基于iTRAQ技术的冠心病血瘀证蛋白质谱研究

目的 探索冠心病血瘀证差异蛋白质谱，从蛋白水平阐释冠心病血瘀证的生物学机制。方法 对冠心病血瘀证与非血瘀证两组，应用同位素标记相对和绝对定量（isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ）技术分离、鉴定两组的差异蛋白质。结果 鉴定到的蛋白质数量780个。两组共有27个蛋白点表达相差1.5倍以上，其中11个上调，16个下调。上调的差异蛋白中主要功能涉及免疫反应、细胞间粘附作用主要指血小板参与的凝血反应、脂质代谢。下调的差异蛋白中主要功能涉及血小板细胞变形、细胞与细胞间关系迁移、细胞损伤表达。结论 冠心病血瘀证与免疫反应、血小板参与凝血反应的亢进，以及影响血小板形态变化、血小板间、血管内皮细胞与血小板的粘附迁移有密切的关系。     

免疫胶体金技术检测猪繁殖与呼吸综合征

采用斑点胶体金技术建立一种快速、简便、准确检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法。运用RT-PCR技术克隆出PRRSV核衣壳蛋白基因,经原核表达与蛋白纯化获得重组的核衣壳蛋白,作为诊断抗原。采用柠檬酸三钠还原法制备了直径为18~20 nm的胶体金,对兔抗猪Ig G抗体进行标记后,进一步组装成斑点胶体金免疫检测试剂。经猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)阴性和阳性血清检测,斑点胶体金免疫检测试剂仅与阳性血清发生反应,特异性强,反应30~40 min内就可以在硝酸纤维膜上出现清晰的红色斑点,其灵敏度和Dot-ELISA法相仿。该检测方法可广泛应用于PRRS的临床诊断和流行病学调查,也可作为研究兽医快速诊断的技术基础。     

浅谈园林绿化工程施工现场管理

园林工程施工现场管理水平的高低决定着企业对市场的应变能力和竞争能力,同时也是目前多数园林公司的薄弱环节。文章探讨了园林工程施工现场管理中经常遇到的一些问题,并提出了一些解决方法及建议。     

重塑城乡形象助力“蕴势腾升”新讷河——讷河市城级规划局服务城乡建设纪实

在黑龙江省齐齐哈尔市的西北边陲，有一个美丽富饶的小城——讷河市。这里因讷谟尔河横贯境域而得名。这里是清朝皇后婉容祖居地、中国马铃薯之乡、中国甜菜之乡和优质大豆主产地，历史悠久，人文鼎盛。特别是新一届领导班子带领全市人民创新路、谋发展，狠抓大项目建设和城乡规划，一个文明富足的新城展示在外来投资者的面前。     

鸭禽流感抗体血凝抑制试验(HI)的适用性改进

为解决鸡红细胞在检测鸭禽流感HI抗体时非特异性凝集的问题,开展抗原对鸡红细胞(CRBC)、樱桃谷鸭红细胞(yDRBC)、麻鸭红细胞(sDRBC)和番鸭红细胞(mDRBC)凝集特性,不同禽种间血清和红细胞的交叉凝集特性,血清中红细胞受体破坏酶(RDE)处理等一系列试验。结果表明,H5亚型AIV标准抗原对4种家禽的红细胞凝集效价完全一致,使用yDRBC检测樱桃谷鸭、麻鸭和番鸭血清的AIVHI抗体,和RDE处理后的血清比较,抗体效价符合率分别为100%、80%和100%。以yDRBC代替CRBC检测鸭血清AIVHI抗体的改进方法,检测结果具有更高的准确性和一致性,且方便适用。     

浙江省副猪嗜血杆菌流行株分离鉴定及药敏试验

为了研究浙江省副猪嗜血杆菌流行菌株耐药性,试验从浙江省杭州、嘉兴、湖州、绍兴和金华等地区8个不同规模猪场典型病例中分离鉴定出了13株副猪嗜血杆菌临床分离株,采用纸片法检测了其对21种临床常用药物的耐药性。结果表明:浙江省副猪嗜血杆菌分离株对大多数常用抗生素敏感,如多西环素、氟苯尼考、阿奇霉素等,对氨苄西林、复方新诺明、头孢类抗生素有较强的耐药性;不同分离株的耐药性有较大的地域、猪场甚至是猪只或分离部位差异。     

