白雪花诱导舌癌细胞凋亡及其作用机制初探

[目的]探讨白雪花诱导舌癌细胞凋亡及对端粒酶活性的影响。[方法]用流式细胞术检测白雪花的石油醚提取物诱导体外培养的人舌鳞癌细胞凋亡作用;以Tca-8113细胞株作为靶细胞,采用原位TRAP法检测端粒酶活性。[结果]浓度8 mg/ml白雪花的石油醚提取物作用人舌鳞癌Tca细胞24和48 h后,凋亡细胞明显增加;白雪花的石油醚提取物对舌癌细胞作用72 h后,端粒酶活性明显降低,且随药物浓度增大,抑制端粒酶活性的作用增强,呈剂量依赖性。[结论]白雪花的石油醚提取物对人舌鳞癌Tca细胞的增殖具有明显抑制作用;其抗癌作用机制可能是通过抑制端粒酶活性,诱导癌细胞凋亡。     

蝙蝠葛碱和胡椒碱对两株鼻咽癌细胞增殖的影响

目的：观察蝙蝠葛碱和胡椒碱对两株鼻咽癌细胞增殖的影响。方法：用MTT法测定两种药物分别处理CNE－1、CNE－2Z两株细胞的IC5值随作用时间的延长而减少（P＜0．01），两种药物处理CNE－1细胞24、48h的IC50值均明显低于CNE－2Z细胞（P＜0．01），蝙蝠葛碱处理两株细胞72h的IC50值差异显著（P＜0．05）。结论：蝙蝠葛碱和胡椒碱对CNE－1、CNE－2Z细胞株的生长增殖呈时间依赖性抑制，对CNE－1细胞株的增殖抑制作用明显强于CNE－2Z细胞株。     

鼻咽癌细胞株CNE1转染EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)后对放射敏感性的影响

目的：研究EB病参LMP1对鼻咽癌高分化细胞株CNE1放射敏感性的影响。方法：用电转染技术将带有EB病毒LMP1基因的真核表达质粒导入鼻咽癌高分化细胞株CNEl，用免疫组化法及Western blot检测LMPl的表达；LMP1对CNEl细胞放射敏感性的影响采用^60钴治疗仪照射后集落形成实验进行观察。结果：CNE1细胞抹转染LMP1基因后LMPl蛋白呈阳性表达，对照放射敏感性比未转染株的细胞存活事低(P＜0．01)。结论：LMPl能增加鼻咽癌细胞的放射敏感性，这种作用可能与LMP1的促细胞转化，抑分化有关。     

巴西菇多糖对肝癌细胞株凋亡的影响及其机制

目的：研究巴西菇多糖诱导人肝癌细胞株(SMMC—7721)凋亡的作用及机制。方法：采用电镜、DNA电泳、免疫组化法，对SMMC—772l株细胞凋亡以及凋亡抑制基因bcl—2的表达进行检测。结果：SMMC—772l株细胞经巴西菇多糖处理后出现核固缩、膜起泡、凋亡小体形成．琼脂糖凝胶电泳呈现出典型凋亡DNA梯状带．细胞内bcl—2表达较对照组低。结论：巴西菇多糖能诱导SMMC—772l株细胞发生典型凋亡．其抑制细胞内bcl—2的表达，是诱发肿瘤细胞凋亡的机制之一。     

原花青素对SMMC-7721肿瘤细胞凋亡及其端粒酶活性的影响

采用M TT法、HE染色、DNA电泳、TUNEL法和TRAP法(端粒重复序列扩增法),研究原花青素对人肝癌细胞SMM C-7721株凋亡及端粒酶活性的影响,探讨了其抗癌机制。结果表明,原花青素可抑制SMM C-7721肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞端粒酶活性。说明原花青素具有诱导肿瘤细胞凋亡和降低肿瘤细胞端粒酶活性2种抗肿瘤作用。     

