反向遗传技术及其在猪病防控研究中的应用

反向遗传技术与经典的从表型改变到进行基因特征研究的思路相反,是指通过在体外构建病毒的感染性cDNA克隆,通过病毒拯救获得低毒力的弱毒株,并且新毒株的免疫原性保留,可以作为弱毒疫苗而广泛应用到猪病防控中,将是未来新型猪病疫苗研究的发展方向。文章针对反向遗传技术在猪病防控中的研究概况作一简要综述,以期为加强我国新型疫苗研究开发和提高我国猪病防控能力提供参考。     

抗体检测在猪病防控中的应用

开展抗体检测工作对猪病的临床诊断、流行动态的监测、疫苗免疫效果的评价及免疫程序的修订等均具有重要的指导意义,随着我国猪病防控体系的不断发展和完善,抗体检测将逐步成为猪病监测的常态化工作。文内对猪群抗体检测的原理、主要方法、作用与意义、检测结果分析等方面进行了论述。总结探讨抗体检测在猪病防控中的应用,旨在呼吁加强对抗体检测工作的重视,合理运用抗体检测结果修订免疫程序,提高猪病防控能力。     

我国猪瘟疫苗免疫现状及抗体检测方法综述

我国对猪瘟的防控采取以疫苗免疫接种为主的综合防控措施,而猪瘟免疫抗体检测是评价猪瘟疫苗免疫效果的主要方法,也是猪瘟免疫猪群免疫水平监测的重点,只有当免疫猪群抗体水平达到一定滴度才能防止猪瘟野毒株的感染。猪瘟疫苗免疫抗体水平监测对猪瘟疫苗免疫效果的评估,免疫程序的修订均具有重要的指导意义。鉴于此,笔者通过对2010年以来我国猪瘟疫苗免疫后抗体监测文献的整理与汇总,分析出了近几年我国猪瘟疫苗的免疫现状与特点,为我国当前猪瘟的防控提供了有效信息,并为进行针对性防疫措施的制定提供了科学依据。文章还对猪瘟疫苗免疫抗体的检测方法进行了综述,比较分析了各种抗体检测方法的优缺点以及发展前景,为兽医部门及养殖单位选择合理的抗体检测方法提供参考。     

猪瘟强毒与弱毒鉴别检测方法的研究进展

<正>猪瘟(Classical swine fever,CSF)以前又名烂肠瘟,是由黄病毒科黄病毒属的猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起猪的一种高度接触性、致死性的传染病,临床上主要以稽留高热、皮肤和黏膜出现大量出血点为主要特征[1]。猪瘟具有高度传染性,主要通过呼吸道和消化道传播,传播速度快、发病率和死亡率高,给养猪业造成了巨大的经济损失;世界动物卫生组织将其列为A类传染病,     

核酸适体及其在疫病诊断上的应用

核酸适体是指采用指数富集配体的系统进化技术从随机单链寡核苷酸库中筛选出的能与靶物质高特异性、高亲和力结合的配体。鉴于适体特有的亲和力高、特异性强、精确识别、易体外合成与修饰等特点,其被广泛应用于分析化学、基因调控、蛋白质组学和新药研发等领域。在疫病的检测方面,核酸适体逐渐成为抗体的代替或补充试剂,已初步应用于生物芯片、生物传感器、分子信标等多种检测技术平台,并具有良好的敏感性和特异性,显示出了良好的应用前景。本文就适体技术及其在疫病诊断中的应用进展作一综述。     

流行性乙型脑炎病毒E蛋白的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立

为建立一种快速检测流行性乙型脑炎病毒抗体的方法,本研究参照已发表的JEV基因组序列,应用RT-PCR扩增了长约1000bp的E基因片段,连接pET30a表达载体中,经诱导后获得了以包涵体形式表达的重组E蛋白。重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明其具有良好的抗原性和特异性。以该蛋白作为诊断抗原,建立了检测流行性乙型脑炎病毒抗体的E-ELISA诊断方法。该诊断方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,为JEV的快速诊断、免疫猪群抗体监测和JEV流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。     

