犬瘟热病毒抗体检测方法的比较研究

用犬瘟热（ＣＤ）弱毒和自制的高免犬血清，建立了检测犬瘟热病毒（ＣＤＶ）抗体的中和（ＳＮ）试验、间接荧光抗体技术（ＩＦＡＴ）和间接免疫酶染色法。这３种方法对３８份ＣＤ弱毒疫苗免疫犬血清抗体效价的测定结果表明，当被检血清稀释度为１∶１００时，ＳＮ试验、ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法测定时的阳性血清数分别为２９，７和３１份，ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法测定结果相对于ＳＮ试验结果的符合率分别为４２．１％和９４．７％。同时发现，当ＳＮ试验测定的血清效价在１∶１００以上时，ＩＦＡＴ测定结果总是在１∶２５以上，间接免疫酶染色法测定结果总是在１∶１００以上。３种方法以各自初步确定的ＣＤＶ血清抗体效价完全保护值指标计算所测血清的完全保护率，ＳＮ试验为７６．３％，ＩＦＡＴ为７８．９％，间接免疫酶染色法为８１．６％。据此认为，ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法均可部分代替ＳＮ试验用于ＣＤ疫苗免疫效果的评价、免疫犬抗体水平的监测以及ＣＤ的流行病学调查     

小熊猫接种犬瘟热疫苗后的抗体检测

以犬用犬瘟热弱毒疫苗接种从产地新引入南京市玄武湖动物园的２只小熊猫，在接种后１１个月内每月采血１次，用微量中和试验检测其体内抗犬瘟热病毒抗体效价结果显示：小熊猫接种后１个月时抗体效价已达１：１０００左右，２个月时效价最高达１：２０００左右，而后缓慢下降，至７和１１个月时分别约为１：１００和１：２００；同时检测了以前接种过同一疫苗的３只该动物园自己繁育的小熊猫和福州市动物园内的６只小熊猫的ＣＤＶ中和     

小熊猫接种犬瘟热弱毒疫苗的效果分析

使用荷兰英特威(intervet)公司生产的犬用犬瘟热(Canine Distemper)弱毒疫苗,接种了云南野生动物收容拯救中心、云南野生动物园和南京市红山森林动物园3处不同地点、不同饲养环境条件下的72只小熊猫,历时12 a,先后共接种302次,接种前所有小熊猫经过检疫、检查,无任何疾病,健康状况良好.抽检其中4只小熊猫作抗体变化测定,接种前中和抗体效价平均为1∶44,经犬用犬瘟热病弱毒疫苗接种后中和抗体效价提高到1∶1976,经多次接种试验,除1只发生不良反应出现死亡之外,其余接种的71只健康状况良好,多年来未发生犬瘟热病,通过此次试验,证明使用荷兰英特威公司生产的犬用犬瘟热弱毒疫苗接种小熊猫较为安全,中和抗体效价比接种前提高了45倍,有很好的免疫效果,是国内动物园预防小熊猫犬瘟热较为理想的疫苗.     

鸡传染性法氏囊病蜂灭活苗的田间免疫试验

用６批ＩＢＤ蜂胶灭活苗按０．５ｍｌ的剂量分别在７日龄１８－２０日龄免疫健康雏鸡，免疫后２８ｄ抗体阳转率为９８．３％，于免疫后４０ｄ对３批疫苗免疫的雏鸡用强毒攻击，保护率为１００％。以１．０ｍｌ的剂量于胸部皮下接种１８０－２００日龄产蛋鸡，免疫后２１ｄ卵黄抗体琼扩效价全部达１：６４以上。     

鸡传染性法氏囊病毒血清Ⅰ型和亚型混合弱毒疫苗研究初报

由美国ＩＢＤ血清Ⅰ型商品弱毒疫苗Ｂｕｒｓａ－Ｖａｃ，Ｕｎｉｖａｘ ＢＤ和中国广东的亚型弱毒疫苗ＣＮ９０３，ＣＳ９０４混合组成的弱毒疫苗，免疫剂量为１０００ＴＣＩＤ５０，对１２日龄无ＩＢＤ血清中和抗体或≤１：８的试验鸡，免疫试验结果表明，免疫后７天，能够产生９０－１００％的保护作用。ＩＢＤ混和弱毒疫苗保存在３４－３７℃１周，４－１０℃４周和－２５℃１２个月，疫苗的免疫保护率仍达１００％。对５个品种的     

