗品种乌壳栗为试材,采用染色体步移的方法获得了板栗IFR启动子序列,研究了板栗黄酮代谢途径中关键基因IFR的启动子顺式作用原件及可能对雄花黄酮类物质合成的影响,并构建pCAMBIA1304融合载体。以期揭示板栗雄花黄酮代谢合成途径,IFRs启动子上游所包含的顺式元件对环境和栽培措施的响应及对板栗雄花发育的影响。结果表明:长度为1 688bp的板栗IFRs启动子序列包含多种类型的顺式作用元件,包括光响应元件GT-1motif、ASF-1motif等;与赤霉素,脱落酸、乙烯等相关的激素响应元件,如WRKY motif(赤霉素信号途径转录因子)、GCC-box(乙烯应答元件)以及Dc3(脱落酸响应元件)等;逆境胁迫相关的功能元件,如与抗损伤相关的ERF3、抗病相关的TGTCA-box等。以此推测,CmIFR基因的表达可能会受到以上光、激素、各种生物或者非生物胁迫等因素的影响。为了后期进一步研究启动子的功能,按照启动子功能区域,设计了CmIFR启动子不同长度的6个功能片段,并将这些片段替换pCAMBIA1304中的35S启动子,成功构建了由CmIFRPs启动子不同区域驱动的gus基因的植物表达载体pCAMBIA1304+CmIFRPs。     

Kruppel样因子15对脂肪沉积和肌纤维类型的影响及其可能机制

Kruppel样因子15(KLF15)是一种新发现的Kruppel样因子家族(KLFs)成员,为一种真核锌指蛋白转录因子。KLF15在动物体内呈现多组织表达特性,该基因过表达能促进动物脂肪沉积,且能影响肉质性状候选基因和Ⅰ型肌纤维基因的表达。因此,深入研究KLF15对脂肪沉积和肌纤维类型的影响及其可能机制,将为改善动物肉品质提供新的思路。本文综述了KLF15的发现、结构特征、表达规律及其与脂肪沉积和Ⅰ型肌纤维之间的关系。     

应用PCR方法检测鸡传染性贫血病毒

根据鸡传染性贫血病毒(CIAV)基因组序列，设计一对引物扩增基因组上nt358～nt1042之间684bp DNA片段。在CIAV感染MDCC-MSBl细胞系中提取核酸为模板可扩增出相应DNA片段，且以感染细胞核酸为模板反应敏感性可达1fg，而以其他病原核酸为模板扩增结果均为阴性。应用该PCR方法对实验感染鸡肝脏、脾脏、胸腺、肾脏、法氏囊、骨髓、白细胞、泄殖腔棉拭子等不同样品进行检测，均可扩增出相应DNA片段。证明我们建立的PCR方法敏感性特异性强，可用于临床感染不同组织CIAV的检测。     

磷酸酪氨酸互作结构域 １基因对肉质性状的调控

磷酸酪氨酸互作结构域１（ｐｈｏｓｐｈｏｔｙｒｏｓｉｎｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｄｏｍａｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ１，ＰＩＤ１）基因是最近发现的与脂肪代谢相关的新基因。在不同动物的不同组织中均能检测到 ＰＩＤ１基因的表达。ＰＩＤ１基因表达过量能促进前体脂肪细胞的增殖，影响肉质性状相关候选基因［如过氧化物酶体增殖物激活受体 γ辅激活因子 １α（ＰＧＣ-１α）和解偶联蛋白（ＵＣＰ）基因］的表达。因此，深入探讨 ＰＩＤ１基因在畜禽肉品质上的调控作用及其影响机制，将为改善畜禽肉品质提供新的思路。本文概述了 ＰＩＤ１基因的发现和表达规律、ＰＩＤ１蛋白的结构、ＰＩＤ１基因与肉质性状候选基因的关系及其在畜禽肉质调控中的可能作用。     

湿地松良种壮苗培育实用技术

本文对湿地松良种和圃地选择、沙床催芽、芽苗移栽、苗期管理等一系列技术措施进行了详尽的阐述,为培育湿地松良种壮苗提供了科学的依据。     

体外模拟消化环境对鱼油氧化的影响研究

本文采用硫代巴比妥酸反应物法(TBARS),分别测定新鲜鱼油、轻度氧化鱼油及新鲜乳化鱼油在体外模拟消化前后的过氧化值,以探究人体消化环境对鱼油品质的影响。结果表明:消化过程均能促进3种鱼油的氧化,且肠消化液对鱼油氧化的影响更显著,新鲜乳化鱼油的氧化程度最高。建议人们在摄食鱼油时,应同时摄入富含抗氧化营养素的食品,以保证鱼油的功效,降低鱼油氧化对人体的危害。     

基于SWOT分析的政和白茶产业发展战略探讨

福建省政和县是我国白茶主产区之一，所产白茶以其独有的优异品质在出口市场上占有重要的地位，白茶产业已成为该县的支柱产业之一，是农民收入的重要来源：然而，目前政和白茶产业发展尚处于初步成长阶段，本文从政和白茶产业发展现状着手，基于SWOT分析框架，探讨政和白茶产业发展战略。