豚鼠气单胞菌胶体金免疫层析试纸条的研制

采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体分泌细胞株，获取抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体，柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金颗粒，选择直径20 nm的胶体金颗粒，标记抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体并制备胶体金垫。将胶体金垫与喷涂有抗豚鼠气单胞菌兔多克隆抗体和羊抗鼠抗体的硝酸纤维素膜及样品吸收垫等组装成免疫层析试纸条，建立豚鼠气单胞菌的快速检测方法。用灭活细菌与血清混合的模拟样本测定试纸条的特异性、灵敏度，结果显示，试纸条对嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、荧光假单胞菌、副溶血弧菌等13种常见病原菌没有交叉反应，与豚鼠气单胞菌显示特异性反应，检测灵敏度为1×10⁶ CFU/mL，结果显示时间小于5 min。研制的豚鼠气单胞菌胶体金免疫层析检测试纸条具有快速、简便、特异性高、适用于基层临床生产推广应用等优点。     

壳多糖对罗氏沼虾苗的生长和抗菌防病作用的试验

本文主要探讨壳多糖在水产养殖上的应用。在室内使用玻璃缸放养健康虾苗,人为感染气单胞菌等条件下进行的。试验结果表明:(1)在水体中放入壳多糖(50—100×10~(-6))可以净化水质,防止水质恶化。因此,可进行不换水育苗;(2)在水体中加入壳多糖(25—100×10~(-6))可以抑制气单胞菌的生长繁殖,增强罗氏沼虾的免疫功能,提高虾苗的成活率;(3)25—50×10~(-6)壳多糖可促进虾苗的生长。     

日本鳗鲡体表溃疡病病原菌的分离、鉴定及单克隆抗体制备

从日本鳗鲡(Anguilla japonica)体表溃疡病的肝脏分离到一株优势细菌JS70322NA,经人工感染证实为引起日本鳗鲡体表溃疡病的病原菌.通过形态学观察、API 20E细菌鉴定试剂盒鉴定、生理生化试验和16S rRNA特异性基因分析,鉴定该菌为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila).JS70322NA为典型的β-溶血,血清型为O∶9.以甲醛灭活的JS70322NA为抗原免疫Balb/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,制备出3株抗嗜水气单胞菌的单克隆抗体,分别命名为:1A5、1B8、1F3;其腹水效价分别达1.0×10-6、1.0×10-5、1.0×10-6;细胞亚型分别为IgG2a、IgM、Ig2a;3株单克隆抗体与温和气单胞菌(Aeromonas sobria)、豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)等6种水产常见致病菌无交叉反应,特异强,可应用于日本鳗鲡嗜水气单胞菌特异性检测.     

鲤隐性败血症病原菌的分离与鉴定

本文对东北地区流行的鲤隐性败血症进行了病原菌的分离、人工感染、病原菌生理、生化特性和药物敏感性的测定,观察了病理组织变化等。从病鱼内脏分离到场22株致病菌,其中标7株的生长及生化特性均符合嗜水气单胞菌种的特性,嗜水气单胞菌hec毒素检测呈阳性。有3株菌V—P(-)、赖氨酸(-)、葡萄糖产气(-)是区别嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)及温和气单胞菌(A．Sobrie)主要特征,这三株菌符合豚鼠气单胞菌(A．Caviae)种的特征。     

运动性气单胞菌分离、鉴定方法的研究与应用

通过碱性蛋白胨水（APW）的增菌效果与气单胞菌培养基（RYAN）的选择性效果试验,以及对运动性气单胞菌（Motil aeromonads）的培养特性、鉴定特征的比较观察,建立了运动性气单胞菌细菌学分离和鉴定的实验室检测程序。对8个模拟阳性样品进行检测,结果感染菌包括4株嗜水气单胞菌（A.hydrophila）、2株温和气单胞菌（A.sobia）和2株豚鼠气单胞菌（A.cavias）全部被分离到。对鱼粉、肉骨粉、牛肉粉、蛤蚧等60个动物产品样品,5个饲养牛蛙、鲫鱼和泥鳅的水样;6个牛蛙、鲫鱼、金鱼的病料进行检测,结果分离到20株运动性气单胞菌,其中8株嗜水气单胞菌,8株温和气单胞菌和4株豚鼠气单胞菌,实验表明,所建立的分离和鉴定方法是一种简便、快速和敏感的方法,其检测程序不仅运用于进出境动物产品和环境样品的检测,也可用于动物以及淡水养殖动物气单胞菌病的诊断和监测。     

