动物核酸疫苗研究近况

核酸疫苗已显示出强大的优越性和生命力,其发展前景巨大。随着研究的不断深入,核酸疫苗的作用机制也在不断地被阐明。外源目的基因的选择、载体的选择、接种组织的预处理等都是影响着核酸疫苗在体内表达的主要因素。由于核酸疫苗具有常规疫苗所没有的优点,但同时核酸疫苗也存在一些尚未解决的问题。随着人们对核酸疫苗的不断改进,相信核酸疫苗无论是在疾病预防还是基因治疗中,将起着更加重要的作用     

大菱鲆胚胎生长与核酸关系的研究

对大菱鲆胚胎发育过程进行观察,研究胚体的生长性能以及核酸、蛋白的变化,分析生长性状与生化指标间的关系。结果表明：（1） 在不同发育时期,大菱鲆胚体长度呈现“缩小-膨大-再缩小-再膨大”的变化过程,在受精后5 h 40 min出现最小值0.998 mm,在孵化期出现最大值1.089 mm。（2） 油球在卵裂期之前逐渐增大,在卵裂期之后逐渐缩短;在受精后9 h 40 min的多细胞期达到最高值0.192 mm,在受精后65 h达到最低值0.176 mm。（3） 胚体质量在原肠期之前呈增大趋势,原肠期之后呈降低趋势;在受精后7 h 30 min的128细胞期出现最低值0.340 mg,在9 h 40 min的多细胞期出现最高值0.674 mg。（4） RNA/DNA和蛋白质/DNA比率变化表明,大菱鲆胚胎发育至卵裂期后,胚体的生长以细胞增殖为主直至囊胚期;之后胚体生长以细胞增大为主直至原肠期;胚胎发育至原肠期后,胚体的生长以细胞增殖为主直至器官形成期;之后胚体生长以细胞增大为主直至孵出;即大菱鲆胚体的生长是细胞增殖和细胞增大周期性交替的过程。（5） 胚胎形态性状和胚体质量跟生化指标间均为“二项式”关系,而且RNA/DNA比率是与胚胎生长性状关系密切的指标。     

侵染胡椒的黄瓜花叶病毒海南分离物全序列分析及亚组鉴定

对侵染海南胡椒的3个黄瓜花叶病毒分离物(CMV-WN1,CMV-DA,CMV-FT)的全序进行克隆和分析。CMV-WN1,CMV-DA,CMV-FT分离物RNA1全长分别为3 361,3 360,3 359个核苷酸(nt),编码1a蛋白;RNA2全长分别为3 044,3 048,3 046 nt,编码2a和2b蛋白;RNA3全长分别为2 217,2 224,2 216 nt,编码3a和CP蛋白。序列一致性比较结果表明,CMV-WN1,CMV-DA,CMV-FT的RNA1,RNA2,RNA3均与CMV亚组IB CMV-SD序列一致性最高,编码的所有蛋白的氨基酸序列一致性也均与CMV-SD序列一致性最高,其中除了2b氨基酸序列一致性低于90%外,其他蛋白的氨基酸序列的一致性均高于93.5%。RNA3的5'NTR结构分析以及RNA3 5'NTR核苷酸序列和CP氨基酸序列系统进化树分析结果表明CMV-WN1,CMV-DA及CMV-FT均属CMV IB亚组。CP系统进化树中CMV-WN1,CMV-FT与云南胡椒分离物CMV-YNP聚成一簇,而CMV-DA与海南胡椒分离物CMV-HNP独立形成另一个分支。     

PCR－核酸试纸条法快速检测鸽子源性成分

[目的]提高动物源性成分检测效率,建立PCR-核酸试纸条快速检测技术体系。[方法]针对物种特异性DNA序列,设计并标记引物;建立并优化PCR反应体系;利用通用核酸试纸条进行结果判读。[结果]试验表明,PCR-核酸试纸条特异性高;绝对灵敏度为0.001 3 ng/μL,混合样品,实际灵敏度为0.01%;加工处理样品,实际灵敏度为0.1%;最低检测限检出率为100%,稳定性良好。[结论]综上,PCR-核酸试纸条方法是一种既有PCR反应的高灵敏度,又具有免疫学检测的特异性好的特点,同时操作简便的快速检测方法。     

脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶-1基因敲低人肺癌细胞A549构建及其对线粒体功能影响

