工厂化养鱼实用技术模式研究中水质监测分析报告

本试验是工厂化养鱼实用技术模式研究项目中的一个方面。试验于2002年5月24日至7月25日进行,养殖品种为奥尼罗非鱼和短盖巨脂鲤（亦名淡水白鲳）。初始放鱼量40．0kg／m^3,实验结束时单位水体鱼获量奥尼罗非鱼为78．2kg／m^3,淡水白鲳为82．2kg／m^3。试验期间每两天化验一次,共化验32次,监测8项水质理化指标的变化范围分别为：水温22-30℃、pH值7．36～8．28、溶解氧1．17～8．51mg／L、氨氮0．79～11．27mg／L、亚硝酸氮0．551～8．520mg／L、硝酸氮3．33-42．79mg／L、磷酸盐磷0．547-9．230mg／L、碱度257．2-358．2mg／L。     

腹水病(Virulent ascitesosis disease)和溃烂病(Ulcer disease)致病病原四联疫苗制备及免疫牙鲆效果评价

腹水病和溃烂病是海水工厂化养殖牙鲆（Paralichthys olivaceus）危害严重的疾病。作者用本实验室分离鉴定的腹水病、溃烂病致病菌-迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda，Et）、溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus，Val）、杀鲑气单胞菌（Aeromonas salmonicida，As）和同行实验室赠予的鳗弧菌（Vibrio anguillarum，Van）制备灭活菌苗，设计四种不同配比四联疫苗，按正交试验要求，分别腹腔注射接种免疫牙鲆，检测单抗原抗体效价，统计分析筛选出组合合理的四联疫苗，配比为Et：Val：Van：As=2：1：1：2，并进行了疫苗安全性、稳定性评价及免疫牙鲆效果观察。发现该四联疫苗是安全的，稳定的，可在4℃下存放1年以上活性不降低，能有效刺激牙鲆特异性免疫系统产生免疫应答，免疫后7天血清抗体效价明显升高，免疫后14d血清抗体效价达到最高水平，为2^10；人工攻毒试验测定相对免疫保护率为60％。表明，筛选出的牙鲆腹水病和溃烂病四联疫苗安全有效，可同时预防腹水病、溃烂病的发生和流行。     

中华绒螯蟹眼柄神经多肽激素的分离纯化及活性鉴定

采用RACE-PCR技术结合SMART cDNA合成技术，从银鲫中克隆到Ran的全长cDNA并对其编码区全长进行了原核表达、相应抗体制备及其时空表达特征分析。RT-PCR结果表明，Ran基因除在脑组织的转录水平较低外，其它组织中的转录水平几乎相同；Ran基因在不同发育阶段的胚胎中都有mRNA转录。但其mRNA的量在原肠期以后呈下降趋势。Western blot结果表明，Ran在卵巢和精巢中均高水平表达，在心、脑、肝、脾、肾中有较低水平表达，在肌肉中则不表达。同时检测到Ran在不同胚胎发育阶段均有较强表达。这表明，Ran基因在银鲫中可能起着多种作用，尤其在生殖细胞的发生中具有重要作用。最后，采用免疫耗竭对该基因编码的蛋白在精核解凝中的作用进行了初步研究，结果表明，Ran蛋白可能与精核解凝相关。     

点带石斑鱼溃烂病病原菌的分离与鉴定

溃烂病是我国北方海水工厂化养殖点带石斑鱼的主要病害之一。作者连续3a对天津地区的养殖点带石斑鱼溃烂病进行了流行病学调查,并从患病鱼病灶分离到7株致病菌,采用生理生化和分子生物学相结合的方法对7株致病菌进行了鉴定,结果表明,1株为杀鲑气单胞菌,5株为哈维氏弧菌,1株为河流弧菌。在连续3a的调查中,每年都分离到哈维氏弧菌,表明哈维氏弧菌是天津地区海水工厂化养殖点带石斑鱼溃烂病的主要条件致病菌,而杀鲑气单胞菌和河流弧菌是次要条件致病菌。研究结果将为控制石斑鱼溃烂病在海水工厂化养殖中的爆发和流行奠定基础。     

牙鲆Toll样受体1基因全长cDNA的克隆及特征分析(英文)

