血清、脂质体及转染时间对反义PKCα转染CNE-2Z的影响

目的：探讨血清、脂质体及转染时间对反义PKCα转染CNE—2Z的影响。方法：脂质体转染反义PKCα，MTT法测细胞生长。结果：(1)l6．0mg/L的反义PKCα可明显抑制细胞生长(P＜0．01)，但5％(体积分数)的小牛血清培养液对转染所致细胞生长抑制无明显影响(P＞0．05)。(2)1．0mg/L与0．5mg/L的脂质体转染效果差异无显著性(P＞0．05)。(3)转染反义PKCα l9h后，细胞生长指数有非常显著降低(P＜0．01)。结论：用1．0mg/L的脂质体、5％的小牛血清培养液转染16．0mg／L的反义PKCα 19h可有效地抑制CNE—2Z的生长。     

脂质体介导质粒DNA法转染藏鸡成纤维细胞的研究

采用Lipofectin阳离子脂质体介导质粒DNA转染藏鸡成纤维细胞,通过优化重组质粒转染细胞的各种参数以寻求最佳的转染条件。结果表明:6孔培养板中细胞汇合度达70%~80%时,用2μL脂质体介导1.5μg重组质粒转染10 h即可获得较满意的转染效率。说明Lipofectin能有效介导质粒pEGFP-N3转染藏鸡成纤维细胞,转染率与细胞生长汇合程度、脂质体包被质粒的浓度比例及转染时间直接相关。     

反义寡核苷酸干涉家蚕非编码RNA的研究

[目的]研究反义寡核苷酸干涉家蚕非编码RNA表达的情况。[方法]构建Bm-15的反义寡核苷酸探针,通过脂质体转染昆虫Sf9细胞干涉Bm-15的表达。[结果]转染后细胞中Bm-15的表达量下降了63%,差异达显著水平,表明反义寡核苷酸探针对Bm-15基因表达有较好的抑制作用。[结论]该研究为进一步研究非编码RNA的功能奠定了良好的基础。     

蝙蝠葛碱和胡椒碱对两株鼻咽癌细胞增殖的影响

目的：观察蝙蝠葛碱和胡椒碱对两株鼻咽癌细胞增殖的影响。方法：用MTT法测定两种药物分别处理CNE－1、CNE－2Z两株细胞的IC5值随作用时间的延长而减少（P＜0．01），两种药物处理CNE－1细胞24、48h的IC50值均明显低于CNE－2Z细胞（P＜0．01），蝙蝠葛碱处理两株细胞72h的IC50值差异显著（P＜0．05）。结论：蝙蝠葛碱和胡椒碱对CNE－1、CNE－2Z细胞株的生长增殖呈时间依赖性抑制，对CNE－1细胞株的增殖抑制作用明显强于CNE－2Z细胞株。     

以GFP为报告基因优化CNE-2Z细胞脂质体转染条件的实验研究

目的：为在脂质体介导基因转染人低分化鼻咽癌上皮细胞株CNE-2Z时获得较高转染效率，同时观寨GFP作为报告基因用于脂质体转染条件优化的可行性。方法：以GFP为报告基因，通过比较碱裂解法与PEG纯化法制备质粒；改变DNA、脂质体量及转染时间，在荧光显微镜下观察并计算转染效率。结果：在35mm培养皿中．2μgDNA与4μL脂质体转染CNE-2Z细胞8h，转染效率最高，且在显微镜下观察不到细胞的形态变化。结论：在35mm培养皿中，2μgDNA与4μL脂质体转染CNE-2Z细胞8h，可获得最佳转染效率，GFP可作为报告基因优化脂质体转染条件。     

