虾肝肠胞虫环介导等温扩增法(LAMP)的建立

为建立一种快速检测虾肝肠胞虫(EHP)的环介导等温扩增法(LAMP),根据Gen Bank中登录的EHP-SSU基因序列设计6条特异性引物,成功建立了EHP-LAMP检测方法。该方法检出限为3.71个质粒拷贝/μL,并且与虾其他常见病毒病的病原(WSSV、IHHNV、CMNV)均无交叉反应。采用LAMP方法和常规PCR方法对30份具有典型EHP感染症状的对虾样品进行检测,结果显示:LAMP和PCR方法的阳性检出率均为100%。结果表明,建立的EHP-LAMP方法具有高灵敏度、高特异性、高准确度的优点,为对虾肝肠胞虫的快速早期诊断奠定基础。     

中华绒螯蟹可视荧光标记应用研究

采用红色可视嵌入性荧光(visible implant elastomer,VIE)标记中华绒螯蟹(Eriocheir Sinensis),观察了荧光标记在中华绒螯蟹中的保持率和对其存活、生长、发育及繁殖的影响。荧光标记幼蟹不同部位在室内饲养并观察8周,结果表明,在中华绒螯蟹幼蟹不同部位的标记保持率均为100%,对照组和各试验组幼蟹的存活率无显著性差异(P0.05)。荧光标记幼蟹螯掌节和腕节间的关节膜后移入室外养殖池养殖,中华绒螯蟹室外养殖的生长和发育速度与对照组也无显著差异(P0.05)。挑选标记后经室外池塘养成的中华绒螯蟹进行小水体繁育实验,抱卵率为83.3%,平均抱卵量30×104egg·ind-1,与未标记中华绒螯蟹小水体繁育实验结果比较,抱卵率、平均抱卵量无显著性差异,荧光标记不影响中华绒螯蟹交配抱卵。本文结果表明,VIE可视荧光标记可作为中华绒螯蟹个体识别标记,应用于育种、资源调查等研究和生产实践。     

点带石斑鱼溃烂病病原菌的分离与鉴定

溃烂病是我国北方海水工厂化养殖点带石斑鱼的主要病害之一。作者连续3a对天津地区的养殖点带石斑鱼溃烂病进行了流行病学调查,并从患病鱼病灶分离到7株致病菌,采用生理生化和分子生物学相结合的方法对7株致病菌进行了鉴定,结果表明,1株为杀鲑气单胞菌,5株为哈维氏弧菌,1株为河流弧菌。在连续3a的调查中,每年都分离到哈维氏弧菌,表明哈维氏弧菌是天津地区海水工厂化养殖点带石斑鱼溃烂病的主要条件致病菌,而杀鲑气单胞菌和河流弧菌是次要条件致病菌。研究结果将为控制石斑鱼溃烂病在海水工厂化养殖中的爆发和流行奠定基础。     

凡纳滨对虾肠道益生菌的分离· 筛选· 鉴定

[目的]获得具有拮抗常见病原菌活性、消化酶活性且具有安全性的凡纳滨对虾肠道内源性益生菌。[方法]从健康凡纳滨对虾肠道中经过初步分离与纯化得到1 220株细菌,对分离的菌株进行拮抗试验,并对产蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶能力进行定量和定性研究。对筛选的13株细菌进行了溶血试验和药敏试验,以评价其生物安全性。[结果]共筛选出13株抑菌活性强、产酶能力强且产酶种类多的菌株,最终确定了2株候选益生菌。菌株的16 S rDNA分子鉴定及Biolog系统鉴定结果表明,细菌3号与霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei strain WW2,JN993998.1)相似性达到98%,细菌6号与乳酸菌(Lactic acid bacterium ZJGS0109,KC748440.1)相似性达100%。[结论]研究结果为今后益生菌制剂的开发和应用奠定了基础。     

预成型软管内衬玻璃钢修复管道

介绍了预成型复合材料软管内衬修复技术及在胜利油田胜利采油厂φ219×7输油管道上的实际应用。预成型复合材料软管内衬修复技术是管道内修复技术之一,该技术采用浸渍树脂的预成型复合软管,以压缩空气作动力沿管内壁使其翻入管道,经加温固化后,形成紧贴在管内壁上的具有防腐抗渗、强度高的“管中管”。     

