人工雌性激素己烯雌酚单克隆抗体的制备及表征

合成了己烯雌酚的半抗原CP-DES,并将半抗原与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)共价偶联制备免疫原和包被原。将免疫好的Balb/c小鼠脾脏细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选出了1株能稳定分泌己烯雌酚单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D87C412C7。分析该杂交瘤细胞的染色体,并以间接酶联免疫吸附分析法(iELISA)检测了单克隆抗体免疫球蛋白的类型。获得的杂交瘤细胞的平均染色体数目为45-50对左右,它分泌IgG1亚类的单克隆抗体。该细胞株体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定,细胞上清效价大于640,诱导腹水效价大于108,该单克隆抗体的检测限IC20=2.3ng/ml,与己烯雌酚结构类似物存在一定的交叉反应,与两种载体蛋白(BSA,OVA)无交叉反应。本研究为己烯雌酚ELISA检测方法的建立提供了条件。     

2009年鸡重要疫病的流行动态分析

通过实验室大量样本检测,结合现场调查、病原分离、必要的生物学特性及分子生物学研究,在2008年禽病流行动态分析及研究基础上,对2009年需重点关注的疫病提出流行预测及分析,供广大养禽业者及相关研究人员参考.     

近期有关鸡病应关注的一些问题

<正>1禽流感1.1禽流感首免时间实际上防疫疫苗就比不防疫要强。要想管好生产,做到不影响生产成绩,必须免疫自家苗加Re-6。凡是禽流感疫苗,都是有效的。唯一的差别是第一次免疫的时间,实际上要根据抗体的高低来决定,我建议H5N1在10日龄左右免疫最为合适,最早不能超过7日龄。因为每次进鸡时都会消毒,做隔离防控,很注意外界的影响。所以说1日龄防疫,是错误的。通常我们的想法是尽早的建立有效抗体水平。但是对H5N1来说,晚点建立问题不大。     

传染性支气管炎病毒的分离提纯及蛋白电泳分析

通过ＳＰＦ鸡胚接种分别对传染性支气管炎病毒的２ 个标准毒株Ｍ４１、ＩＢＶ－ Ｔ 株，４ 株山东分离株及１ 株北京分离株进行扩增繁殖；利用差速离心法、蔗糖不连续密度梯度离心法进行提纯；用ＳＤＳ－ 聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行蛋白分析。结果表明：各毒株都含有四种结构蛋白，且各毒株结构蛋白分子量基本相似，其中仅Ｍ 和Ｓ蛋白略有区别     

禽副粘病毒2型(PMV-2)群特异性单克隆抗体的研究

禽副粘病毒2型（Yucaipa株）鸡胚成纤维细胞适应毒经差速离心和蔗糖密度梯度离心法提纯，免疫Balb/c小鼠，取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，经间接ELISA方法筛选，有限稀释3次克隆，获得了两株分泌PMV-2单克隆抗体的杂交瘤细胞株6E9和7E5。经鉴定两株单抗均为IgG1亚类，杂交瘤细胞的平均染色体分别为96条和98条。细胞培养上清及腹水效价分别为1：25600、1：25600、1：51200和1：10^5、1:10^7。6E9和7E5单抗能稳定分泌抗体且与NDV、AIV、EDSV无交叉反应。间接ELISA实验表明4株PMV-2（Yucaipa株、F4株、F6株和F8株）均含有单抗6E9和7E5所针对的位点。     

山东省传染性支气管炎病毒分离株的电镜观察

从山东省分离到4株病毒株，经病理剖检、鸡胚传代，血凝检测、动物回归、电镜和免疫电镜观察确证为传染性支气管炎病毒。将分离毒分别接种SPF鸡胚，制备各自的阳性血情，经磷钨酸负染，电镜和免疫电镜观察。可见到典型的冠状病毒粒子，病毒的直径界于60－200mm之间，呈多形性，有囊膜，个别有纤突。病毒大量聚集，各株病毒在形态上无差异。     

禽副粘病毒2型(PMV-2)致病性的研究

7日龄SPF鸡经滴鼻、点眼感染PMV-2，可引起轻微的呼吸道症状，病理组织学观察可见气管粘液分泌亢进和少量的淋巴细胞浸润。PMV-2与传染性支气管炎（IBV）或鸡毒支原体（MG）协同感染比单纯感染这三种病原的任何一种均呈现更严重的呼吸道症状，病理组织变化呈气管纤毛部分或全部脱落，气管粘膜上皮细胞不同程度的变性、脱落。固有层和粘膜下层严重水肿，有大量淋巴细胞、巨噬细胞和异嗜细胞浸润。SPF雏鸡感染PMV-2后的不同时间检查病毒在鸡体内的分布规律，结果表明，PMV-2在法氏囊中大量分布；气管、肺、胸腺中有较多病毒；大脑、脾和肾脏只有少量病毒存在。上述实验结果揭示PMV-2感染SPF雏鸡致病性较弱，PMV-2在鸡呼吸道综合征中起一定作用。     

单抗捕捉ELISA检测AEV抗体方法的研究

本研究初步建立了检测ＡＥＶ抗体的单抗捕捉ＥＬＩＳＡ　方法。ＡＥＶ腹水单抗（腹水效价为１　∶１×１０６）最佳稀释度为１∶２００，ＡＥＶ抗原工作浓度为１６．０８　μｇ／ｍＬ，血清稀释度为１∶１　００，　兔抗鸡酶标抗体工作浓度为１∶５００。经阻断试验、交叉试验、重复试验，以及与进口试剂　盒　进行平行检测４０份血清，总符合率为９２．５％，表明该方法特异性强、重复性好、敏感性高，　是一种有应用前景的方法。     

半番鸭呼肠孤病毒单克隆抗体的制备

禽呼肠孤病毒（avian reovirus）在各种禽类中普遍存在,主要感染鸡,造成鸡的病毒性关节炎。番鸭的呼肠孤病毒感染,早在1950年南非就有记载,1972年法国首次从番鸭中分离到病毒。近几年来,我国闽、浙等番鸭饲养地区相继发生了一种以肝、脾、胰腺表面出现白色坏死点为特征的传染病,发病率和死亡率均较高。2001年,吴宝成等经病原分离鉴定,确定该病是由禽呼肠孤病毒引起的。其后,多位研究者分别从临床感染发病的半番鸭、鹅中分离到禽呼肠孤病毒。     

一株疑似外来鸡致病性大肠杆菌的分离与鉴定

通过细菌分离培养、形态学观察、生化试验和O血清型鉴定证实从某批国外进口发病雏鸡体内分离出一株大肠杆菌(F株),并利用动物试验成功复制了疾病.药敏试验和动物试验的结果表明,该大肠杆菌分离株耐药谱与国内分离菌株明显不同,对国内分离菌普遍耐药的喹诺酮类药物十分敏感;该茵对雏鸡具有明显的致病性,通过注射途径感染后的临床症状和病理变化都与自然病例类似;结合进鸡后34 h就发病并且仅发生于4个系别雏鸡中1个系别这一临床发病的特殊性,表明该大肠杆菌很可能是从国外携带而来.