禽分枝杆菌副结核亚种重组蛋白r22-ag85B的表达及纯化

为表达并纯化禽分枝杆菌副结核亚种主要抗原基因的串联重组蛋白r22-ag85B,期望研制出一种新型副结核病疫苗,以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增了22KD基因和ag85B基因。采用重叠延伸剪接PCR技术（SOE-PCR）获得了融合基因22-agS5B,将基因连接于表达载体pET32a（＋）,构建了重组质粒pET22-ag85B。将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）中,以IPTG（终浓度1mmol／L）诱导后对表达产物进行Western blot检测。检测结果显示,成功表达并纯化了重组蛋白r22-ag85B,其分子质量约为65ku。Western blot检测表明此蛋白具有良好的免疫学活性。禽分枝杆菌副结核亚种22-ag85B重组蛋白的成功表达及纯化为副结核病疫苗的研究工作奠定了基础。     

猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型信号标签诱导突变体库的构建

本研究以自杀性质粒pUT携带含有信号标签的Mini-Tn5转座子对猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌进行转座诱变,构建了带有12对特异性信号标签的Mini-Tn5转座子的pUT自杀质粒,转化到供体菌E.coliβ2155后,利用双亲本滤膜杂交法与受体猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌(APP1)进行接合转移,构建并优化了接合转移体系.利用抗性和营养缺陷培养平板筛选得到接合突变体,通过抗性通用引物与12个特异标签引物和胸膜肺炎放线杆菌毒素IV(ApxIV)鉴定引物分别对这些突变体进行了PCR鉴定和测序验证.结果表明,经过加入标签的MinI-Tn5转座子可以通过接合转移的方式从供体菌E.COliβ2155中插入到APP1基因组当中,并成功构建了12个含有特异信号标签的重组质粒,获得了APP1的12个转座突变体库,经筛选鉴定后得到561个突变株.这为研究APP1的功能基因和筛选特定突变株提供了必要的基础.     

城市高层建筑环境空间的绿化规划设计

城市高层建筑建设规模的不断扩大和建设数目的不断增加必然迫使现代城市的密集化。所谓高层建筑环境空间,它是指高层建筑的外部场地和影响场地,而高层建筑环境空间的绿化通常涵盖了中庭绿化、外部场地绿化、墙体里面绿化和屋顶绿化等,其中以外部场地绿化为主。本文就城市高层建筑环境空间的绿化规划设计予以讨论。     

基于MapGis的基本农田信息提取方法研究

基本农田上图工作是全国第二次土地调查工作的重要组成部分。以MapGis为平台，以基本农田上图方法中的判读转绘法为基础，重点介绍基本农田信息提取的3种实现方法，分别是删除图斑法、提取边界线法、提取图斑法，以保证数据的完整性及准确性。     

基于本体的集中型广域农业信息服务系统研究

针对我国农业信息咨询服务中存在的技术含量低、互动性差、信息增值困难等问题，提出了一种基于本体的集中型广域农业信息服务系统的模型框架。引入农业领域本体作为语义理解的基础，对用户的咨询问句进行语义扩展、语义推理，更好地理解用户查询意图。同时，运用专家诱导型提问机制帮助用户构建正确有效的提问，提高了咨询服务的智能性和准确性。     

基于灰色理论的产业结构调整与能源消费分析——以青海省为例

鉴于能源消费系统的复杂性及非线性的特征,针对青海省能源发展现状,运用灰色系统理论的灰色关联度定量地分析了能源消费与产业结构的关系,得出一、二、三产业及生活用能与能源消费的关联度,从而预测今后几年的能源消费趋势。结果表明,第二产业对能源消耗总和的关联度最大。最后,根据研究结果,对如何实现节约用能提出几点建议：在第二产业中大力提升高技术产业,限制高耗能、高污染工业的发展;倡导低碳经济生活方式,大力宣传节能,合理控制生活部门的能源消费量可有效降低能源消费量;在第三产业中积极推行清洁生产,大力发展循环经济。     

大肠杆菌“菌影”的制备

通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将该基因连接到含有PR/cI启动阻遏系统的pBV220载体中,从而使裂解基因E和启动阻遏系统λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建溶菌质粒pBV-E。采用CaCl2法将其转入大肠杆菌BL21(DE3),含有裂解质粒的大肠杆菌在28℃条件下生长到对数生长期,然后升温到42℃诱导其溶解,制成了大肠杆菌菌影。电镜观察发现菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。     

利用Red重组系统敲除大肠杆菌菌株ClpP基因方法的研究

为了研究ClpP基因的功能,试验利用Red系统的重组功能,通过PCR扩增出两端与大肠杆菌菌株CIpP基因上、下游序列同源,中间为氯霉素抗性基因cat的DNA片段,电击转化含质粒pKD46的大肠杆菌菌株D H091,筛选替换CIpP基因的阳性转化子,再导入质粒pCP20去除氯霉素抗性基因.结果表明:成功敲除大肠杆菌菌株C...     

基于本体的研究

针对我国农业信息咨询服务中存在的技术含量低、互动性差、信息增值困难等问题,提出了一种基于本体的集中型广域农业信息服务系统的模型框架。引入农业领域本体作为语义理解的基础,对用户的咨询问句进行语义扩展、语义推理,更好地理解用户查询意图。同时,运用专家诱导型提问机制帮助用户构建正确有效的提问,提高了咨询服务的智能性和准确性。     

牛分枝杆菌分枝菌酸环丙烷合酶PCAA的表达与鉴定

以牛分枝杆菌Vallee株基因组为模板，利用PCR方法扩增该菌株的环丙烷一分枝茵酸合酶pcaA基因，并克隆到原核表达载体pET-32a（＋）中，通过大肠杆菌BL21（DE3）表达重组融合蛋白，并利用Ni-亲和层析的方法纯化出重组蛋白。通过鉴定其免疫活性。试验结果表明，成功扩增出了牛分枝杆菌中pcaA基因并纯化出了重组的融合蛋白，通过免疫印记发现，重组蛋白可与牛结核阳性血清发生特异性反应，为进一步研究牛分枝杆菌的致病机理奠定基础。