[目的]克隆牙鲆TLR1(Toll like receptors)全长基因,并对其结构特征和表达规律进行分析。[方法]采用同源克隆和快速扩增cDNA末端技术,从牙鲆头肾组织中克隆出TLR1基因cDNA全长序列,并对该基因进行生物信息学和表达模式分析。[结果]牙鲆TLR1基因cDNA全长2947bp,开放阅读框(ORF)2418bp,编码805个氨基酸,包括26个氨基酸组成的信号肽、2个跨膜区、6个富含亮氨酸重复结构域(LRR)和一个TIR结构域(Toll/interleukin(IL)-1receptor)。该蛋白的分子量为91.15kDa,等电点为6.49。氨基酸序列同源性分析显示,牙鲆TLR1基因与其他脊椎动物的TLR1基因序列全长同源性达到69%~35%,TIR序列的同源性达到84%~62%。在系统发生树上牙鲆的TLR1基因首先与斜带石斑鱼聚类。通过荧光定量qRT-PCR检测,结果显示牙鲆TLR1基因的mRNA主要表达于肝脏、心脏和脾脏等组织。[结论]该研究结果为进一步研究TLR1基因的功能和开发牙鲆免疫增强剂奠定了基础。     

牙鲆Toll样受体1基因全长cDNA的克隆及特征分析

[目的]克隆牙鲆TLR1(Toll like receptors)全长基因,并对其结构特征和表达规律进行分析。[方法]采用同源克隆和快速扩增cDNA末端技术,从牙鲆头肾组织中克隆出TLR1基因cDNA全长序列,并对该基因进行生物信息学和表达模式分析。[结果]牙鲆TLR1基因cDNA全长2 947 bp,开放阅读框(ORF)2 418 bp,编码805个氨基酸,包括26个氨基酸组成的信号肽、2个跨膜区、6个富含亮氨酸重复结构域(LRR)和一个TIR结构域(Toll/interleukin(IL)-1 receptor)。该蛋白的分子量为91.15 kDa,等电点为6.49。氨基酸序列同源性分析显示,牙鲆TLR1基因与其他脊椎动物的TLR1基因序列全长同源性达到69%～35%,TIR序列的同源性达到84%～62%。在系统发生树上牙鲆的TLR1基因首先与斜带石斑鱼聚类。通过荧光定量qRT-PCR检测,结果显示牙鲆TLR1基因的mRNA主要表达于肝脏、心脏和脾脏等组织。[结论]该研究结果为进一步研究TLR1基因的功能和开发牙鲆免疫增强剂奠定了基础。     

中华绒螯蟹眼柄神经多肽激素的分离纯化及活性鉴定

采用反相高效液相色谱技术(RP-HPLC),首次分离、纯化了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)眼柄神经多肽激素,获得了高血糖激素(crustacean hyperglycemic hormone,CHH)纯品。初步的生理活性鉴定结果表明,该激素有显著的升血糖作用,能使中华绒螯蟹血糖水平在30min内升到最高值,为(56.14±10.58)mg.100mL-1(n=4),比正常水平增加了(2.87±0.73)倍,被确定为甲壳动物高血糖激素(CHH)。CHH在窦腺(sinus gland,SG)中的含量最丰富,占SG粗提物蛋白总量的(12.26±2.57)%,占SG激素总量的(52.90±11.09)%。生化特征研究结果表明,河蟹眼柄CHH的分子量为5.1kD,显著低于已知甲壳动物CHH的分子量。研究结果也为进一步研究河蟹神经多肽激素的合成和分泌及调控机制等奠定了基础。     

牙鲆肠道益生菌的分离筛选及益生效果评价

为获得安全有效的牙鲆益生菌，从牙鲆（Paralichthys olivaceus）肠道分离到94株菌，经溶血性、消化酶活力测试筛选出3株候选菌：Y1、Y5、I66，进行16S r DNA分子鉴定，分别为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloidophilus）和蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）。经安全性检验后，开展为期4周的投喂试验，分别将3株菌以1×108 CFU·g-1添加到饲料中投喂牙鲆，为3个试验组，同时设对照组（C），定期检测各组鱼血液先天免疫指标。结果发现，与对照组相比，试验组鱼淋巴细胞吞噬百分比显著升高（P<0.05），血清碱性磷酸酶（AKP）和溶菌酶（LYZ）活性显著升高（P<0.05），血清超氧化物歧化酶（SOD）活性极显著升高（P<0.01）。投喂相应饲料4周，腹腔注射溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）攻毒，试验组鱼死亡延迟，累积死亡率显著低于对照组（P<0.05）。综上，Y1、Y5和I66是牙鲆安全有效的益生菌，能促进先天免疫，提高抗病力，具有推广应用...     

天津地区盐碱水大口黑鲈棚塘接力高效养殖技术

<正>大口黑鲈近3年在天津养殖面积逐渐扩大，成鱼售价在每年8、9月达到峰值，进入10月价格迅速下降。为在此期间使大口黑鲈达到上市规格，采用工厂化车间、温棚与室外池塘接力养殖模式，可延长本地区大口黑鲈生长期，缩短了养殖周期，节约养殖成本，提高了养殖效益，实现了利润最大化。现将其技术总结如下，以期为天津及周边盐碱水域养殖业者提供技术参考。