犬冠状病毒超免疫血清的制备及应用

采用犬冠状病毒（ＣＣＶ）弱毒株和强毒株多次免疫健康犬，采集超免疫血清，其ＣＣＶ血清中和（ＳＮ）抗体效价高达１：２１０。试验结果表明，该超免疫血清安全、特异，无毒副作用，每只幼犬注射１．５ｍＬ／ｋｇ体重的该血清即可使９０％以上的犬获得１０￣１５ｄ的被动免疫保护；对１１０只患ＣＣＶ性肠炎病犬的临床治疗结果表明，该超免疫血清治疗效果可靠，其治愈率达９４％。     

鸡传染性法氏囊病免疫程序初探

用四种不同的免疫程序免疫肉雏鸡和蛋雏鸡：Ａ，分别于３、１０、２１日龄用ＩＢＤ弱毒疫苗饮水免疫；Ｂ，于１４、２８日龄用ＩＢＤ弱毒苗饮水；Ｃ，于３日龄弱毒苗饮水、１０日龄用油乳剂组织灭活苗皮下接种；Ｄ，１０日龄用油乳剂灭活苗皮下接种。试验表明，Ｃ、Ｄ两种免疫程序效果极佳，免疫鸡于２１日龄时就能检测出ＡＧＰ抗体，以后抗体上升较快，６０日龄时达高峰，其ＡＧＰ效价最高达１∶２８．４３、ＲＰＨＩ达１∶２１６．４３，蛋鸡至１２０日龄时，血清中仍可维持较高水平抗体，攻毒结果表明，各个日龄试验鸡对ＩＢＤ野毒攻击均具有１００％的保护率。而Ａ、Ｂ两种免疫程序效果不佳，只能产生低水平抗体，各个日龄试验鸡对野毒攻击均未获完全保护。     

几种犬瘟热弱毒疫苗免疫效果比较研究

选用小熊猫(LP)株犬瘟热病毒(CDV)驯化致弱毒株为种毒研制的CD弱毒苗与另外4种CD弱毒疫苗,分别接种于5组易感幼犬,于最后1次接种后第14d和第21d采血,分离血清测定CDVSN抗体效价,并于第21d采血后用CDV强毒攻击,统计保护率。结果5组犬免疫后其中和抗体都有不同程度升高,分别从1∶10以下升高到1∶25～1∶360不等,选用LPV70毒种作为种毒的第1组犬免疫抗体效价最高,平均达到1∶185以上,攻毒试验保护率达到100%,2组抗体效价达到平均数1∶180,保护率达到90%,3组、4组抗体平均水平1∶30和1∶40,攻毒试验保护率分别只有40%和50%,5组平均抗体水平为1∶140,攻毒试验保护率为87.5%。     

口蹄疫A型油佐剂和leo佐剂弱毒灭活疫苗免疫持续期的研究

用实验室配制的口蹄疫油佐剂和leo佐剂A型弱毒灭活疫苗各免疫6月龄健康敏感牛（乳鼠中和抗体滴度小于1：4）5头，免疫后每月采血一次，分离血清；采用固定病毒稀释血清的方法，通过乳鼠中和试验检测免疫牛血清中的口蹄疫A型中和抗体的产生与消长情况，用karber法计算中和效价，绘制动态曲线图。结果显示，口蹄疫弱毒灭活疫苗免疫牛，可以产生高滴度的血清中和抗体，免疫牛血清中和抗体效价均在免疫后1个月左右达到高峰。油佐剂疫苗免疫的牛，血清中和抗体效价比较高，但下降比较迅速；leo佐剂疫苗免疫的牛，血清中和抗体效价比较低，但下降比较平缓。     

抗猪瘟血清r-球蛋白液的研制与应用

采用猪瘟兔化弱毒２次免疫接种健康肥育猪制取的抗猪瘟血清ｒ－球蛋白液，其沉淀抗体效价达１∶３２以上，中和抗体效价达１∶２５６以上，治疗早、中期自然发生的猪瘟病例有效率达７７．５％。     

