中华绒螯蟹眼柄神经多肽激素的分离纯化及活性鉴定

采用反相高效液相色谱技术(RP-HPLC),首次分离、纯化了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)眼柄神经多肽激素,获得了高血糖激素(crustacean hyperglycemic hormone,CHH)纯品。初步的生理活性鉴定结果表明,该激素有显著的升血糖作用,能使中华绒螯蟹血糖水平在30min内升到最高值,为(56.14±10.58)mg.100mL-1(n=4),比正常水平增加了(2.87±0.73)倍,被确定为甲壳动物高血糖激素(CHH)。CHH在窦腺(sinus gland,SG)中的含量最丰富,占SG粗提物蛋白总量的(12.26±2.57)%,占SG激素总量的(52.90±11.09)%。生化特征研究结果表明,河蟹眼柄CHH的分子量为5.1kD,显著低于已知甲壳动物CHH的分子量。研究结果也为进一步研究河蟹神经多肽激素的合成和分泌及调控机制等奠定了基础。     

青虾高血糖激素基因全长cDNA序列的克隆及表达分析

本研究首次克隆了青虾(Macrobrachium nipponense)高血糖激素(crustacean hyperglycemic homone,CHH)基因全长cDNA序列,并使用荧光定量PCR技术首次检测了CHH基因在青虾不同组织中的表达。青虾CHH基因cDNA全长1 017 bp,包括241 bp的5′UTR,408 bp的开放阅读框(ORF),355 bp的3′UTR,开放阅读框编码135个氨基酸。成熟肽包含6个CHH家族中位置保守的Cys残基。青虾CHH成熟肽C端为GK,确定为ES型CHH基因。蛋白相似度比对显示,所分离的青虾CHH被归为CHH家族I型肽。系统进化树分析表明,青虾CHH多肽与罗氏沼虾聚在一起,具有最近的亲缘关系。荧光定量PCR检测显示,CHH基因在青虾不同组织中均有表达,其表达量由高到依次为眼柄、精巢、腹神经节、脑、肠、肝、心脏、卵巢。以卵巢为参照其表达量设为1时,眼柄与精巢CHH基因表达量分别为卵巢的500倍和250倍,由此推测CHH基因可能与雄性生殖过程相关。     

斑节对虾2种高血糖激素家族基因的基因组序列分析和表达研究

在斑节对虾(Penaeus monodon)体内新发现了2种高血糖激素(crustacean hyperglycemic hormone,CHH)家族基因Pm CHH和Pm HHLPP。基因组分析结果显示,其均具有CHH-Ⅰ型基因基本的"信号肽-CPRPKR/ER/RR-成熟肽"结构,且与已报道的CHHs基因的基因组结构相似;聚类分析结果显示,尽管Pm CHH和Pm HHLPP与多个CHHs基因序列相似性超过50%(最高达99%),但与其聚为一支的基因均不是CHH-Ⅰ型基因;生物信息学分析结果显示,Pm CHH和Pm HHLPP的转录起始位点"A"及其核心启动子区域分别位于开放阅读框(ORF)上游的99 bp和190 bp,同时在预测其空间结构后发现,两者的三维结构中均含有4个α螺旋构型;组织表达结果显示,2个基因均在肠中有较高的表达量,而Pm CHH在鳃、Pm HHLPP在眼柄中表达量也较高,但在肝胰腺和肌肉中表达量较低;幼体发育阶段表达结果显示,2个基因在无节幼体Ⅲ~Ⅳ期、溞状幼体Ⅰ期和糠虾幼体期表达量均有较大波动,与代谢强度呈弱相关关系。根据其一级结构的特征和相关表达情况,可推测Pm CHH和Pm HHLPP均为CHHs家族基因。     

锯缘青蟹蜕皮抑制激素cDNA的分子克隆及其表达分析

根据近缘种类同源序列设计简并引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT—PCR)技术,首次扩增获得锯缘青蟹(Scylla serrata)眼柄组织中编码蜕皮抑制激素(MIH)成熟肽全长cDNA序列及部分信号肽序列。将该序列克隆到pUCm—T载体上进行序列测定。结果表明,编码锯缘青蟹MIH成熟肽的cDNA由234个碱基组成,由此推测MIH成熟肽含78个氨基酸残基。该序列不仅与其它短尾类甲壳动物的MIH氨基酸序列具有高度的同源性(79％～9l％),还与该激素同一家族的性腺抑制激素、大颚器抑制激素的氨基酸序列具有较高的相似性。RNA斑点杂交结果显示,MIH基因在眼柄神经节及脑组织中均有表达,而在肌肉、中肠腺中不表达。     