脂质体转染反义PKCα对CNE-2Z细胞生长的影响

目的 :观察脂质体转染反义 PKCα对 CNE- 2 Z细胞生长的影响。方法 :用脂质体法转染反义 PKCα,以 MTT法测细胞生长。结果 :(1)脂质体浓度为 2 .0 0 0～ 8.0 0 0 mg· L- 1时 ,随着脂质体浓度增加 ,细胞生长指数逐渐降低 (P<0 .0 5 ) ;但当浓度为 1.0 0 0 mg·L- 1时 ,其对细胞生长似无影响。 (2 )在 4.0 0 0～ 16 .0 0 0 mg· L- 1的范围内增加转染的反义PKCα的浓度 ,细胞生长指数逐渐降低 (P<0 .0 0 1)。结论 :小剂量脂质体转染反义 PKCα可抑制 CNE- 2 Z生长 ,反义PKCα的剂量与细胞生长抑制呈量效关系。     

尿激酶型纤溶酶原激活剂系统在鼻咽癌细胞系及其两个克隆株中的表达和意义

目的：研究尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)系统3种主要成分(uPA、uPAR、PAI—1)在一鼻咽癌细胞系(CEN—2Z)及其它的两个克隆株(CNE—2Z—H5、CNE—2Z—H5—9)中的作用。方法：应用逆转录聚合酶反应(RT—PCR)方法检测uPA系统各因子在基因转录水平的表达。结果：uPA，uPARmRNA在CNE—2Z—H5—9中表达最高，在CNE—2Z中表达最低；PAI—1mRNA在CNE—2Z—H5—9中无表达，在CNE—2Z，CNE—2Z—H5有表达，但差异无显若性。结论：uPA、uPAR可能促进鼻咽癌细胞侵袭、转移，PAI—1可能起抑制作用。     

脂质体法介导山羊精子转染外源DNA最适条件的研究

研究了阳离子脂质体介导山羊精子转染外源DNA的方法、效果及其影响因素以确定其最适转染条件,为进一步用此方法生产转基因动物提供参考.结果显示：①脂质体介导法可用于山羊精子转染外源DNA;②脂质体介导转染1、2、3号公羊的精子消化后阳性率分别为25.2%,22.6%,27.5%,差异不显著（p〉0.05）.③脂质体介导转染的精子消化前后阳性率在充分洗涤组为41.3%和25.5%,极显著高于原精液直接加入1∶10∶1转染液不洗涤处理组的25.6%和11.4%及原精液加入不含缓冲液的转染液处理组的17.2%和7.8%（p〈0.01）.④离心洗涤后精液分别与在转染缓冲液中加入0、0.1%、0.3%、0.6%BSA（质量/体积）的转染液共同孵育后的消化前后阳性率分别为41.3%和25.5%、35%和21.4%、27.5%和15.3%及11.2%和8.2%;⑤用不同缓冲液配制的转染液进行脂质体介导山羊精子转染外源DNA的效率有差异,其中以mDM液转染精子的消化前、后阳性率最高（为41.3%和25.5%）.研究表明：脂质体介导转染外源DNA的独特机制使供精个体间精子转染效率趋于一致;精子与脂质体-DNA复合物混合前将精子充分离心洗涤可显著提高脂质体介导精子转染外源DNA的效率;血清白蛋白能降低脂质体对精子介导的转染效率;脂质体法介导山羊转染外源DNA的最适转染条件为用mDM液充分洗涤精子后再与脂质体-DNA复合物混合转染.     

脂质体法介导山羊精子转染外源DNA最适条件的研究

研究了阳离子脂质体介导山羊精子转染外源DNA的方法、效果及其影响因素以确定其最适转染条件,为进一步用此方法生产转基因动物提供参考.结果显示:①脂质体介导法可用于山羊精子转染外源DNA;②脂质体介导转染1、2、3号公羊的精子消化后阳性率分别为25.2%,22.6%,27.5%,差异不显著(p＞0.05).③脂质体介导转染的精子消化前后阳性率在充分洗涤组为41.3%和25.5%,极显著高于原精液直接加入1:10:1转染液不洗涤处理组的25.6%和11.4%及原精液加入不含缓冲液的转染液处理组的17.2%和7.8%(p＜0.01).④离心洗涤后精液分别与在转染缓冲液中加入0、0.1%、0.3%、0.6% BSA(质量/体积)的转染液共同孵育后的消化前后阳性率分别为41.3%和25.5%、35%和21.4%、27.5%和15.3%及11.2%和8.2%;⑤用不同缓冲液配制的转染液进行脂质体介导山羊精子转染外源DNA的效率有差异,其中以mDM液转染精子的消化前、后阳性率最高(为41.3%和25.5%).研究表明:脂质体介导转染外源DNA的独特机制使供精个体间精子转染效率趋于一致;精子与脂质体-DNA复合物混合前将精子充分离心洗涤可显著提高脂质体介导精子转染外源DNA的效率;血清白蛋白能降低脂质体对精子介导的转染效率;脂质体法介导山羊转染外源DNA的最适转染条件为用mDM液充分洗涤精子后再与脂质体-DNA复合物混合转染.     

