微量菌鉴系统在水产养殖中的应用

运用专门检测发酵性革兰氏阴性杆菌的微量菌鉴系统——CDRC-菌鉴系统，鉴定水产养殖中分离自患病动物血液、肝胰腺和养殖水体的9个菌株，鉴定结果为9个菌株均为弧菌科细菌，其中4株属于气单胞菌属，分别为嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和豚鼠气单胞菌，其余5株属于弧菌属，为副溶血性弧菌和溶藻弧菌。     

鱼源气单胞菌的分离鉴定及血清学调查

应用生化鉴定和PCR技术对1999～2001年主要分离自福建省患典型败血症鳗鲡的气单胞菌进行精细的鉴定，结果共得到气单胞菌115株，其中嗜水气单胞菌69株，温和气单胞菌29株，豚鼠气单胞菌2株和未定种气单胞菌15株。45株可被典型分型于5个主要血清型；福建鳖源嗜水气单胞菌优势血清型为O：Ah10501，鳗源气单胞菌分离株主要分布于0：Ahl0501、O：YT-1、0：CHS-3和O：CQ-1等4个血清型。非福建分离株则集中分布在O：Ah9617(0：9)。LPSs免疫印迹法既能用于不同血清型菌株脂多糖的结构分析，又能对常规血清学分型结果进行校正，其结果更直观、准确。     

嗜水气单胞菌与温和气单胞菌的LAMP检测方法的建立

利用环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）分别建立嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila,AH）与温和气单胞菌（A.sobria,AS）的快速检测方法。针对嗜水气单胞菌pilin基因、温和气单胞菌zipA基因设计特异性LAMP引物。在恒温条件下利用实时浊度仪对2组引物进行特异性和灵敏度试验,并以琼脂糖凝胶电泳和核酸染料颜色变化对扩增结果进行判定。结果显示,LAMP实时浊度法能够特异地检测嗜水气单胞菌和温和气单胞菌,最低检出限分别为46 fg·mL^-1和320 fg·mL^-1,是普通PCR方法的104倍和102倍;并能应用于已知临床样品检测。该研究建立的嗜水气单胞菌与温和气单胞菌LAMP快速检测方法具有高效、特异、灵敏的特点。     

鲤隐性败血症病原菌的分离与鉴定

本文对东北地区流行的鲤隐性败血症进行了病原菌的分离、人工感染、病原菌生理、生化特性和药物敏感性的测定,观察了病理组织变化等。从病鱼内脏分离到场22株致病菌,其中标7株的生长及生化特性均符合嗜水气单胞菌种的特性,嗜水气单胞菌hec毒素检测呈阳性。有3株菌V—P(-)、赖氨酸(-)、葡萄糖产气(-)是区别嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)及温和气单胞菌(A．Sobrie)主要特征,这三株菌符合豚鼠气单胞菌(A．Caviae)种的特征。     

致病性嗜水气单胞菌多重PCR检测方法的建立

致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是近年中国各地大规模流行的淡水养殖鱼类暴发性疾病的主要病原,本研究针对GenBank中登录的致病性嗜水气单胞菌的气溶素基因(hlyA)、溶血素基因(aerA)以及为气单胞菌属所特有的内参照基因16S rRNA保守区设计了3对特异性引物,通过进行多重PCR反应体系优化,多重PCR产物的测序鉴定与特异性和敏感性实验,试图建立一种检测致病性嗜水气单胞菌的多重PCR检测方法。对8株嗜水气单胞菌、16株相关菌株进行多重PCR检测,结果显示,非致病性分离株均未扩增出毒力基因hlyA和aerA,而致病性分离株则至少含有hlyA基因;对40份送检的水产动物样品进行多重PCR检测,结果与常规微生物学检测符合率为97.5%。多重PCR检测方法具有较高的敏感性与特异性,最低可检测模板量为10 ng的样品。该方法的建立对水产动物嗜水气单胞菌病的快速诊断和分子流行病学的调查有重要意义。     

14株患病水生动物气单胞菌属细菌的分离鉴定与最佳治疗药物筛选试验

从患病甲鱼、河蟹、牛蛙、鲫体内共分离到14株气单胞菌属细菌,对它们进行了生化鉴定和药敏试验。根据药敏试验结果,选取1株嗜水气单胞菌(J50503-1)和1株温和气单胞菌(NT712-10)作了最小抑菌浓度试验和人工感染及治疗试验。结果表明,氟苯尼考对上述细菌有很好的防治作用。     