水产动物气单胞菌鉴定方法研究进展

<正>气单胞菌属于γ-变形菌纲、气单胞菌目、气单胞菌科、气单胞菌属(Aeromonas),该属包括嗜水气单胞菌(A.hydrophila)、温和气单胞菌(A.sobria)、豚鼠气单胞菌(A.caviae)、维氏气单胞菌(A.veronii)和杀鲑气单胞菌(A.salmonicida)等20个种,其中嗜水气单胞菌和杀鲑气单胞菌又分别包括5个亚种[1]。气单胞菌广泛分布于自然生态系统     

14株患病水生动物气单胞菌属细菌的分离鉴定与最佳治疗药物筛选试验

从患病甲鱼、河蟹、牛蛙、鲫体内共分离到14株气单胞菌属细菌,对它们进行了生化鉴定和药敏试验。根据药敏试验结果,选取1株嗜水气单胞菌(J50503-1)和1株温和气单胞菌(NT712-10)作了最小抑菌浓度试验和人工感染及治疗试验。结果表明,氟苯尼考对上述细菌有很好的防治作用。     

鲟细菌性败血综合征致病菌的初步研究

从患细菌性败血综合征的杂交鲟(Huso huso♀×Acipenser ruthenus ♂)和达氏鳇(Huso dauricus)的腹水及肾脏中共分离了5株优势菌,经人工回归感染实验证实其中2株细菌XL2-T和HK3-R具有致病性。经ATB细菌鉴定仪鉴定,结果显示:XL2-T为豚鼠气单胞菌(Aeromonas punctata subsp.caviae),HK3-R为类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides)。这2株致病菌的主要特征为:革兰氏染色阴性,杆状,氧化酶阳性,对先锋必、妥布霉素、头孢曲松、头孢噻肟、奈替米星、新霉素等6种药物均高度敏感。     

中华鳖（Trionyx sinonsis Wiegmann）十种常见病的防治

1、腐皮病 中华鳖俗称甲鱼,甲鱼受损伤后,四肢、颈部、尾部及周边皮肤组织变白、糜烂、坏死,严重时骨骼外露,爪脱落。 防治:①控制甲鱼饲养密度,及时分养,经常更换池水;②每周用1×10~(-6)～1×10~(-6)漂白粉全池泼洒消毒;③及时隔离病甲鱼,用2×10~(-6)～3×10~(-6)生石灰或漂白粉反复药浴5～6d,确认痊愈后,放回原池饲养;④用鳖速康20×10~(-6)～40×10~(-6)全池泼洒,每天一次,并常换水,病甲鱼2～3d后即可停止死亡。     

鱼源气单胞菌的分离鉴定及血清学调查

应用生化鉴定和PCR技术对1999～2001年主要分离自福建省患典型败血症鳗鲡的气单胞菌进行精细的鉴定，结果共得到气单胞菌115株，其中嗜水气单胞菌69株，温和气单胞菌29株，豚鼠气单胞菌2株和未定种气单胞菌15株。45株可被典型分型于5个主要血清型；福建鳖源嗜水气单胞菌优势血清型为O：Ah10501，鳗源气单胞菌分离株主要分布于0：Ahl0501、O：YT-1、0：CHS-3和O：CQ-1等4个血清型。非福建分离株则集中分布在O：Ah9617(0：9)。LPSs免疫印迹法既能用于不同血清型菌株脂多糖的结构分析，又能对常规血清学分型结果进行校正，其结果更直观、准确。     

