基因免疫制备牛分枝杆菌MPB64抗原单克隆抗体

为了建立针对牛分枝杆菌分泌抗原MPB64的检测手段,制备该抗原的单克隆抗体,构建真核表达载体pcDNA-mpb64,以原核表达并纯化的融合蛋白H-MPB64包被ELISA板,建立单克隆抗体检测方法。利用基因免疫方法免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术筛选出针对牛分枝杆菌分泌蛋白MPB64的单克隆抗体一株,并制备了腹水,经鉴定腹水效价达到1∶10240,采用硫酸铵沉淀法纯化腹水,纯化抗体效价为1∶8000,为今后研制分枝杆菌鉴定技术奠定基础。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxⅢA基因的克隆和表达

以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型参考株基因组DNA为模板，PCR方法扩增出apx ，ⅢA基因3．1kb的片段，扩增产物克隆于pMD18-T中，重组质粒经酶切鉴定后进行核苷酸序列测定，并与GenBank中不同血清型胸膜肺炎放线杆菌apx11A基因进行比较，结果显示核苷酸同源性均在96％以上。将该基因片段亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1的BamHⅠ／Sal Ⅰ位点，成功构建了重组表达载体pGEX—apx ⅢA，转化大肠杆菌BL-21（DE3）中并获得表达。SDS—PAGE结果显示，表达的融合蛋白分子量约为140Ku，与预测相符，Western blot证明该融合蛋白具有免疫学活性。该融合蛋白的成功表达为猪传染性胸膜肺炎亚单位疫苗的研制奠定了基础。     

胸膜肺炎放线杆菌菌毛研究进展

胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleurop—neumoniae，APP）是引起猪传染性胸膜肺炎的致病菌，能够引起各个年龄阶段的猪发生急性或慢性感染。     

大肠杆菌“菌影”的制备

通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将该基因连接到含有PR/cI启动阻遏系统的pBV220载体中,从而使裂解基因E和启动阻遏系统λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建溶菌质粒pBV-E。采用CaCl2法将其转入大肠杆菌BL21(DE3),含有裂解质粒的大肠杆菌在28℃条件下生长到对数生长期,然后升温到42℃诱导其溶解,制成了大肠杆菌菌影。电镜观察发现菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。     

利用Red重组系统敲除大肠杆菌菌株ClpP基因方法的研究

为了研究ClpP基因的功能,试验利用Red系统的重组功能,通过PCR扩增出两端与大肠杆菌菌株CIpP基因上、下游序列同源,中间为氯霉素抗性基因cat的DNA片段,电击转化含质粒pKD46的大肠杆菌菌株D H091,筛选替换CIpP基因的阳性转化子,再导入质粒pCP20去除氯霉素抗性基因.结果表明:成功敲除大肠杆菌菌株C...     

谈创建新农村工作新局面

村庄、村镇是农民经济、政治、文化和社会生活的自然聚合地，更是社会主义新农村建设的基础性平台。建设村镇、繁荣村镇与新农村建设20字方针密切相关。从生产发展来讲，村庄是经济发展的前提条件，只有实现安居，才能乐业、创业，才能逐步实现农业现代化。     

猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型25—4株感染及免疫攻毒试验

为了评价猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清7型25-4株致病性和其灭活疫苗的免疫原性,本研究采用猪胸膜肺炎放线杆菌7型25-4株感染健康猪,每组感染剂量分别为106CFU、107CFU、108CFU,结果发现106CFU感染剂量就可以复制出典型的猪传染性胸膜肺炎病理变化;以该菌株制备的灭活疫苗免疫健康猪21 d后.用106CFU、107CFU 2个不同感染剂量进行强毒攻击,其对照组均发病,免疫组获得100%保护.     

副猪嗜血杆菌Plp4蛋白的原核表达及免疫原性分析

为原核表达副猪嗜血杆菌P1p4蛋白,本研究通过PCR方法扩增P1p4全长基因并克隆于pET-28a(+)载体中,将重组质粒转化BL21(DE3)感受态中,采用0.4 mM IPTG经22℃诱导表达了35 ku的重组蛋白.经western blot试验证明Plp4蛋白具有良好的反应原性,免疫6周龄昆明小鼠制备免疫血清,ELISA检测表明制备的抗血清效价在1∶15000以上,表明P1p4蛋白具有良好的免疫原性.     

农村公共产品供给问题研究综述及转型期思考——以小型农田水利设施为例

小型农田水利设施作为与农业生产和农民生活息息相关的重要农村公共产品之一,其供给的发展过程从很大程度上反映了农村公共产品供给的发展变化过程。在“四化”同步推进、中国农业生产和农村发展面临重大变化趋势的转型时期,把握历史发展脉络并借鉴成功的国际经验,对深化小型农田水利设施产权制度改革、促进农村公共产品供给提出思考,具有学术的综述性意义和现实的政策制定参考价值。本文将纵向以学者的历史演变研究为脉络,总结小型农田水利设施从不被认可到被重新界定为公共产品的发展变化过程,横向通过总结小型农田水利设施建设和管理的国际经验对比研究,对现存的阻碍小型农田水利发展的问题进行梳理,并提出转型期的一些思考。     

牛分枝杆菌分枝菌酸环丙烷合酶PCAA的表达与鉴定

以牛分枝杆菌Vallee株基因组为模板，利用PCR方法扩增该菌株的环丙烷一分枝茵酸合酶pcaA基因，并克隆到原核表达载体pET-32a（＋）中，通过大肠杆菌BL21（DE3）表达重组融合蛋白，并利用Ni-亲和层析的方法纯化出重组蛋白。通过鉴定其免疫活性。试验结果表明，成功扩增出了牛分枝杆菌中pcaA基因并纯化出了重组的融合蛋白，通过免疫印记发现，重组蛋白可与牛结核阳性血清发生特异性反应，为进一步研究牛分枝杆菌的致病机理奠定基础。