摘除单侧眼柄对南美对虾产卵和孵化的影响

在海虾商业化养殖过程中，控制卵巢的成熟和产卵是首要解决的问题，对捕获的雌虾已习惯采用眼柄摘除术来促使其卵巢成熟，摘除眼柄后，眼柄中的X器官窦腺复合体分泌的性腺抑制激素(GIH)明显减少。很多研究者证实，虾蟹胸神经节分泌的性腺促进激素(GSH)能诱导卵巢的成熟。甲壳纲动物卵巢的成熟可能由性腺促进激素(GSH)和性腺抑制激素(GIH)这对拮抗激素所控制。摘除眼柄后，GIH的减少可能直接或间接地促进了GSH的分泌，从而促进了性腺的成熟。     

编码鹰爪虾蜕皮抑制激素基因的cDNA片段的克隆和序列分析

提取鹰爪是眼柄总RNA，以眼柄总RNA为模板，根据日本对虾的具有蜕皮抑制活性的神经肽Pej-SGP-Ⅳ的氨基酸设计兼并引物，进行RT-PCR扩增，在适宜条件下得到一特异性片段。将这一特异性片段克隆到载体中进行测序，测得鹰爪虾的特异性cDNA片段由213个碱基对组成，推测的氨基酸序列由71个氨基酸组成。序列比较发现许多甲壳动物的CHH家庭神经肽与它相似。在所有与该序列推测的氨基酸序列相似的甲壳动物CHH家族神经肽中，MIH与它的相似度最高，表明由鹰爪虾眼柄特异性cDNA片段椎定的氨基酸基酸序列可能是鹰爪虾的MIH片段，它相当于MIH成熟肽的第5至75个氨基酸。     

中华绒螯蟹高血糖激素基因的克隆和分子结构解析

为深入研究中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）高血糖激素（Crustacean Hyperglycemic Hormone, CHH）基因的结构与功能,我们首次从中华绒螯蟹眼柄中克隆得到高血糖激素基因的全长cDNA序列（Ers-CHH, GenBank 注册号：JX485664）。序列及分子结构分析结果显示：Ers-CHH基因全长585bp,ORF区为 453bp,编码150 个氨基酸,N端30个氨基酸为预测的信号肽区域,其后为42个氨基酸的前体相关肽和78 个氨基酸的成熟肽。其成熟肽区具有典型的CHH家族结构域,包括3个二硫键C7-C43、C23-C39 、C26-C52和4个α螺旋（alpha-helix）,但不具有β折叠结构（beta-sheet）。Ers-CHH成熟肽氨基酸序列与溪蟹（Ptychognathus pusillus）相比有92%的相似性;其三维结构与其它物种CHH三维结构比较结果显示,4个α螺旋所处的位置及所含氨基酸的相似性较高。与中华绒螯蟹MIH相比,CHH序列前段缺少一个螺旋,但其4个α螺旋的位置及氨基酸数目与MIH的α2-α5螺旋高度一致,空间结构也基本相同,这可能是两种激素功能部分重叠的分子基础。上述结果为进一步研究CHH在中华绒螯蟹生长发育及能量代谢过程中的调节机制和人工控制甲壳动物生长代谢提供了重要信息。     

中科院发现激素调控对虾卵巢成熟新机制

<正>中科院南海海洋研究所胡超群团队揭晓激素调控对虾卵巢成熟新机制,研究结果日前发表于《繁殖生物学》。学界一般认为,甲壳动物的眼柄中存在卵黄生成抑制激素(VIH),而脑部则可能存在促进卵黄生成和卵巢成熟的激素(VSH)。对此,胡超群团队经不懈努力,以具体的研究数据     

反相高效液相色谱法分离中华绒螯蟹性腺抑制激素的初步研究

采用反相高效液相色谱层析法(RP-HPLC)分离中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)眼柄视上神经节中的性腺抑制激素,收集在高血糖激素家族区域内出峰的洗脱液组分,得到7组单一的样品组分。通过活体注射的方法,观察和统计每一组分对去眼柄中华绒螯蟹卵母细胞直径大小的影响,以检验每个分离组分的性腺抑制活性。结果发现,其中的第7组分对中华绒螯蟹的卵巢发育具有最强的抑制作用,推测这一组分为中华绒螯蟹的性腺抑制激素。     

中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1(Ers-MIH1)-GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达

蜕皮抑制激素(molt—inhibiting hormone，MIH)属甲壳动物高血糖激素(crustacean hyperglycemic hormone，CHH)家族。MIH抑制Y-器官蜕皮激素的合成。以中华绒螯蟹(Eriocheir japonica sinensis)眼柄总RNA为模板，根据中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1(Eriocheir japonica sinensis molt—inhibiting hormone-1，Ers—MIH1)基因序列设计引物，用RT—PCR的方法获得了Ers—MIH1基因成熟肽的cDNA片段。序列分析表明，Ers—MIH1基因成熟肽编码区含有228bp，编码75个氨基酸残基，与已发表的序列一致。将该cDNA片段插入到中间载体pMD18-T中，酶切后再将该片段插入到pGEX-4T-1表达载体中，构建成表达质粒pGEX-4T—MIH1。在BL21细胞中经IPTG诱导表达，得到GST—MIH1的融合蛋白。SDS—PAGE分析表明，经0．1mmol／L IPTG诱导4h，发现大量GST—MIH1融合蛋白表达，在分子量(Mr)为34kD处有1条特异的蛋白质条带。中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1融合蛋白的成功表达为进一步深入研究MIH在中华绒螯蟹蜕皮过程中的作用机制奠定了基础。     