重组质粒pDsRed1-C1-PinX1的建立及其在乳腺癌MCF-7细胞中的表达

目的构建PinX1真核表达载体,观察PinX1基因对乳腺癌MCF-7细胞生长和增殖的影响。方法重组质粒转染MCF-7细胞并筛选稳定表达系;用Real-timePCR检测PinX1基因mRNA的表达;MTT法检测转染前后细胞生长变化;平板克隆形成试验检测PinX1对MCF-7集落形成能力的影响。结果构建了真核表达载体PDsRed1-C1-PinX1的稳定表达系;转染后乳腺癌MCF-7细胞生长明显减缓,集落形成能力降低。结论 PinX1基因可抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长和增殖。     

bcl-x基因在两株鼻咽癌细胞中的转录和表达

目的：研究细胞凋亡相关基因bcl-x在人鼻咽癌高分化上皮细胞株CNE-1和低分化上皮细胞株CNE-2Z中的转录和表达。方法：分别抽提两种细胞的总RNA，通过逆转录PCR(RT-PCR)检测bcl-x基因的转录；同时制备两种细胞的蛋白质样品。经免疫印迹检测bcl-x基因的表达。结果：在两株鼻咽癌细胞中均检测到bcl-xL的转录和表达。但没有bcl-xs的表达。结论：bcl-xL在人鼻咽癌高、低分化上皮细胞株中均有表达。但表达量没有明显差异提示其表达可能与细胞分化程度无关。     

EBV感染对人鼻咽癌细胞株形态参数和DNA含量的影响

目的：观察ＥＢＶ体外感染对不同分化不同分化状态鼻咽癌细胞株形态参数和ＤＮＡ含量的影响。方法：应用ＰＣＲ法检测ＥＢＶ基因、免疫组化和图像分析仪分别检测了ＥＢＶ和ＥＢＶ＋ＴＰＡ对ＣＮＥ－１和ＣＮＥ－２Ｚ细胞Ｃｋｐａｎ表达及形态参数和ＤＮＡ含量的影响。结果：（１）ＥＢＶ在体外可感染ＣＮＥ－１细胞；（２）ＥＢＶ感染ＣＮＥ－１细胞使其Ｃｋｐａｎ表达降低，胞面积籴小和核浆比升高及ＤＮＡ含量明显减少（Ｐ〈０．０     

顺铂对鼻咽癌细胞株端粒酶活性和凋亡的影响

目的：研究抗癌药顺铂对5株鼻咽癌细胞端粒酶活性和凋亡的影响．以探讨端粒酶活性水平与鼻咽癌的关系及顺铂诱导鼻咽癌细胞凋亡的可能机制，为端粒酶可能成为一种很好的鼻咽癌治疗靶点提供实验依据。方法：用TRAP—ELISA的方法定量检测5株鼻咽癌细胞在顺铂处理前后的端粒酶活性水平，观察细胞形态及生长状态．以流式细胞仪分析细胞周期的改变并检测凋亡。结果：5株鼻咽癌细胞端粒酶均呈阳性，其中LTRs—LMP细胞株端粒酶活性水平最高，高分化细胞株CNE—1端粒酶活性水平低于低分化细胞株CNE—2Z、HNE—2。经顺铂处理后5株鼻咽癌细胞端粒酶活性明显受抑制、细胞形态发生明显改变，出现细胞凋亡。结论：端粒酶的活化与鼻咽癌密切相关。临床常用化疗药物顺铂可能是通过在S期抑制端粒酶活性并诱导鼻咽癌细胞凋亡而发挥杭癌作用的。因此我们认为端粒酶可以作为鼻咽癌的一个治疗靶点。     