抗CDV、CAV卵黄抗体的制备

本研究用CDV、CAV分别免疫产蛋鸡，收集鸡蛋，用海藻酸钠—硫酸铵法提取卵黄抗体(IgY)，并对提取的IgY采用了SDS-PAGE和低压层析检测纯度，结果表明用该法提取的IgY纯度较高。用间接BUSA测定提取的IgY活性，结果证明提取的抗CAV IgY的活性较高，而抗CDV IgY的活性损失较大。     

表达犬瘟热病毒H基因重组新城疫病毒的构建及其免疫原性研究

为研制安全、有效的新型犬瘟热疫苗,本研究利用新城疫病毒(NDV) LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,构建出表达犬瘟热病毒(CDV)弱毒疫苗株Rockborn-20/8血凝素(H)蛋白的重组病毒rLa-CDV-H,并对其生物学特性进行鉴定,评估其作为犬瘟热活载体疫苗的安全性和有效性.通过免疫荧光和western blot试验证明了CDV H蛋白的正确表达;重组病毒株保持了LaSota亲本株的低致病性和高滴度鸡胚生长特性;重组病毒rLa-CDV-H接种12周龄比格犬后,可以诱导显著的CDV中和抗体反应.本研究表明重组病毒rLa-CDV-H具有作为犬瘟热重组病毒活载体疫苗的潜力.     

犬瘟热病毒在不同组织细胞上增殖特性的研究

将犬瘟热病毒(CDV)分别接种于长满单层的鸡胚成纤维细胞(CEF)、非洲绿猴肾细胞系(Ve-ro)、犬肾细胞系(MDCK),观察其病变时间、病变特征,并对其进行RT-PCR鉴定和TCID50测定。结果表明,CDV在这3种细胞上均能增殖,并产生明显的细胞病变(CPE),但在Vero细胞上产生病变的时间短,病变明显,且TCID50最高;RT-PCR检测CDV在不同细胞上的病毒培养液,均能扩增出337bp的片段;CDV在Vero细胞上的增殖滴度明显高于在CEF、MDCK细胞上的增殖滴度。表明本试验所选用的3种细胞中,Vero细胞最适宜培养CDV,所获得的CDV的毒价最高,病变最明显。     

Stability of canine distemper virus (CDV) after 20 passages in Vero-DST cells expressing the receptor protein for CDV

Isolates 007Lm, S124C and Ac96I and a Vero cell-adapted Onderstepoort strain of canine distemper viruses (CDV) were examined for stability after passages in Vero cells expressing the canine signaling lymphocyte activation molecule (dogSLAM, the intrinsic receptor to CDV). These viruses passage once in Vero cells expressing dogSLAM (Vero-DST) cells (original) and after 20 passages (20p) were compared by using sequence analyses and growth characteristics. All four strains of 20p grew well and were slightly better than their originals. The 20p viruses developed a cytopathic effect slightly lower than the original strains. A few changes in amino acids in the H gene were between the 20p and the original viruses, but the sites of changes were not specific. Fragments of P, M and L genes of all strains showed no nucleotide changes after the passages. These results showed that: (1) passages of CDVs in Vero-DST cells induced amino acid changes only in the H gene, not in the P, M and L genes, unlike in a previous study with Vero cells; (2) passages did not markedly affect the growth characteristics of every viral strain. These results indicate that Vero cells expressing canine SLAM allow the isolation and passaging of CDV without major changes in viral genes.     

犬瘟热病毒南京分离株的生物学特性鉴定

从南京地区临床诊断疑似为犬瘟热的病犬脑组织分离到 1株病毒 ,经鉴定为犬瘟热病毒 ( CDV) ,命名为 CDV-NJ1 5,对其培养特性、细胞毒力、血凝活性、抗原性、结构多肽和对犬的致病性进行了研究。结果表明 ,除 Vero外 ,CDV-NJ1 5还能在 MDCK、BHK-2 1、FE、DJRK、HEp-2等细胞系有限增殖 ,产生的 CPE特征与 Vero细胞类似 ,但不能在 PK1 5细胞系增殖。在 Vero细胞的 TCID5 0 和空斑形成单位分别为 1 0 - 5 .0 /m L和2 .4× 1 0 5 PFU/m L。参考株 CDV-Onderspoort的培养特性和细胞毒力基本与之相似 ;交叉中和试验表明 ,二者之间具有交叉反应和相同的抗原性 ;二者的结构多肽 NP蛋白和 F蛋白用特异性单克隆抗体免疫转印技术分析 ,未显示差异。动物回归试验表明 ,CDV-NJ1 5对犬表现出弱致病力。以上结果提示 ,该分离株是一持续性感染的弱毒株 ,其抗原性与疫苗株未显示差异     