天津市周边地区养殖凡纳滨对虾肠道菌株的分离鉴定及耐药性分析

随着抗生素在水产养殖业中的普遍应用,细菌耐药性成为环境和食品安全的主要问题。本文旨在通过对天津地区养殖凡纳滨对虾体内细菌的耐药信息进行分析统计,为凡纳滨对虾养殖业的疾病控制和提高水产品安全性提供理论指导。本研究对天津市津南区、汉沽区及西青区等对虾养殖基地取样的凡纳滨对虾进行肠道微生物的分离培养,抗生素药敏实验以及抗生素抗性基因的检测。共获得菌株1 219株,选取其中有代表性的215株菌株进行鉴定,结果显示,所鉴定菌株属于56种不同种属,主要以芽孢杆菌、副溶血性弧菌、葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、席罗弧菌、溶藻弧菌、格氏乳球菌、希瓦氏菌、霍氏肠杆菌、库特氏菌、施氏假单胞菌、荚膜红细菌、液化沙雷氏菌、不动杆菌、假单胞菌、假交替单胞菌及霍乱弧菌等为主。所鉴定菌株的抗生素药敏实验分析结果发现,凡纳滨对虾肠道微生物普遍存在抗生素抗性,其中β-内酰胺类的氨苄西林、糖肽类的杆菌肽、喹诺酮类的罗美沙星和磺胺类的磺胺抗药性最为明显。因此本文进一步对其中耐药种类较多且耐药性较强的82株细菌对四大类抗生素(链霉素类、磺胺类、四环素类和青霉素类)的抗性基因(str A-str B,sul II,sul II,sul III,tet A,tet C,tet G,blao XA-1,bla PSE-1,bla TEM)以及整合子(in T1和in T2)携带情况进行检测。研究结果表明,所检测耐药菌株均携带抗性基因,其中磺胺类抗性基因的检出率最高,可达63%,其次是青霉素类抗性基因,检出率为61.4%,整合子基因平均检出率为42.1%,四环素类相对较少为35.4%,且四环素类只检测出tet A抗性基因,其中67.1%的菌株存在多种耐药基因。     

中华绒螯蟹野生群体和不同水系人工选育群体的遗传多样性分析

本研究利用10个微卫星分子标记分析了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis) 3个不同水系人工选育群体(“长江1号”、“光合1号”和七里海河蟹)和1个海河流域自然群体的遗传多样性和遗传分化水平。结果显示，10个位点在4个群体中的等位基因数(N)为3~17，平均等位基因数为8.5~9.7，平均期望杂合度为0.720~0.745，平均观测杂合度为0.566~0.661，平均多态信息含量为0.687~0.716，近交系数(Fis)范围为–0.080~0.827。在40个群体–位点组合中，有13个群体–位点组合显著偏离哈迪–温伯格平衡(P<0.05)。遗传多样性分析结果显示，与海河自然群体相比，3个人工选育群体遗传多样性水平略有降低，但仍保持在较高水平，具有较大的选育潜力。遗传分化分析结果显示，群体间遗传分化指数(Fst)范围为0.015~0.075，遗传相似度为0.7702~0.9401，遗传距离为0.0617~0.2611。基于Nei’s遗传距离构建了群体UPGMA系统进化树，自然群体和“光合1号”聚为一支，而七里海河蟹群体单独聚为一支。综上所述，4个中华绒螯蟹群体间的遗传分化水平较低，群体遗传多样性较高。本研究将为中华绒螯蟹选育繁育和种质资源利用与管理等提供理论基础。     

天津地区1例中华绒螯蟹“牛奶病”病原分离、鉴定及其病理特征分析

为探究天津地区中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）“牛奶病”案例的病原，本研究采用流行病学调查、病原分离、18S rDNA基因序列分析、人工感染试验和免疫组织化学分析来明确病原种类及其组织分布特征、时序变化特征。结果表明：自然发病蟹的主要临床症状包括对外界刺激反应慢或基本不反应，头胸甲腔内蓄积乳白色血淋巴，头胸部及步足基部关节膜连接处肌组织呈不透明乳白色，肝胰腺呈白色半流体糜烂状。基于18S rDNA基因序列的系统发育分析表明，真菌分离株P13被鉴定为二尖梅奇酵母（Metschnikowia bicuspidata）。人工感染试验结果表明，真菌分离株P13能够在实验室条件下感染健康中华绒螯蟹[累积死亡率为（55.0±2.4）%]，导致实验蟹呈现与自然发病蟹相似的临床症状，且能从实验蟹中再分离出二尖梅奇酵母。免疫组织化学分析结果表明，真菌分离株P13能够侵染中华绒螯蟹肝胰腺、后肠、鳃、心脏和肌组织，引起靶组织不同程度的病理损伤并呈现时序变化特征。综上所述，二尖梅奇酵母是天津地区中华绒螯蟹“牛奶病”的病原，本文也初步揭示了该病原的主要靶组织及组织分布特征和时序变化特征，为深入...     

牙鲆肠道益生菌的分离筛选及益生效果评价

为获得安全有效的牙鲆益生菌，从牙鲆（Paralichthys olivaceus）肠道分离到94株菌，经溶血性、消化酶活力测试筛选出3株候选菌：Y1、Y5、I66，进行16S r DNA分子鉴定，分别为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloidophilus）和蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）。经安全性检验后，开展为期4周的投喂试验，分别将3株菌以1×108 CFU·g-1添加到饲料中投喂牙鲆，为3个试验组，同时设对照组（C），定期检测各组鱼血液先天免疫指标。结果发现，与对照组相比，试验组鱼淋巴细胞吞噬百分比显著升高（P<0.05），血清碱性磷酸酶（AKP）和溶菌酶（LYZ）活性显著升高（P<0.05），血清超氧化物歧化酶（SOD）活性极显著升高（P<0.01）。投喂相应饲料4周，腹腔注射溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）攻毒，试验组鱼死亡延迟，累积死亡率显著低于对照组（P<0.05）。综上，Y1、Y5和I66是牙鲆安全有效的益生菌，能促进先天免疫，提高抗病力，具有推广应用...