表达牛呼吸道合胞体病毒G蛋白基因的重组Ⅰ型牛疱疹病毒的构建与鉴定

为构建表达牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白基因的牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)重组病毒,本研究将人工合成的BRSV全长G蛋白基因编码序列插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建TK基因缺失转移载体。利用磷酸钙-DNA沉淀法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组DNA共转染牛鼻甲细胞后收获增殖的病毒。通过反向蚀斑筛选,得到重组病毒BHV-1/TK-/G+。PCR检测结果证实G蛋白基因已经插入到了亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组中,间接免疫荧光试验和western blot证实BHV-1/TK-/G+中的G蛋白基因在感染的细胞中获得了表达。本研究为研制BRSV及其他重要牛传染病的BHV-1病毒活载体疫苗奠定了基础。     

牛传染性鼻气管炎病毒重组gD蛋白间接ELISA方法的建立及应用

用大肠杆菌表达的牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）重组gD蛋白纯化后作为包被抗原,建立了检测牛传染性鼻气管炎病毒抗体的间接ELISA方法。交叉反应试验表明,该重组抗原与其它常见的5种牛病阳性血清不发生交叉反应;阻断反应试验表明,IBRV病毒悬液能在很大程度上阻断重组抗原与阳性血清的反应,而对阴性血清没有明显影响。在重复性试验中,批内重复的变异系数小于5%,批间重复的变异系数小于15%。与中和试验相比较,符合率、敏感性和特异性分别为84.1%、85.0%和83.4%。应用该诊断方法和本实验室已建立的以IBRV全病毒作为包被抗原的ELISA诊断方法,同时检测了采集于国内11个省份的2012份血清样本,IBRVgD-ELISA检测的平均阳性率为46.0%（926/2012）,而且相对于IBRV全病毒ELISA诊断方法的符合率、敏感性和特异性分别为91.9%、94.2%和90.2%。本研究所建立的IBRVgD-ELISA具有良好的敏感性和特异性,为国内IBR流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。     

丁酸梭菌的生物学功能及其在养猪生产中的研究与应用进展

丁酸梭菌是一种以丁酸、乳酸和乙酸为主要代谢产物的专性厌氧革兰氏阳性芽孢杆菌,具有耐高温、耐酸和耐多种抗生素等生物学特性,优点为安全、无残留、绿色环保、稳定性好等,且有改善动物肠道环境,提高营养物质消化吸收利用率,提高动物机体免疫力和抗病力,抗氧化等多种生物学功能,是一种具有广泛开发潜力和开发前景的新型绿色饲料添加剂。文章就丁酸梭菌的形态特征与生物学特性、生物学功能及其在养猪生产中的研究与应用现状进行综述,为丁酸梭菌更好地推广应用于养猪生产提供参考。     

间接 ELISA 试剂盒在猪乙型脑炎抗体检测中的应用效果评价

猪乙型脑炎（Epidemic Encephalitis B）是由日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）引起的一种急性人兽共患传染病,猪主要特征表现为高热、流产、产死胎和公猪睾丸炎,感染率较高,发病率和死亡率较低,对国内养猪业和公共卫生都带来了巨大威胁。间接ELISA抗体检测方法具有价格低廉、操作简单、高通量、敏感性高、特异性强等优点,是猪乙型脑炎血清学抗体水平检测的主要方法。研究利用猪乙型脑炎间接ELISA抗体检测试剂盒对2012-2013年采集于山东、河南、河北等地的526份免疫猪血清样品进行了抗体检测,并进行了间接ELISA抗体检测试剂盒与乳胶凝集试验抗体检测试剂盒的符合率研究。旨在评价猪乙型脑炎间接ELISA抗体检测试剂盒的临床适用性及准确性,进而评价其临床应用效果,同时掌握我国猪乙型脑炎疫苗的群体免疫效果,了解我国部分地区猪乙型脑炎的免疫现状,为猪乙型脑炎的综合防控提供参考依据。