脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶-1基因敲低人肺癌细胞A549构建及其对线粒体功能影响

目的 建立脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶-1(APE1)基因敲低人肺癌细胞A549,并初步观察线粒体功能变化.方法 APE1基因shRNA序列与pSIREN-RetroQ慢病毒载体经酶切连接重组体(pSIREN-RetroQ-shAPE1),再与病毒包装质粒共转染293T细胞;收集病毒液并感染A549细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞株A549shAPE1.免疫印迹法检测稳定细胞株中APE1干扰效率.用双氧水处理A549 shCotrol和A549 shAPE1细胞24 h,分析细胞内ATP及活性氧(ROS)变化.结果 经PCR和测序鉴定成功构建重组慢病毒载体pSIREN-RetroQ-sh APE1,免疫印迹法证实A549 shControl和A549 shAPE1稳定细胞株构建成功;双氧水处理后,A549shAPE1细胞中ATP活性明显低于A549shControl细胞(P＜0.05),而ROS明显增加(P＜0.01).结论 APE1干扰可影响肺癌细胞中线粒体功能.     

FBXO31对肺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨FBXO31基因对肺腺癌细胞系A549增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响.方法 通过脂质体转染法将FBXO31表达质粒及FBXO31 siRNA序列分别转染肺癌A549细胞,用Western blot、MTT、平板克隆、划痕和Transwell实验分别检测A549细胞中FBXO31蛋白表达、细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力.结果Western blot显示FBXO31表达质粒转染上调A549细胞中FBXO31蛋白表达,而转染siRNA下调FBXO31蛋白表达.FBXO31基因过表达增强A549细胞增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力,而FBXO31基因沉默抑制细胞增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力(P＜0.01).结论FBXO31基因可促进肺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力.     

FBXO31基因促进顺铂诱导的肝癌细胞凋亡

目的 探讨FBXO31基因对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响.方法 通过脂质体转染法将FBXO31基因表达质粒转染至肝癌HepG2细胞,再用2 mg/L顺铂处理,分别用MTT、流式细胞术、免疫印迹检测细胞活性、凋亡、FBXO31蛋白表达.结果 与pcDNA组比较,FBXO31组细胞活力显著降低,细胞凋亡明显增多,FBXO31蛋白表达显著升高(P＜0.01或0.05).结论 上调FBXO31基因表达促进顺铂诱导的肝癌细胞凋亡.     

PM2.5对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的影响

目的 研究大气污染颗粒(PM2.5)对博莱霉素诱导肺纤维化的影响及分子机制.方法 24只雌性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、博莱霉素组和PM2.5组,其中博莱霉素组和PM2.5组小鼠气管一次性滴注博莱霉素5 mg/kg,假手术组滴注等体积生理盐水.造模后第1天气管内给药,PM2.5组和博莱霉素组分别滴注100 mg/kg PM2.5和等体积生理盐水.21 d后处死小鼠,HE和Masson染色观察肺组织病理变化,碱水解法测定肺组织羟脯氨酸含量,免疫印迹检测肺组织中IRE1和CHOP蛋白表达量.结果 与假手术组相比,博莱霉素组发生明显肺炎和肺纤维化,羟脯氨酸含量明显升高(P＜0.01),与博莱霉素组比较,PM2.5能加重肺纤维化程度,增加羟脯氨酸含量,促进IRE1和CHOP蛋白表达(P＜0.01).结论 PM2.5加重博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化可能涉及内质网应激通路.