中华鳖常见细菌病的病原鉴定及药物体外拮抗比较

对中华鳖疖疮穿孔病、腐皮病、出血性肠道坏死症、细菌性肝水肿病与白点病等5种常见鳖病的16株病原菌进行鉴定与抑菌效果测定,其中温和气单胞菌6株,类志贺邻单胞菌1株,嗜水气单胞菌6株,豚鼠气单胞菌3株。各分离株对中华鳖与实验小鼠均具强毒力。对16株病菌的体外拮抗结果统计表明,不同鳖病致病菌的药物拮抗作用存在明显差异,而病症一致采集地各异的中华鳖病菌其体外药物敏感性亦有所不同,以丁胺卡那、氟嗪酸、环丙沙星、新霉素、庆大霉素、红霉素、卡那霉素、呋喃妥因等抗生素的抑菌效用最为显著,中高敏频次≥10。     

利用卵黄监测鳖群中病原菌感染

用从病鳖体内分离的四种病原菌制备诊断抗原, 采用微量凝集试验检测104 份卵黄样品中抗菌卵黄抗体。结果共检出86 份阳性样品, 其中以气单胞菌卵黄抗体阳性样品最多, 阳性检出率为50-96 % 且抗体水平较高, 可达1∶32 。变形杆菌卵黄抗体和不动杆菌卵黄抗体的阳性检出率分别为22-12 % 和9-62 % 。表明鳖场鳖群中有气单胞菌、变形杆菌和不动杆菌感染, 但以气单胞菌感染的范围及强度最高。     

中华鳖“红底板病”致病菌的研究

本文报道了对鳖的“红底板病”致病菌的研究,确认其致病菌为气单胞菌属(Aeromonassp),并进行了药敏试验,提出了治疗该病的有效药物。     

中华鳖“红底板病”病原菌的研究及防治

本文阐述了中华鳖红底板病的流行病学,病原菌的分离、培养、生化鉴定和菌体DNAGC mol％的测定以及毒性试验等,确定了致病菌为气单胞菌属;通过药敏试验及生产实践,提出了有效的防治措施。     

斑点叉尾暴发性败血症病原的分离与鉴定

从3尾表现出血症状的患病斑点叉尾鱼回(Ictalurus Punctatus)体内各分离出一株病菌,测定结果显示致其急性死亡的致病菌为温和气单胞菌(Aerom onas sobria),慢性死亡的致病菌分别为嗜水气单胞菌(A.hydrophila)和温和气单胞菌(A.sobria)。药敏试验结果表明:3株菌对广谱抗生素如氨苄青霉素、青霉素、先锋霉素Ⅵ和红霉素等已产生耐药性,而对菌必治、头孢肤肟和复达欣等高度敏感;菌株Jh-1和菌株Yh-3对复方新诺明、四环素、氟哌酸和丁胺卡那霉素高度敏感,而菌株Jh-2却低度敏感;环丙沙星和诺氟沙星对3株致病菌均具较好的抑菌、杀菌作用。     

中华鳖爱德华菌病病原菌的分离鉴定及致病因子研究

采用API 20E系列生化鉴定及16S rDNA和gyrB基因序列同源性分析方法,对从患病中华鳖(Trionyx sinen-sis)肝脏中分离到的一株细菌TL5m进行了鉴定,并通过人工感染试验,对该菌株进行了毒力检测;此外分别提取该TL5m株的主要致病因子外膜蛋白、脂多糖和胞外产物,对中华鳖进行毒力和免疫保护率试验。结果显示:菌株TL5m的API 20E鉴定编码为4544000,99.9%为迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda);其16SrDNA序列和gyrB基因序列(GenBank登录号分别:EF121756和GU563803)与迟钝爱德华氏菌的同源性最高(分别为94%和98%);菌株TL5m对中华鳖的半数致死量LD50为2.45×106 CFU/ind。药敏感结果显示菌株对磷霉素、菌必治、头孢孟多、头孢噻吩、壮观霉素高度敏感。外膜蛋白攻毒剂量60μg/ind和脂多糖攻毒剂量400μg/ind时,对中华鳖的致死率都为33.3%,胞外产物对中华鳖的LD50为31.73μg/ind;全菌灭活苗、胞外产物、外膜蛋白和脂多糖的免疫保护率分别为75%、62.5%、25%和87.5%。结果表明,发病中华鳖的病原菌为迟钝爱德华氏菌,其分泌的胞外产物对中华鳖具有较高毒力;提取的脂多糖对中华鳖遭受迟钝爱德华氏菌攻击具有较高免疫保护率。     