端粒酶在原发性肝癌组织中的表达

目的：探讨端粒酶在原发性肝细胞癌(HCC)患者肝组织中的表达及临床意义。方法：用TRAP—ELISA法检测45例原发性肝细胞癌和26例癌旁组织以及7例正常肝组织的端粒酶活性。结果：45例原发性肝细胞癌组织中有38例显示端粒酶活性，其阳性率为84．4％，而26例癌旁组织只有2例具端粒酶活性，阳性率只为7．6％；7例正常肝组织端粒酶表达均为阴性；结果还显示肝癌组织端粒酶的表达与肿瘤病理分化程度无关。结论：端粒酶在绝大多数原发性肝细胞癌中表达，其活性可能在HCC的发生和发展中起重要作用，有希望成为诊断HCC的肿瘤标志物。     

脱氧核酶对端粒酶hTERT mRNA的切割以及对鼻咽癌细胞凋亡相关基因的影响

目的:探讨脱氧核酶对端粒酶蛋白亚基hTERTmRNA的切割作用及对人鼻咽癌细胞凋亡相关基因表达的影响。方法:针对hTERT基因的核苷酸序列,合成“10～23”型脱氧核酶及其类似物,提取总RNA在体外切割hTERTmRNA;转染鼻咽癌细胞后,用RT-PCR扩增hTERT基因片段,用PCR-ELISA法测定端粒酶活性,用RT-PCR和荧光免疫测定凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果:未经修饰的脱氧核酶DzT和在DzT的3'末段添加倒位连接T碱基的脱氧核酶DzTi在体外能够有效地切割hTERTmRNA;在转染鼻咽癌细胞后,DzTi比DzT对hTERTmRNA表现出更强的切割作用,DzTi能够显著地降低鼻咽癌细胞端粒酶活性(P<0.01)、抑制鼻咽癌细胞的生长(P<0.05)和bcl-2基因的表达(P<0.05),上调bax基因的表达(P<0.05)。DzT和DzTi的催化中心的一个碱基被替换后形成的脱氧寡核苷酸DzT'和DzTi'在体外和胞内均不表现对hTERTmRNA的切割作用。结论:人工合成的脱氧核酶确实能够高效特异地切割端粒酶hTERTmRNA,并降低鼻咽癌细胞的端粒酶活性,促进鼻咽癌细胞凋亡。作为一种新发现的催化性核酸,脱氧核酶在肿瘤的基因治疗领域中将具有极其重要的应用价值。     

人低分化鼻咽癌上皮细胞系及其单克隆株裸鼠皮下种植后自发性转移特性的初步观察

利用有限稀释法,进行人低分化鼻咽癌上皮细胞系(CNE—2Z)的单克隆化培养,成功地建立了25个单克隆细胞株,并根据细胞电泳率、细胞体外培养的倍增时间、分裂指数及低血清培养等筛选指标,从中筛选出电泳率差异较大及体外生长特性有明显差异的两个克隆化细胞株(F1、H5)。将该两株及母系的癌细胞分别接     

尿激酶型纤溶酶原激活剂系统在鼻咽癌细胞系及其两个克隆株中的表达和意义

目的：研究尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)系统3种主要成分(uPA、uPAR、PAI—1)在一鼻咽癌细胞系(CEN—2Z)及其它的两个克隆株(CNE—2Z—H5、CNE—2Z—H5—9)中的作用。方法：应用逆转录聚合酶反应(RT—PCR)方法检测uPA系统各因子在基因转录水平的表达。结果：uPA，uPARmRNA在CNE—2Z—H5—9中表达最高，在CNE—2Z中表达最低；PAI—1mRNA在CNE—2Z—H5—9中无表达，在CNE—2Z，CNE—2Z—H5有表达，但差异无显若性。结论：uPA、uPAR可能促进鼻咽癌细胞侵袭、转移，PAI—1可能起抑制作用。     