猪腹泻大肠杆菌LTa(R210G)和LTb原核表达及其在小鼠的免疫反应

大肠杆菌不耐热性肠毒素(LT)具有免疫增强作用,是良好的免疫佐剂.为了更好的研究其免疫增强效果,本研究将LT的两个亚基LTa(R210G)和LTb克隆到pGST中,原核表达ETa(R210G)和LTb,经Western-blotting分析,表达蛋白具有免疫原性.对表达蛋白进行大量纯化后,以卵清蛋白为模式蛋白(OVA)为模式蛋白,免疫小鼠,ELISA结果表明,OVA+LTa(R210G)佐剂组小鼠的抗体滴度最高,OVA+LTb和OVA+LTa+LT组抗体滴度相似,高于OVA+氢氧化铝组,而OVA+氢氧化铝组高于无佐剂OVA组.因此,LTa(R210G)和LTb具有良好的免疫增强作用,是一种极有希望的免疫佐剂.     

PRRSV浙江株ORF5基因的原核表达与免疫原性分析

根据GenBank中公布的PRRSV基因序列(EU709837),设计一对PCR引物,以浙江分离株为模板,通过RT-PCR扩增出ORF5基因全序列.以PCR技术构建了缺失信号肽及三处跨膜区的重组ORF5基因,命名为g-ORF5.将g-ORF5基因定向克隆到原核表达载体pET-28a中,转化入E.coli菌株BL21.经酶切和测序鉴定后,阳性菌株用1 mol/L IPTG诱导表达,用Ni-NTA纯化表达的重组蛋白.结果表明,重组GP5蛋白在大肠杆菌中获得表达.纯化后经ELISA和Dot-ELISA分析,表达蛋白具有免疫反应性,能与PRRSV阳性猪血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应.     

规模猪场4大疫病的血清学检测及免疫抑制病因分析

选取杭州、绍兴、嘉兴和湖州4个地区的规模猪场为试验猪场,用正向间接血凝试验(IHA)检测猪瘟病毒(CSFV)和口蹄疫病毒(FMDV)抗体合格率;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)抗体阳性率,分析免疫抑制状况。同时,采取临床可疑病料,用RT-PCR技术检测PRRSV、PCV2、CSFV和伪狂犬病毒(PRV)的感染率。结果显示:不同年龄猪群中,PCV2抗体阳性率都在96.0%以上,而CSFV、FMDV抗体合格率及PRRSV抗体阳性率呈现一致的变化趋势,即母猪最高,哺乳仔猪其次,培育猪和肥育猪最低;在病原检测中,PRRSV和PCV2检出率最高,分别为44.3%和60.7%。另外,双重感染和多重感染明显,特别是PRRSV+PCV2+CSFV三重感染,阳性率达7.6%。本试验结果为制定有效的免疫程序等防治措施提供科学依据。     

重组NP蛋白抗原检测SIV抗体间接ELISA方法的建立

用纯化的H9N2亚型猪流感可溶重组NP蛋白作为包被抗原,建立了检测猪流感抗体的间接ELISA方法.ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为12.5 μg/mL,37℃ 1 h,4 ℃过夜;血清稀释度为1∶40;酶标SPA稀释度为1∶10 000,37 ℃温育40 min,底物显色37 ℃ 15 min.经重复性试验、交叉试验、竞争抑制试验等试验,结果表明该方法特异性强、灵敏度高、重复性好.利用TG-ROC软件确定了自制ELISA(NP-ELISA)酶标板的临界值为0.20,特异性和敏感性分别为95.83%和91.43%.与美国IDEXX试剂盒相比较,符合率为94.00%,无显著性差异.用已建立的ELISA方法检测临床血清样本356份,总阳性率为35.40%.