中华鳖气单胞菌菌细胞苗和菌化学成份疫苗研制

利用分离自中华鳖的嗜水气单胞菌Ａｈ９６１００４、Ａｈ９６０９１６和Ａｈ９７０５１６与温和气单胞菌Ａｓ９７０５１０菌体及其上清制备灭活苗细胞苗和化学成份疫苗。肌肉注射中华鳖进行免疫，加强免疫１５ｄ后，用菌株Ａｈ９６１００４腹腔注射进行攻击，观察２０ｄ。结果表明，温和气单胞菌Ａｓ９７０５１０株的菌苗及其胞外分泌物（ＥＣＰ）苗组和嗜水气单胞菌Ａｈ９６１００４株的外膜成份组对嗜水气单胞菌的攻击的保护率最高     

水产动物气单胞菌鉴定方法研究进展

<正>气单胞菌属于γ-变形菌纲、气单胞菌目、气单胞菌科、气单胞菌属(Aeromonas),该属包括嗜水气单胞菌(A.hydrophila)、温和气单胞菌(A.sobria)、豚鼠气单胞菌(A.caviae)、维氏气单胞菌(A.veronii)和杀鲑气单胞菌(A.salmonicida)等20个种,其中嗜水气单胞菌和杀鲑气单胞菌又分别包括5个亚种[1]。气单胞菌广泛分布于自然生态系统     

嗜水气单胞菌气溶素单克隆抗体的制备及初步应用

以1％福尔马林灭活的嗜水气单胞菌纯化的气溶素免疫8周龄的BALB／C小鼠，取其脾细胞与SP2／0细胞融合，经间接ELISA筛选，获得1株稳定分泌气溶素单克隆抗体的杂交瘤细胞，命名为A2D3。腹水单抗ELISA效价为1：16，384（1：2^14），其能特异性抑制气溶素的溶血活性并且腹水单抗有中和特性，抑制效价和中和效价分别为1：128（1：2^7）和1：128（1：2^7）。以此单抗建立了检测嗜水气单胞菌气溶素的问接ELISA方法，对临床分离的50株嗜水气单胞菌培养上清检测，有48株呈阳性反应。     

日本鳗鲡体表溃疡病病原菌的分离、鉴定及单克隆抗体制备

从日本鳗鲡(Anguilla japonica)体表溃疡病的肝脏分离到一株优势细菌JS70322NA,经人工感染证实为引起日本鳗鲡体表溃疡病的病原菌.通过形态学观察、API 20E细菌鉴定试剂盒鉴定、生理生化试验和16S rRNA特异性基因分析,鉴定该菌为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila).JS70322NA为典型的β-溶血,血清型为O∶9.以甲醛灭活的JS70322NA为抗原免疫Balb/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,制备出3株抗嗜水气单胞菌的单克隆抗体,分别命名为:1A5、1B8、1F3;其腹水效价分别达1.0×10-6、1.0×10-5、1.0×10-6;细胞亚型分别为IgG2a、IgM、Ig2a;3株单克隆抗体与温和气单胞菌(Aeromonas sobria)、豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)等6种水产常见致病菌无交叉反应,特异强,可应用于日本鳗鲡嗜水气单胞菌特异性检测.     

齐口裂腹鱼败血症的病原分离与鉴定

从发生败血症的齐口裂腹鱼体内分离出2株致病菌，通过细菌的形态特征、培养特性和生化实验鉴定为嗜水气单胞菌和温和气单胞菌。经人工感染健康鱼表现出与自然病鱼相同的症状，并从人工感染死亡鱼中分离获得同种细菌，证实齐口裂腹鱼败血症的病原为嗜水气单胞菌和温和气单胞菌。药敏实验结果表明新霉素、头孢三嗪、庆大霉素对其高度敏感，红霉素、羧苄青霉素、氮苄青霉素和磺胺等不敏感。     

耐喹诺酮类药物嗜水气单胞菌的分离鉴定及电镜观察

本研究对吉林省内12个水域采集和送检的66尾病鱼进行细菌分离鉴定,共检出46株嗜水气单胞菌疑似株,通过生化试验和PCR扩增气溶素基因aer鉴定法,确定其中22株为嗜水气单胞菌。进一步采用纸片扩散法和双倍稀释法测定嗜水气单胞菌分离株对多种抗生素的耐药性,其中部分菌株存在不同程度的耐药性,22株嗜水气单胞菌中有4株对喹诺酮类药物耐药,并且为交叉耐药。其对喹诺酮类药物的抑菌圈均小于19mm。嗜水气单胞菌耐喹诺酮类药物的检出率为18 2%。将病料中分离的8株嗜水气单胞菌在电镜下观察发现,2株耐药菌表面发现均匀分布的球形结构,而6株敏感菌表面未见此结构。     

