凡纳滨对虾WSSV、IHHNV和CMNV多重PCR检测方法的建立

根据偷死野田村病毒(CMNV)的保守基因序列,设计筛选出1对特异性引物CMN279,利用已公布的凡纳滨对虾白斑综合征病毒(WSSV)和传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)特异性引物WSS235和IHHN356,建立了一种同时检测WSSV、IHHNV和CMNV的多重PCR检测方法。收集18种病原、健康对虾组织及WSSV、IHHNV、CMNV阳性病料,开展特异性测试,该方法可以特异性扩增出WSSV、IHHNV、CMNV基因片段,健康对虾肌肉组织、其他18种病原均未扩增出任何片段,特异性强。应用克隆方法制备目的基因质粒,应用连续稀释质粒方法开展灵敏度测试,测定该方法检测灵敏度分别为WSSV 9.74fg、IHHNV7.65fg、CMNV 10fg;与已报道的多重PCR检测灵敏度相比较,检测灵敏度提高10倍。应用本研究建立的多重PCR检测方法与实验室标准检验方法同时进行22个样品检验,多重PCR检验方法的检验结果与实验室标准方法检验结果符合率为100%。上述实验结果表明:本研究建立的多重PCR检验方法具有特异性强、灵敏度高、检验时间短、检验结果准确度高的特点,可用于WSSV、IHHNV和CMNV三种病原的快速检测诊断。     

天津地区1例中华绒螯蟹“牛奶病”病原分离、鉴定及其病理特征分析

为探究天津地区中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）“牛奶病”案例的病原，本研究采用流行病学调查、病原分离、18S rDNA基因序列分析、人工感染试验和免疫组织化学分析来明确病原种类及其组织分布特征、时序变化特征。结果表明：自然发病蟹的主要临床症状包括对外界刺激反应慢或基本不反应，头胸甲腔内蓄积乳白色血淋巴，头胸部及步足基部关节膜连接处肌组织呈不透明乳白色，肝胰腺呈白色半流体糜烂状。基于18S rDNA基因序列的系统发育分析表明，真菌分离株P13被鉴定为二尖梅奇酵母（Metschnikowia bicuspidata）。人工感染试验结果表明，真菌分离株P13能够在实验室条件下感染健康中华绒螯蟹[累积死亡率为（55.0±2.4）%]，导致实验蟹呈现与自然发病蟹相似的临床症状，且能从实验蟹中再分离出二尖梅奇酵母。免疫组织化学分析结果表明，真菌分离株P13能够侵染中华绒螯蟹肝胰腺、后肠、鳃、心脏和肌组织，引起靶组织不同程度的病理损伤并呈现时序变化特征。综上所述，二尖梅奇酵母是天津地区中华绒螯蟹“牛奶病”的病原，本文也初步揭示了该病原的主要靶组织及组织分布特征和时序变化特征，为深入...