陆封型大西洋鲑发眼卵孵化和稚鱼养殖

本文报道了从美国引进的陆封型大西洋鲑发眼卵孵化和稚鱼养殖试验情况。经42天孵化，发眼卵的孵化率为81．85％，仔鱼至上浮稚鱼成活率为96．8％，稚鱼成活率为80％。     

甲鱼爆发性传染病病原体分离及抗血清制备

从患病甲鱼的肝脏中分离到9株细菌,其中7株为温和气单胞菌,2株为豚鼠气单胞菌。两种菌JA—1和JA—2对鲫鱼的半数致死量(LD_(50))各为4.3×10~5和5.5×10~7,在两种菌培养的上清液中均有一种具有溶血活性的毒素。研究表明:甲鱼的爆发性传染病是由温和气单胞菌和豚鼠气单胞菌引起,用两种菌为菌种做成菌苗,结合免疫增效剂免疫家兔制得血清,效价可达1:512,治愈率达100％。     

水位变化对蛤蟆通水库浮游植物种群动态影响的研究

1991－1993年蛤蟆通水库水位变化对浮游植物种群的动态影响研究结果表明：1）浮游植种属数随水位下降而减少；2）浮游植物生物量随水位下降而升高，其关系式为y＝299．46－3．37x,r=-0.998;3)浮游植物多样性指数随水位降低而变小，并且与水位呈明显的相关性（r＝0．999，r＝0．983）。     

尼罗罗非鱼五品系生长性能评估

在我国黄河流域，长江流域及珠江流域三个农业生态区，山东青岛，上海，浙江湖州及广州四个地区，在网箱，水泥池及池塘三种水体，单养或混养系统里，对五个尼罗罗非鱼品系，即吉富品系，“７８”吕系，“８８”品系，“埃及”品系以及“美国”品系，进行生长性能的评估。评估分一龄和二龄阶段跟踪进行，共十七个试验。生长性能试验结果证明，不论是在青岛，湖州，上海还是在广州不论是池塘、水泥池，还是网箱养殖，不论是混养还是养     

高白鲑养殖、繁殖技术的研究总结报告

高白鲑系鲑科白鲑属鱼类,原产苏联,我国引进后进行人工孵化、仔鱼饲育、鱼种培育、亲鱼饲养、人工产卵、孵化、获得了仔代.本文详细介绍了仔鱼饲育条件、技术,成活率达71.15%～85.64%.鱼种培育采用常规方法,但易患鱼病,影响成活率.亲鱼培育采用流水集约化养殖于11月下旬达性成熟进行人工繁殖,本文介绍了人工采卵,授精、脱粘、洗卵及人工孵化技术.     

池塘培育大眼狮鲈鱼苗、鱼种的试验

哈尔滨市水产研究所于1993年5月24日从加拿大FortQu′Appelle鱼苗孵化场移运大眼狮鲈鱼发现鱼卵，经孵化后孵出鱼苗14万尾，在池塘中培育。鱼苗阶段培育36天，体长53．9mm，成活率75％；鱼种阶段经95－100天培育，套养的鱼种体长20－22．5cm，体重83－107．4g，单养的鱼种体长17．5cm，体重48．4g。     

哈密产黄鳝的染色体组型分析

哈密产黄鳝的染色体组型分析王秀玲，吴敏，马英梅，刘伟，史为慧（新疆师范大学生物系，乌鲁木齐，８３００５３）关键词哈密产黄鳝，核型，分类ＡＮＡＬＹＳＩＳＯＦＫＡＲＹＯＴＹＰＥＯＦＭＯＮＯＰＴＥＲＵＳＡＬＢＵＳＩＮＨＡＭＩ￥ＷａｎｇＸｏｕｌｉｎｇ；ＷｕＭ...     

鱼鳞酶解工艺的研究

应用正交实验优选鱼鳞蛋白酶解的最佳条件，结果表明，鱼鳞酶解宜采用条件温和的枯草杆菌中性蛋白酶，用醋酸作软化的预处理，可使鱼鳞蛋白得到较高程度的水解，酶解时最佳温度为５０℃，酶量宜采用１．５％，酶解的最佳时间为６ｈ底物浓度宜选择２０％。     

鲟鱼气泡病病例简报

本文首次对鲟鱼气泡病作了报道，文章对该病病症进行了描述。初步分析了鲟鱼气泡病病因，并提出了防治鲟鱼气泡病的几点意见。     

虹鳟肝癌一例

本文报道了对虹鳟肝脏肿瘤进行的组织学检验情况,认定为恶性肿瘤。病因为饲料中含黄曲霉毒素及鱼体老龄化。