母牛乳腺炎的发生原因、临床表现及防治措施

乳腺炎是母牛养殖过程中出现概率较高的一种疾病类型,不仅会影响产后泌乳高峰期母牛泌乳性能的充分表现,而且会导致泌乳母牛丧失泌乳能力。文章以母牛乳腺炎为入手点,阐释概述了母牛乳腺炎的发生原因,解析了母牛乳腺炎的临床表现,并提出了几点母牛乳腺炎的防治措施。     

牛结核病体外免疫诊断技术

牛分支杆菌感染的主要特征是引起 细胞免疫反应。现在牛结核病的诊断试验是 以T细胞反应机制为基础的。低敏感性的结 核血清学试验是不值得提倡的,血清学试验 最好作为细胞学试验的补充而不是替代。最 近,发现了牛结核γ干扰素试验是一种快速 的(24h)惟一使用全血的体外试验,该方法 在澳大利亚应用,结果表明,比传统的结核菌 素法诊断牛结核更敏感。假阳性反应的难题 归因于所使用的抗原制品间的交叉反应特 性,设动物对牛PPD和禽PPD的γ干扰素反 应作对照可解决假阳性的问题。虽然牛结核 特异性蛋白已确认并被分类,这些特异性蛋 白可能在血清学或细胞学诊断试验中使用, 但是它们可能因牛对牛分支杆菌感染的免疫 反应的遗传多样性而受到限制。     

杨梅早结丰产清洁栽培技术探讨

杨梅适应性,四季常绿,树姿优美,因此被当作生态经济林主要树种发展。但因栽植成活率低,且通常适龄不结果,影响了杨梅生产的发展。杨梅果实没有果皮包裹,既不可剥（削）皮,又因杨梅肉柱突出,果面凹凸不平,一旦被粉尘、农药、病虫、果蝇等污染就很难清洗干净,因而影响人们食欲。笔者经过多年的摸索,掌握了一套能将杨梅种植成活率提高到90％以上,且达到早结、丰产、清洁的栽培技术。现介绍如下。     

副猪嗜血杆菌血清5型TbpA蛋白的表达及其免疫原性分析

为原核表达副猪嗜血杆菌血清5型TbpA蛋白,本研究利用特异性引物扩增tbpA基因,并将其克隆到pMD 18-T载体中进行序列测定.再将其亚克隆于pET-28a中构建重组表达质粒pET-tbpA.将其转化受体菌E.coli BL21 (DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳和western blot分析表明,表达的重组蛋白约106 ku,并以包涵体形式存在.表达的重组蛋白经纯化后,免疫6周龄昆明小鼠制备免疫血清,ELISA分析表明制备的血清抗体效价在1∶3 200以上,表明TbpA具有良好的免疫原性.     

牛抗菌肽Bac7-Bac5-β defense串联基因在昆虫杆状病毒系统中的表达及其产物的活性分析

根据GenBank中公布的牛抗菌肽bac7、bat5和βdefense(LAP基因)成熟肽基因序列,人工合成了抗菌肽融合基因Bac7-BacS-β defense,克隆到BAC-TO-BACTM重组杆状病毒表达系统的pFAST HTb载体中,构建了重组转座载体pFASTBac-Bac7-Bac5-βdefense,转化DH10Bac大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞,PCR方法筛选阳性菌落,抽提大分子质粒DNA,获得重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-Bac7-Bac5-βdefense,转染昆虫草地夜蛾(Bombyx mandarina)Sf9细胞出现病变后,收集含有重组病毒颗粒的培养上清,重新感染草地夜蛾St9单层细胞,收集Si9细胞超声破碎,12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳可见表达的融合蛋白带,分子量大小为20 kD,表达量约占细胞总蛋白的10.6%.体外抑菌实验表明重组的rBac7-Bac5-βdefense蛋白对大肠杆菌,具有抑菌活性.     

沙地樟子松天然林长期定位监测样地的最小面积界定

利用在红花尔基沙地樟子松天然林中所设置的2块1 hm2大样地,借助Winkelmass软件设置不同样地大小并随机进行100次重复抽样,统计分析了不同样地大小对林分结构研究中的两个重要因子(林分密度、林木分布格局估计)的影响。结果表明:当调查面积增加到3 600 m2时,林分的密度估计趋于稳定,相对误差不超过10%;林分结构参数角尺度也趋于稳定,格局吻合率达95%以上,由此确定出红花尔基沙地樟子松天然林森林结构研究的最小取样面积为3 600 m2。     

机械通风低温杀虫试验

华北地区秋季收购入库的小麦，由于农户保管不善，害虫感染比较严重。小麦入仓后利用夜晚最低气温在10℃以下的气候条件，采用机械通风的方法将粮温降到15℃以下，使害虫处于低活动昏迷状态，冬季再次用机械通风进一步降低粮温至5℃以下，并保持较长时间，最终导致害虫死亡，达到了安全、经济、有效的杀虫目的；采用多种储粮技术相结合，互为补充，使粮食安全度夏，是一种低成本、高效益的储粮方法．     

胸膜肺炎放线杆菌Apxll毒素的基因序列特征

为了深入地了解胸膜肺炎放线杆菌(APP)分泌的ApxⅡ毒素的分子结构及序列特征,本实验以一株APP 7型现地分离株L25-4株为实验材料,对其分泌的ApXⅡ毒素的结构基因apxⅡA及其上游启动子区进行了PCR扩增和测序。结果表明APP7型L25-4株apxⅡA基因与其它血清型apxⅡA基因核苷酸序列同源性达99．5%以上,氨基酸序列同源性达98．5%以上。在ApxⅡA蛋白的N末端有3个大的疏水结构域,分布在240～422位氨基酸之间。在ApxⅡA蛋白的C末端有富含甘氨酸(Gly)和天门冬氨酸(Asp)的九肽(nonapeptides)重复序列Leu/Ile/Phe-Xaa-Gly-Gly-Xaa-Gly-Asm/Ssp-Asp-Xaa,串连重复9次。这些结构域的起始氨基酸的位置分别为374、503、630、735、753、762、771、780和802。推定的赖氨酸酰基化作用位点为557位氨基酸,与E．coli的HlyA相比,在688位氨基酸处少了一个赖氨酸酰基化作用位点。apxⅡA基因启动子-10区序列为AATAAT,-35区序列为TTAAT,-10区与-35区间隔序列为11个碱基。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxⅢA基因的克隆和表达

以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型参考株基因组DNA为模板，PCR方法扩增出apx ，ⅢA基因3．1kb的片段，扩增产物克隆于pMD18-T中，重组质粒经酶切鉴定后进行核苷酸序列测定，并与GenBank中不同血清型胸膜肺炎放线杆菌apx11A基因进行比较，结果显示核苷酸同源性均在96％以上。将该基因片段亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1的BamHⅠ／Sal Ⅰ位点，成功构建了重组表达载体pGEX—apx ⅢA，转化大肠杆菌BL-21（DE3）中并获得表达。SDS—PAGE结果显示，表达的融合蛋白分子量约为140Ku，与预测相符，Western blot证明该融合蛋白具有免疫学活性。该融合蛋白的成功表达为猪传染性胸膜肺炎亚单位疫苗的研制奠定了基础。