梅花鹿鹿茸细胞端粒酶活性及其mRNA表达的检测

[目的]研究鹿茸生长期端粒酶的表达,为揭示鹿茸生长发育的调控机制提供了新思路。[方法]在鹿茸快速生长阶段,采用改进的TRAP（端粒重复序列扩增技术）法检测鹿茸顶端增殖区的间充质层、前软骨层和软骨层细胞及下端成熟区的端粒酶活性。同时,采用RT-PCR的方法检测各组织细胞中端粒酶催化亚基（TERT）mRNA的表达水平。[结果]在顶端增生区各组织细胞中均检测到了不同程度的端粒酶活性,间质细胞、前软骨细胞和软骨细胞中的相对端粒酶活力分别为91.2、46.4和13.7,而在成熟区组织中则检测不到端粒酶活性。RT-PCR法检测的各组织细胞中TERTmRNA的表达水平与端粒酶活性检测结果一致。[结论]在鹿茸快速生长阶段,其增殖区表达端粒酶,并且端粒酶活性随组织层细胞的分化程度的增高而逐渐降低,说明端粒酶可能在鹿茸的生长过程中起重要的调控作用。     

bcl-x基因在两株鼻咽癌细胞中的转录和表达

目的：研究细胞凋亡相关基因bcl-x在人鼻咽癌高分化上皮细胞株CNE-1和低分化上皮细胞株CNE-2Z中的转录和表达。方法：分别抽提两种细胞的总RNA，通过逆转录PCR(RT-PCR)检测bcl-x基因的转录；同时制备两种细胞的蛋白质样品。经免疫印迹检测bcl-x基因的表达。结果：在两株鼻咽癌细胞中均检测到bcl-xL的转录和表达。但没有bcl-xs的表达。结论：bcl-xL在人鼻咽癌高、低分化上皮细胞株中均有表达。但表达量没有明显差异提示其表达可能与细胞分化程度无关。     

川芎嗪逆转人鼻咽癌顺铂耐药细胞系多药耐药性的实验研究

目的探讨川芎嗪（TMP）对人鼻咽癌顺铂（DDP）耐药细胞系（CNE2/DDP）多药耐药性的逆转作用。方法 TMP处理CNE2/DDP细胞后,分别用MTT法、流式细胞术、RT-PCR检测其对DDP耐药性的逆转作用、细胞凋亡和bcl-2mRNA表达的影响。结果 50、100mg/LTMP处理后,CNE2/DDP细胞对DDP耐药性的相对逆转率分别为57.50%、85.72%,差异有统计学意义（P〈0.01）。与对照组比较,50mg/LTMP处理可使CNE2/DDP细胞凋亡率明显增高（P〈0.01）,而bcl-2mRNA表达明显降低（P〈0.05）。结论 TMP可部分逆转CNE2/DDP细胞对DDP的耐药性。TMP可增强DDP对CNE2/DDP细胞的促凋亡作用,下调bcl-2mRNA表达。     

人乳腺良恶性病变组织中端粒酶活性的检测

目的：探讨端粒酶活性与人乳腺良、恶性病变组织之间的关系。方法：用ＴＲＡＰ－ＥＬＩＳＡ检测法,对１５例乳腺良性病变和７种乳腺癌组织进行端粒酶活性水平检测。结果：７例乳腺浸润性导管癌中,５例端粒酶阳性,而１５例乳腺良性疾病中仅２例端粒酶阳性,两组差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。此外,有淋巴结转移与无淋巴结转移的乳腺癌组织中端粒酶活性水平差异无显著性（Ｐ〉０．０５）。结论：端粒酶的激活在人类乳腺癌的发生过     

Lipofectin介导bcl-xL反义寡核苷酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞的影响

目的：探讨阳离子脂质体Lipofectin对bcl-xL反义寡核苷酸进入CNE－2Z细胞的影响。方法：采用阳离子脂质体Lipofectin介导bcl-xL反义寡核苷酸转染CNE－2Z细胞，应用MTT法观察Lipofectin介导前后对CNE－2Z增殖的影响；RT－PCR检测处理前后bcl-xL mRNA表达水平。结果：Lipofectin介导bcl-xl反义核酸可提高反义核酸对细胞的增殖抑制率；Lipofectin介导bcl-xL反义核酸可增强反义核酸下调bcl-xL mRNA表达水平的能力。结论：Lipofectin可促进反义核酸转染进入细胞。     

