鸡柔嫩艾美尔球虫对免疫细胞体外增殖及产生的免疫相关分子的影响

【目的】检测鸡柔嫩艾美尔球虫体外刺激的巨噬细胞和淋巴细胞活力及分泌的细胞因子目的是了解球虫对免疫细胞增殖及产生的免疫相关分子的影响。【方法】无菌条件分离鸡外周血和脾淋巴细胞,淋巴细胞和HD11巨噬细胞分别与鸡柔嫩艾美尔球虫子孢子体外共培养,采用MTT、Griess、ELISA、RT-PCR法、流式细胞术等方法检测细胞增殖、免疫相关分子水平。【结果】子孢子组鸡外周血和脾淋巴细胞增殖明显高于对照组(P0.05);子孢子组HD11巨噬细胞NO和iNOS的分泌量明显增加(P0.05),外周血和脾淋巴细胞NO和iNOS分泌量升高,但统计差异不显著,脾淋巴细胞iNOS分泌量低于对照组差异不显著,但子孢子组免疫细胞上iNOS基因表达水平上调且显著高于对照组(P0.05);子孢子组HD11巨噬细胞和外周血淋巴细胞IL-2分泌量极显著低于对照组(P0.01),且IL-2mRNA表达下调;HD11巨噬细胞和脾淋巴细胞IFN-γ量极明显高于对照组(P0.01),而外周血淋巴细胞IFN-γ分泌量明显降低,IFN-γmRNA表达量与对照组无显著统计差异;子孢子组HD11巨噬细胞吞噬能力及明显强于对照组(P0.01),其表达MHC-Ⅱ分子的阳性细胞百分率显著高于对照组,细胞上表达KUL01表面分子阳性百分率显著降低,但阳性细胞平均荧光强度都极明显高于对照组(P0.01)。【结论】鸡柔嫩艾美尔球虫刺激免疫细胞增殖,提高巨噬细胞和淋巴细胞NO和iNOS的分泌量明显增加及iNOS基因表达水平上调,但IL-2分泌量下降其mRNA表达下调,免疫相关分子(MHC-II)表达量增加,结果表明鸡柔嫩艾美尔球虫能不同程度影响免疫细胞增殖及产生免疫相关分子。     

表达犬瘟热病毒H基因重组新城疫病毒的构建及其免疫原性研究

为研制安全、有效的新型犬瘟热疫苗,本研究利用新城疫病毒(NDV) LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,构建出表达犬瘟热病毒(CDV)弱毒疫苗株Rockborn-20/8血凝素(H)蛋白的重组病毒rLa-CDV-H,并对其生物学特性进行鉴定,评估其作为犬瘟热活载体疫苗的安全性和有效性.通过免疫荧光和western blot试验证明了CDV H蛋白的正确表达;重组病毒株保持了LaSota亲本株的低致病性和高滴度鸡胚生长特性;重组病毒rLa-CDV-H接种12周龄比格犬后,可以诱导显著的CDV中和抗体反应.本研究表明重组病毒rLa-CDV-H具有作为犬瘟热重组病毒活载体疫苗的潜力.     

3种中药提取液对鸡艾美耳球虫卵囊孢子化的影响

为探讨中药提取液对体外球虫卵囊孢子化的影响,将3种不同艾美耳球虫未孢子化卵囊与不同浓度(25%,50%,100%)的中药商陆、白头翁、常山提取液共培养24 h和48 h,显微镜观察球虫卵囊的孢子化情况,计算孢子化率。结果发现各种中药浓度为50%的条件下,24 h后,柔嫩、毒害、堆型艾美耳球虫的孢子化率在商陆培养下分别为26.20%、4.74%、24.09%,在白头翁培养下分别为57.95%、10.74%、20.74%,在常山培养下分别为64.65%、20.53%、18.03%;48 h后,柔嫩、毒害、堆型艾美耳球虫在商陆培养下分别为58.41%、40.89%、31.45%,在白头翁培养下分别为64.81%、19.42%、60.90%,在常山培养下分别为64.18%、39.70%、63.16%。与对照组比较,药物组球虫培养24 h和48 h后,卵囊孢子化率显著降低,100%浓度的药物抑制效果最好,50%浓度药物次之。3种中药提取液对鸡艾美耳球虫卵囊体外孢子化均有一定的抑制作用,且随着药物浓度增加,对球虫孢子化的抑制作用增强;但抑制程度有差异,其中商陆抑制作用最好。     

地鳖提取物制备和体外抗氧化活性的研究

为研究地鳖不同提取物的体外抗氧化活性。分别通过蛋白酶水解、水提法制备地鳖多肽、多糖和水提物,采用邻苯三酚自氧化、Fe²⁺-邻二氮菲法和分光光度法分别检测地鳖不同提取物对超氧阴离子自由基（O₂^-·）、羟自由基（OH·）和二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)的清除,分光光度法分别检测红细胞氧化溶血和肝脏线粒体肿胀吸光度值,硫代巴比妥酸（TBA）法测定小鼠不同组织丙二醛（MDA）含量。地鳖多肽、地鳖多糖,地鳖水提物组对O₂^-·、OH·和DPPH·三种自由基的清除率显著低于阳性对照组,随着提取物浓度的升高对自由基清除率增加;随着地鳖三种提取物浓度提高红细胞溶血吸收值比溶血组显著降低,地鳖水提物组红细胞溶血率明显低于地鳖多肽和多糖组。地鳖多肽组肝脏MDA生成抑制率最高,地鳖多糖组肾脏MDA抑制率高于地鳖多肽和水提物组,随着地鳖提取物浓度提高各组织中MDA生成抑制率升高;随着反应时间延长地鳖提取物组肝脏线粒体吸光度值高于肿胀对照组。地鳖多肽、多糖和水提物有效的清除三种自由基,抑制红细胞溶血和肝脏线粒体肿胀,保护肝肾组织氧化损伤,具有一定程度体外抗氧化活性。