产蛋下降综合症H_（91）病毒基因组DNA的酶切分析

从发病鸡群中分离的产蛋下降综合症病毒（ＥＤＳ＿（－７６））Ｈ＿（９１）株接种鹅胚收获的尿囊液，用氯化铯密度梯度离心等方法纯化了ＥＤＳ病毒。电镜下观察到病毒无囊膜，大小为７０～８５ｎｍ。从纯化的病毒悬液提取的核酸，经琼脂糖凝胶电泳只出现一条分子量为３４ｋｂ、背景清晰的核酸带。用６种限制性内切酶对其基因组ＤＮＡ进行了酶切分析，各种酶消化分别产生４，４，９，９，１１和３条片段。将此结果与ＥＤＳ标准株ＡＶ＿（－１２７）株基因组ＤＮＡ由相同的内切酶消化的结果进行比较发现，由ＨｉｎｄⅢ和ＳｍａⅠ消化２个病毒基因组ＤＮＡ产生的片段数及大小有些差异。     

鹅细小病毒核酸探针的制备及应用

由纯化的鹅细小病毒(即小鹅瘟病毒,GPV)提取病毒核酸,经琼脂糖凝胶电泳,在以 Lambda DNA-HindⅢ消化物作为标记时,病毒核酸条带位于4.3～6.5kb 之同。约5.0kb.由制备性凝胶电泳纯化的病毒核酸在非变性条件下同非放射性 digoxigenin 进行标记而制备 DNA探针.在特异性检测中.该探针仅与小鹅瘟病毒核酸发生阳性反应,而不与正常鹅胚组织、鹅胚尿囊液、鹅肝组织、鹅肠组织及其他病毒核酸抽提物发生反应.该探针能有效地检出通过 Southern blot 和 dot blot 固定到硝酸纤维素膜上的同源 DNA(能检出0.1pg).对送检的疑患小鹅瘟的病鹅肝脏、肠及其内容物抽提的核酸检测的结果与临床诊断和荧光抗体检测的结果完成一致.整个检测过程快速、准确和方便。     

马立克氏病病毒（MDV）糖蛋白D基因的分离克隆,定序及其在大肠杆…

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出ＭＤＶ糖蛋白（ｇＤ）抗原基因１２０９ｂｐ编码序列。将该ＰＣＲ扩增产物于ＥｃｏＲＩ和ＫｐｎⅠ位点克隆进行ｐＵＣ１８质粒载体中。将ｇＤ重组ｐＵＣ１８质粒ＤＮＡ用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（Ｄｉｇ）标记后，在Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ中，该探针能识别ＭＤＶ基因组ＤＮＡ的Ｂａｍ ＨＩ－Ａ克隆中的Ａ     

鸡贫血病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达及其特性

将鸡贫血病病毒（chicken anaemia virus,CAV)VP2基因克隆入表达性载体PGEX-5X-3，在大肠杆菌以谷胱甘肽转移酶（GST）融合蛋白的形式获得了表达。以此表达产物免疫小鼠，制备抗CAV VP2的多克隆抗体。通过对CAV感染的MSB1细胞作间接免疫荧光试验（IFA）检测，结果为阳性，这表明表达产物保留了CAV相关的抗原特性，本研究为进一步探索CAV VP2的生物学特性奠定了基础。     