小鼠B7-1转基因肿瘤疫苗的制备及其评估

目的：评估导入B7-1基因的肿瘤细胞能否作为肿瘤疫苗治疗膀胱肿瘤。方法：采用脂质体Lipofectamin 2000 （Lip2000）将B7-1基因导入鼠膀胱肿瘤（MBT-2）细胞。细胞表面分子的表达经免疫荧光染色而测得。采用混合淋巴细胞培养MTT法．观察MBT-2-B7-1细胞刺激脾淋巴细胞增殖情况。通过动物实验测定该细胞的肿瘤形成能力。结果：当Lip2000与DNA的比值不低于4：1时能有效地转染MBT-2膀胱肿瘤细胞。转染了B7-1基因的肿瘤细胞能有效地刺激脾淋巴细胞的增殖,并在体内明显延迟了肿瘤的发生;肿瘤的生长也明显受到抑制。结论：B7-1转基因肿瘤细胞可能是制备良好膀胱肿瘤疫苗的细胞。     

鼻咽癌高淋巴道转移裸鼠移植瘤的细胞遗传学研究

研究鼻咽癌克隆株ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５高淋巴道转移裸鼠移植瘤离体培养细胞的细胞遗传学改变并探讨这种改变与肿瘤生物学特性之间的关系。方法染色体Ｇ显带后按人类细胞遗传学国际命名体制进行核型分析。     

鼻咽癌凋亡细胞核DNA与胞质微丝形态结构的激光共聚焦显微镜观察

用激光共聚焦显微镜的细胞＂ＣＴ＂、双重荧光标记、全自动图像分析及全自动摄影等技术研究鼻咽癌细胞ＣＮＥ－２Ｚ体外增殖和凋亡时核ＤＮＡ和胞质微丝的分布,获得了高质量图像,显示了不同光切面核ＤＮＡ的变化、胞质微丝的分布、核与胞质微丝间的相互关系以及胞核ＤＮＡ三维空间结构,为研究鼻咽癌细胞增殖和凋亡时核ＤＮＡ与胞质做丝的形态结构提供了一个新的方法。     

川芎嗪逆转人鼻咽癌顺铂耐药细胞系多药耐药性的实验研究

目的探讨川芎嗪（TMP）对人鼻咽癌顺铂（DDP）耐药细胞系（CNE2/DDP）多药耐药性的逆转作用。方法 TMP处理CNE2/DDP细胞后,分别用MTT法、流式细胞术、RT-PCR检测其对DDP耐药性的逆转作用、细胞凋亡和bcl-2mRNA表达的影响。结果 50、100mg/LTMP处理后,CNE2/DDP细胞对DDP耐药性的相对逆转率分别为57.50%、85.72%,差异有统计学意义（P〈0.01）。与对照组比较,50mg/LTMP处理可使CNE2/DDP细胞凋亡率明显增高（P〈0.01）,而bcl-2mRNA表达明显降低（P〈0.05）。结论 TMP可部分逆转CNE2/DDP细胞对DDP的耐药性。TMP可增强DDP对CNE2/DDP细胞的促凋亡作用,下调bcl-2mRNA表达。     

巴西菇多糖对肝癌细胞株凋亡的影响及其机制

目的：研究巴西菇多糖诱导人肝癌细胞株(SMMC—7721)凋亡的作用及机制。方法：采用电镜、DNA电泳、免疫组化法，对SMMC—772l株细胞凋亡以及凋亡抑制基因bcl—2的表达进行检测。结果：SMMC—772l株细胞经巴西菇多糖处理后出现核固缩、膜起泡、凋亡小体形成．琼脂糖凝胶电泳呈现出典型凋亡DNA梯状带．细胞内bcl—2表达较对照组低。结论：巴西菇多糖能诱导SMMC—772l株细胞发生典型凋亡．其抑制细胞内bcl—2的表达，是诱发肿瘤细胞凋亡的机制之一。