Lidocaine hydrochloride—sodium bicarbonate as an anesthetic for soft-shelled turtle Pelodiscus sinensis

ABSTRACT:   Attempts were made to understand how the different sizes (mean body weight of 4.1 ± 0.8 g for small and 182.6 ± 23.7 g for large) of the soft-shelled turtle Pelodiscus sinensis are affected by different temperature (25°C or 30°C), and different concentrations (700, 1000 and 1300 p.p.m.) of anesthetic lidocaine hydrochloride–sodium bicarbonate. The soft-shelled turtles were fed to satiation once daily. Three-way anova design (size × temperature × concentration of lidocaine hydrochloride) with duplicate was used. Twenty each of large and small soft-shelled turtles were distributed into six 30-L tanks. Exposure time of the soft-shelled turtle was affected by all factors (temperature, concentration and size). Exposure time of the soft-shelled turtle for anesthetizing decreased with increase in temperature and in concentration of lidocaine hydrochloride, and decrease in size. Recovery time for the soft-shelled turtle was also affected by all factors. Recovery time of the soft-shelled turtle increased with increase in temperature, concentration of lidocaine hydrochloride, and size. According to these results, lidocaine hydrochloride (1000 p.p.m.)–sodium bicarbonate seemed an effective anesthetic for sedating and handling the soft-shelled turtle. However, when an anesthetic is recommended for wide use, especially on commercially important edible organisms, the time organism takes to metabolize and excrete anesthetic chemicals from its body to a safe level must be given to allow fitness for human consumption.     

患病蝶尾金鱼维氏气单胞菌温和生物变种的分离鉴定

研究从患病蝶尾金鱼(Butterfly)肝脏中分离获得的1株病菌,为金鱼疾病防治提供参考。分离纯化获得1株细菌,编号为DW-1,通过细菌形态观察、理化特性、16S rDNA序列分析等方法进行鉴定。结果表明DW-1菌株为革兰氏阴性短杆菌,可发酵葡萄糖产气,赖氨酸脱羧酶、硝酸盐还原等为阳性;进一步通过PCR方法扩增16S rDNA序列,测得长度为1 385 bp,与维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)相似性为99%~100%;构建系统发育树与维氏气单胞菌温和生物变种(A.veronii biovar sobria)模式菌株ATCC9071聚为一支。最终鉴定该菌株为维氏气单胞菌温和生物变种。人工感染试验结果表明,对斑马鱼半数致死量(LD_(50))为1.17×10~6CFU/m L。药敏试验结果显示该菌株对头孢克肟、头孢哌酮、链霉素、恩诺沙星、诺氟沙星、左氟沙星、复方新诺明等23种药物敏感。     

中华鳖穿孔病病理变化

本文报道由嗜水气单胞菌、普通变形菌等多种细菌引起的中华鳖穿孔病的病理变化。病鳖各脏器发生变质性病变,充血、出血,呈败血症;脏器局部坏死组织中聚有大量脓细胞,呈化脓灶。同健康鳖相比,病鳖１２项血清生化成分有８项发生显著变化：Ｋ＋、Ｃａ２＋、谷草转氨酶和乳酸脱氢酶量增多;Ｎａ＋、Ｃｌ－、胆固醇和碱性磷酸酶量减少;肌肉中酯酶和肝脏中超氧化物歧化酶活性降低。     

日本鳗鲡败血腹水病病原研究

2000年3月中旬，自福建仙游某日本鳗鲡（Anguilla japonica)养殖场患败血腹水症的发病日本鳗鲡的肝脏及腹水处分离到四株细菌，经鉴定其中一株为迟钝爱德华氏菌（dwardsiella tarda)，一株温和气单胞菌（Aeromomas sobria)和两株嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila)溶血试验，小鼠攻毒试验显示，上述四株细菌都有较强制 毒力，综合分析，上述菌株可能是引发这次日本幼鳗败血腹水病之病原菌。