嗜水气单胞菌对鲫组织蛋白酶活性的影响

嗜水气单胞菌按是否产胞外毒素及毒素的类型分为高毒株和低毒株两大类。具高毒性的嗜水气单胞菌对水产养殖动物，包括各种淡水养殖的鱼类、甲壳类、爬行类等普遍具感染性，同时嗜水气单胞菌也能导致人类疾病。有关嗜水气单胞菌的分离、分类、毒性检测及对人类的致病性已有大量的报道和较深入的研究，但由于不同类型动物的生理差异，有关嗜水气单胞菌对水生动物生理的影响研究很少。本试验以淡水养殖的代表动物———鲫鱼为人工感染的实验对象，并以酪蛋白为酶作底物，检测鲫在人工感染产胞外毒素的嗜水气单胞菌及菌液上清后，其血清、肝、肾…     

鳖三种气单胞菌的分离与药物敏感试验

在1997～2001年对广东、湖南等地70个鳖养殖场进行常见病的调查研究、分离纯化病原后进行生化试验，鉴定出11株嗜水气单胞菌、11株豚鼠气单胞菌、6株寡源气单胞菌等，经过毒力试验后．选出较强毒力的11株细菌，用15种药物进行敏感性试验筛选出敏感药物，为药物的临床应用提供依据。     

起始pH对嗜水气单胞菌溶血毒素的影响

从患败血症鲫鱼病体分离到一批溶血毒素产生菌株，对其中5株进行了致病实验，对4株致病株进行了形态学和生化鉴定，其中CRI14与嗜水气单胞菌的特征吻合。进一步研究了培养起始pH对CRI14株溶血毒素产生的影响，用SDS－PAGE和IEF证明了酸性pH（5．0）能抑制至少两种嗜水气单胞菌     

豚鼠气单胞菌快速检测间接ELISA法的建立

应用从患败血症的鳗鲡中分离、纯化出的豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)菌株AB40511NA1,制备了兔抗血清,建立了快速检测豚鼠气单胞菌的间接ELISA方法.研究结果显示:AB40511NA1兔抗血清的效价为1:16000.该法对AB40511NA1最低检测量为6×104 cfu·mL-1;与水产养殖动物主要致病菌嗜水气单胞菌(A. hydrophila)、温和气单胞菌(A. sobria)、鳗弧菌(V. anguillarum)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)、副溶血弧菌(V. parahaemolyticus)及非O1-群霍乱弧菌(Non-O1 Vibrio cholerae)均无交叉反应,特异性强;能快速、准确、方便地检测出豚鼠气单胞菌.     

鳖保宁对中华鳖气单胞菌病的药效学研究

采用常规方法对中华鳖（Trionyx sinensis)常见病害进行细菌学检查，测定了鳖保宁及相关单味药对中华鳖主要病原菌温和气单胞菌（Aeromonas sobria)和豚鼠气单胞菌（A.caviae)的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC），并观察鳖保宁预防鳖病害的效果，结果表明：20例患病鳖中共分离到28株细菌，其中温和气单胞菌和豚鼠气单胞菌分别占32.14%和21.43%;鳖保宁及相关单味药对温和气单胞菌和豚鼠气单胞菌均有不同程度的抑制和杀灭作用。其中鳖保宁的作用最强；鳖保宁预防鳖病害的效果优于对照组。     

斑点叉尾鮰暴发性败血症病原的分离与鉴定

从3尾表现出血症状的患病斑点叉尾鮰（lctalurus Punctatus）体内各分离出一株病菌，测定结果显示致其急性死亡的致病菌为温和气单胞菌（Aeromonas sobria），慢性死亡的致病菌分别为嗜水气单胞菌（A．hydrophila）和温和气单胞菌（A．sobria）。药敏试验结果表明：3株菌对广谱抗生素如氨苄青霉素、青霉素、先锋霉素Ⅵ和红霉素等已产生耐药性，而对菌必治、头孢肤肟和复达欣等高度敏感；菌株Jh-1和菌株Yh-3对复方新诺明、四环素、氟哌酸和丁胺卡那霉素高度敏感，而菌株Jh-2却低度敏感；环丙沙星和诺氟沙星对3株致病菌均具较好的抑菌、杀菌作用。     

牛蛙腹水病病原研究

从患腹水病的牛蛙腹水中分离到二株细菌，人工感染可使牛蛙、青蛙、银鲫和ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠致死，生理生化及Ｇ＋Ｃ含量测定属于气单胞菌属的嗜水气单胞菌。该菌与本地分离的出血性败血症菌株间的交叉凝集反应小于１：４０。     

常见病害防治方法

淡水鱼类细菌性败血症 病原：嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、鲁氏耶尔森菌、豚鼠气单胞菌和产碱假单胞菌等多种革兰氏阴性杆菌。