产蛋下降综合征（EDS－76）病毒DNA探针的制备及应用研究

用纯化的产蛋下降综合征（ＥＤＳ－７６）病毒（Ｈ９１毒株）悬液提取的核酸，经琼脂糖凝胶电泳只出现１条分子量较大、背景清晰的核酸带。用ＢａｍＨＩ酶消化产生４个片段，大小分别为１７ｋｂ、１０ｋｂ、４．０ｋｂ和２．０ｋｂ。将其中的２．０ｋｂ片段克隆进ｐＵＣ１８ＤＮＡ载体中，重组质粒ＤＮＡ用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记作为ＤＮＡ探针，在ｄｏｔｂｌｏｔ中该探针不与鹅胚尿囊液核酸抽提物、马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＤＮＡ、鸡传染性贫血病毒（ＣＡＶ）ＤＮＡ、ＳＰＦ鸡基因组ＤＮＡ等核酸反应，只与３株ＥＤＳ病毒（ＥＤＳ标准毒株ＡＶ－１２７、ＥＤＳＨ９１毒株和从健康鹅体中分离的ＥＤＳＹ８１毒株）ＤＮＡ呈阳性反应。人工感染产蛋母鸡和雏鸡后２４ｈ即可用该探针从泄殖腔棉拭子样品中检测出ＥＤＳ病毒ＤＮＡ，在感染后３５ｈ仍能从部分感染鸡样品中检出。对部分探针检测阳性鸡的泄殖腔棉拭子样品用ＳＰＦ鸡胚分离病毒，并用ＨＡ和ＨＩ试验检测分离病毒的特异性；在感染过程中，同时检测了血清中ＨＩ抗体的消长情况。结果表明，人工感染鸡排毒至少可以维持２个月左右，而且血清中ＨＩ抗体即使很高，也不能阻止感染鸡的排毒。     

用digoxigenin标记DNA探针检测：Ⅰ型马立克病病毒感染

用非放射性ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（ｄｉｇ）标记Ⅰ型马立克氏病病毒特异性ＤＮＡ探针对从江苏不同地区送检的６０ｄ龄－１２０ｄ龄左右的可疑马立克氏病病鸡或死亡鸡的羽囊抽提的ＤＮＡ样品进行ｄｏｔｂｌｏｔ检测。     

间接免疫荧光染色法和琼脂扩散试验在禽脑脊髓炎流行病学调查中的应用

间接免疫荧光法和琼脂扩散试验检测鸡血清中抗传染性脑脊髓炎病毒抗体具有较强的特异性;用以检测江苏、山东、安徽、上海等地的69份鸡血清证明,这些地区均有传染性脑脊髓炎病毒感染。     

产蛋下降综合征（EDS—76）病毒DNA探针的制备及应用研究

用纯化的产蛋下降综合征（ＥＤＳ－７６）病毒（Ｈ９１毒株）悬液提取的核酸，经琼脂糖凝胶电泳只出现了１条分子量较大、背景清晰的核酸带。用Ｂａｍ ＨＩ酶消化产生４个片段，大小分别为１７ｋｂ、１０ｋｂ、４．０ｋｂ和２．０ｋｂ。将其中的２．０ｋｂ片段克隆进ｐＵＣ１８ＤＮＡ载体中，重组质粒ＤＮＡ用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记作为ＤＮＡ探针，在ｄｏｔ ｂｌｏｔ中该探针不与鹅胚尿囊液核酸抽提物、马立克氏病病毒（ＭＤ     

兔出血症病毒形态学的研究

用氯仿抽提、PEG沉淀、Scpharosc 4B柱层析、超离及蔗糖密度梯度离心等方法纯化了兔出血症病毒。电镜下观察到兔出血症病毒粒子为无囊膜,大小为32～34nm。外观呈现独特的结构。正二十面体对称,髓蕊直径15～17nm,衣壳厚8～9nm。由内、外衣壳组成。外衣壳上按T=3排列着32个壳粒,壳粒呈中空的管状,长5～6nm,直径约4～5nm。中心孔径约2nm。有一环状呈不连续的内衣壳,厚2～3nm,内环上不连续每段约4nm,与壳粒相连。在5、3和2次轴对称时,病毒表面有大的、3个以上特征性的表面凹陷(Surfacc dcpression),这种表面凹陷呈一定的分布。呈五次轴对称时,病毒表周有10个向外管状突起。病毒表周不规则,表面含丰富的突起和大、小的凹陷(dcpression and small indentation)是兔出血症病毒形态学特点之一,其大小和形态,在动物病毒中比较类似于嵌杯样病毒。