目的 建立脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶-1(APE1)基因敲低人肺癌细胞A549,并初步观察线粒体功能变化.方法 APE1基因shRNA序列与pSIREN-RetroQ慢病毒载体经酶切连接重组体(pSIREN-RetroQ-shAPE1),再与病毒包装质粒共转染293T细胞;收集病毒液并感染A549细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞株A549shAPE1.免疫印迹法检测稳定细胞株中APE1干扰效率.用双氧水处理A549 shCotrol和A549 shAPE1细胞24 h,分析细胞内ATP及活性氧(ROS)变化.结果 经PCR和测序鉴定成功构建重组慢病毒载体pSIREN-RetroQ-sh APE1,免疫印迹法证实A549 shControl和A549 shAPE1稳定细胞株构建成功;双氧水处理后,A549shAPE1细胞中ATP活性明显低于A549shControl细胞(P＜0.05),而ROS明显增加(P＜0.01).结论 APE1干扰可影响肺癌细胞中线粒体功能.     

食药用真菌翅鳞伞菌丝体蛋白活性的研究

对翅鳞伞菌丝体的胞内粗蛋白进行分离、纯化、筛选,获得了抗水稻纹枯病菌的翅鳞伞纯化菌丝体蛋白PSPB-2。通过荧光显微镜观察PSPB-2对人肺癌细胞株（A549）的影响,发现PSPB-2会引起A549出现典型的细胞凋亡现象。进一步研究发现PSPB-2有限制性核酸内切酶的活性。说明菌丝体蛋白PSPB-2具有抗真菌作用的同时又具有抗肿瘤作用。     

华北紫丁香花芽分化期营养物质与核酸含量的变化

为制定合理的花期调控措施.进一步揭示华北紫丁香花芽分化的生理特性,以不同时期的华北紫丁香花芽、叶芽及其叶片为材料,研究在花芽分化过程中可溶性糖、淀粉、可溶性蛋白质及核酸含量的变化.华北紫丁香在生理分化期花芽中可溶性糖、可溶性蛋白质、淀粉及核酸含量都达到最大值.且花芽的积累远远大于叶芽,说明以上物质的高浓度均有利于花芽的孕育;形态分化期间花芽中可溶性糖、淀粉、蛋白质、核酸含量下降后,又逐步回升,且其各个时期含量均高于叶芽.初步明确了华北紫丁香花芽分化期的主要营养物质及其核酸含量的变化规律.     

茶树多酚氧化酶基因的PCR-RFLP多态性分析

采用PCR-RFLP技术,检测茶树多酚氧化酶(PPO)基因中4个限制性核酸内切酶酶切位点在不同品种中的多态性,以研究其与品种适制性及遗传背景的关系。遗传参数分析表明:4个位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),HpaⅡ酶切位点(引物L7/L8扩增区段)呈现高度多态,BsuRⅠ酶切位点呈现中度多态,这2个酶切位点在不同品种中的基因型分布与品种的遗传背景有直接的关联,可作为遗传标记应用于茶树品种遗传亲源关系分析与亲子鉴定。HpaⅡ酶切位点在引物L7/L8扩增区段存在丰富的多态性,且与品种适制性具有明显关联,适制红茶的品种多为AA基因型,此位点能被HpaⅡ内切酶完全酶切;适制绿茶与乌龙茶的品种多为BB型或AB型,此位点不能被酶切或不能完全被酶切,该HpaⅡ酶切位点可作为茶树品种适制性早期鉴定的遗传标记。对引物L7/L8扩增区域的HpaⅡ酶切位点在祁门4号×潮安大乌叶F1代群体进行分型检测的结果表明,该位点在F1代的分离符合孟德尔遗传规律(x2=0.23)。     

二温式PCR在特异短核酸探针合成中的应用

经基因库序列比对确定花生白藜芦醇合酶基因(RS)中的特异序列(长度约108 bp).以此为模板设计分别含有Sal I和Sac I酶切位点的一对上、下游引物,并应用二温式PCR扩增得到该特异短片段.将该特异片段正向连接到pBIueskriptIIKs( )的多克隆位点上,利用T7 RNA聚合酶在体外转录合成地高辛标记的反义特异短核酸探针.该特异短核酸探针的合成为后续RS基因在花生组织器官中表达的RNA原位杂交研究打下了基础.     

鸡新城疫病毒的检测方法

新城疫（Newcastle Disease，ND）也称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟，是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）引起的一种禽类急性、热性、败血性传染病。新城疫病毒粒子一般呈圆形，有囊膜，直径100—250nm，但常因囊膜破损而形态不规则，也可见横断面直径100nm左右的不同长度的细丝，病毒核酸为单股负链RNA，NDV基因组由15186个核苷酸组成，编码6种蛋白，