EBV感染对人鼻咽癌细胞株形态参数和DNA含量的影响

目的：观察ＥＢＶ体外感染对不同分化不同分化状态鼻咽癌细胞株形态参数和ＤＮＡ含量的影响。方法：应用ＰＣＲ法检测ＥＢＶ基因、免疫组化和图像分析仪分别检测了ＥＢＶ和ＥＢＶ＋ＴＰＡ对ＣＮＥ－１和ＣＮＥ－２Ｚ细胞Ｃｋｐａｎ表达及形态参数和ＤＮＡ含量的影响。结果：（１）ＥＢＶ在体外可感染ＣＮＥ－１细胞；（２）ＥＢＶ感染ＣＮＥ－１细胞使其Ｃｋｐａｎ表达降低，胞面积籴小和核浆比升高及ＤＮＡ含量明显减少（Ｐ〈０．０     

PDTC和顺铂对人鼻咽癌细胞株CNE1、CNE-GL、CNE2Z的联合作用

目的观察PDTC和顺铂（DD）对人鼻咽癌细胞株CNE1、CNE1-GL、CNE2Z的联合抑制效应。方法单独及联合应用PDTC和DDP处理后,采用MTT法测定CNE1、CNE1-GL、CNE2Z细胞的生长抑制效应。采用直线回归法求出中效浓度,利用中效原理计算联合用药指数。结果在实验剂量范围内,单独及联合应用PDTC和DDP的生长抑制效应具有剂量依赖性。对CNE1细胞,药物效应（抑制率）大于85%时,具有协同作用（CI〈l）;对CNE1-GL、CNE2Z细胞,两药合用具有拮抗作用。结论单独及联合应用PDTC和DDP对CNE1、CNE1-GL、CNE2Z具有生长抑制作用,两药联用对CNE1细胞具有协同作用。     

端粒酶活性在子宫颈癌组织中的表达

目的 :了解不同临床分期、组织学分级子宫颈鳞癌组织中端粒酶活性。方法 :采用以 PCR为基础的端粒酶重复扩增方法及非变性 PAGE银染定性法检测不同临床分期、组织学分级子宫颈鳞癌组织中端粒酶活性。结果 :在子宫颈癌组织中端粒酶活性的表达率较正常宫颈、不典型增生宫颈组织的端粒酶活性高 (P<0 .0 1 ) ,且不同临床分期的子宫颈癌宫颈组织间端粒酶的表达率差异有显著性 (P〈0 .0 5) ,但不同病理分级的子宫颈癌宫颈组织间端粒酶活性的表达率差异无显著性 (P>0 .0 5)。结论 :端粒酶在子宫颈癌组织中呈现高表达 ,且与临床分期有关 ,端粒酶可望成为检测子宫颈癌的一个重要指标。     

人端粒酶活性的调控机制及其新功能研究进展

端粒酶活性在胚胎发育过程中消失,人的绝大多数体细胞没有端粒酶活性,因而随着体细胞分裂次数的增加,端粒长度在不断缩短.当端粒缩短到一定程度时,细胞无法维持正常的端粒结构而导致细胞的衰老,而当细胞衰老调控机制失控的情况下,端粒的极限缩短将导致细胞死亡或癌变.端粒酶的活性在细胞癌变的过程中被重新激活以维持端粒的长度和结构,以及细胞无限增殖化的能力,与衰老及肿瘤的发生发展密.切相关.随着人们对端粒酶认识的深入,新研究进展显示端粒酶具有独立于端粒之外的新功能,端粒酶在DNA修复、促进细胞存活、基因转录及刺激干细胞增殖等方面不依赖于端粒的新功能的发现,为阐明端粒酶在衰老及癌变中重要功能的分子机制提供了新的思路.