Genotyping canine distemper virus (CDV) by a hemi-nested multiplex PCR provides a rapid approach for investigation of CDV outbreaks

CDV is a highly contagious viral pathogen causing a lethal systemic disease in dogs and other carnivores. Several lineages or genotypes of CDV exist that are variously distributed throughout several continents. Legal or uncontrolled trading of animals may modify the epidemiology of CDV, introducing novel strains in CDV-na?ve areas or accounting for the resurgence of CDV in areas where vaccine prophylaxis was effective and successful to control the disease. A hemi-nested PCR system was developed to genotype strains of the major CDV lineages, America-1, Europe, Asia-1, Asia-2 and Arctic. The assay was tested using a collection of 27 laboratory and vaccine strains and of 36 field CDV strains. Distinct lineages could be differentiated by specific primers targeted to the H gene. The method could be useful for molecular epidemiological studies of CDV, providing a tool for large-scale studies, and for the diagnosis of vaccine-related disease.     

犬瘟热病毒DNA疫苗接种犬的免疫保护

用犬瘟热病毒(CDV)囊膜糖蛋白基因(H、F)和核蛋白基因(N)重组质粒DNA和聚乙烯胺(PEI)混合后肌注10只3月龄CDV抗体阴性毕格犬,间隔30 d,共免疫3次,另选择5只犬作为阴性对照.免疫3次后,采用CDV攻毒.对照组呈现出犬瘟热的典型症状和组织病理损害,攻毒3周内,有2只犬衰竭死亡,1只犬症状明显,攻毒第18天外周血淋巴细胞中病毒RNA检测为阳性.DNA疫苗免疫组除出现一过性的体温升高外,未出现明显症状,攻毒后第18天外周血淋巴细胞CDV检测仍为阴性.DNA疫苗免疫后血清ELlSA抗体和病毒中和抗体测定显示,首免后机体激发的ELISA抗体滴度很低(101.25±0.615),二免后开始缓慢升高(101.69±0.285),再次免疫后达到102.051±0.214;中和抗体也呈现以上规律,三免后血清中和抗体为101.75±0.190,攻毒后血清ELISA抗体和中和抗体滴度迅速升高(103.02±0.202和102.41±0.245).试验表明CDV基因免疫对CDV的感染具有较好的保护作用,并能清除进入机体内的病毒.CDV基因免疫只激发较低水平的体液免疫,中和抗体在攻毒前达不到临界保护线(102),但对CDV攻击能产生较好的保护,推测其免疫效力可能源于细胞免疫和记忆性B淋巴细胞.     

Retrospective serological analysis of spontaneous CDV infection in 192 dogs

Spontaneous cases of canine distemper virus (CDV) infection were serologically evaluated. The 192 dogs in which CDV antigen was confirmed from tonsil by immunohistological examination were 2- to 4-months old, of various breeds, and unvaccinated. The prognoses were good in 74 dogs with significantly high levels of anti-CDV passive hemolytic aggregation (PHA) titer. In the other 118 dogs with poor prognoses, anti-CDV PHA titer was not detected. Anti-CDV PHA titer had the most significant association with the prognoses of CDV infection, and could be the most reliable and useful indicator for evaluating such prognoses.     

A distinct CDV genotype causing a major epidemic in Alpine wildlife

Canine distemper virus (CDV) infection represents an important conservation threat to many carnivore species and has contributed to the population decline of several wild terrestrial and aquatic mammalian species. Since 2006, the Alpine region of North-Eastern (NE) Italy has been experiencing a severe and widespread outbreak of CDV affecting the wild carnivore population. In this study we performed an extensive phylogenetic and molecular evolutionary analysis of CDV identified during the recent wildlife epidemic in the Alpine region. Our analysis yielded data on the evolutionary dynamics of the Alpine wildlife CDV epidemic and revealed the emergence and spread of a single genetic cluster of CDV. The wide distribution of the novel cluster combined with the identification of a specific amino acid mutation, which is believed to increase the ability of the virus to replicate in a wider host range, raises concerns over the possible implications of the spread of this virus on the conservation of endangered wildlife species.