间接Dot－ELISA检测猪细小病毒抗原的研究

本文成功地建立了间接斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）用于检测ＰＰＶ抗原对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为２．５ｎｇ／点。ＰＰＶ阳性猪血清的特异性阻断试验及交叉反应试验证明，该方法对ＰＰＶ抗原的检测具有特异性。以该方法检测ＰＰＶ人工感染兔样本和自然染猪样本，ＰＰＶ抗原的阳性检出率分别为肾样本１００％（１７／１７）、８１．８２％（９１／１１），肝样本１００％（１６／１６）、５６．５２％（１３／２３）。２０份随机样本的间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测结果与病毒分离和鉴定结果相符。     

间接法Dot－ELISA检测鸡败血支原体（MG）抗原的研究

本文首次建立了检测鸡败血支原体（ＭＧ）抗原的间接法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ。ＭＧ抗原的最低检出量为７．８１×１０￣４ＣＦＵ／ｍｌＭＧ人工及自然感染样本的抗原检测结果与ＭＧ分离的符合率分别为８４．６％和９２．９％。间接法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测抗原经济、快速、操作简便，有较好的敏感性、特异性和重复性，能检出ＭＧ人工及自然感染病鸡的带菌情况，适合于大规模抗原样本的检测，可以用作疫病早期诊断的依据和进行流行病学调查。     

间接Dot—ELISA检测猪细小病毒抗原的研究

本文成功地建立了间接斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）用于检测ＰＰＶ抗原体对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为２．５ｎｇ／点。ＰＰＶ阳性猪血清的特异性阻断试验及交叉反应试验证明，该方法对ＰＰＶ抗原的检测具有特异性。以该方法检测ＰＰＶ人工感染兔样本和自然染猪样本，ＰＰＶ抗原的阳性检出率分别为肾样本１００％（１７／１７）、８１．８２％（９／１１），肝样本１００％（１６／１６）、５６．５２％（１３／２     

斑点免疫金银染色法检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的研究

用建立的斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１：４００,ＳＰＡ－胶体金探针的工作浓度为１：８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点,用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管,肺,肾病科,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％,对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,Ｉ     

单抗介导的斑点ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

用群特异性的单克隆抗体作第一抗体,用酶标兔抗体ＩＢＶＩｇＧ作第二抗体,建立夹心法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ程序检测鸡传染性支气管炎病毒抗原。试验表明,本程序检测ＩＢＶ抗原高度敏感性和特异性。最低抗原检出量为０．５μｇ,约１００个气管环半数感染量（１００ＴＯＣＩＤ５０）,阳性检出率为９６％。     

应用Dot—ELISA检测鸡白血病病毒群特异性抗体

利用斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）的基本原理,根据蛋清可以直接吸附在硝酸纤维素（ＮＣ）膜上的特点,建立了Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测鸡白血病病毒（ＡＬＶ）群特异性抗原的方法,并与双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ）进行比较,两种方法具有相同的特异性和敏感性。     

斑点酶联免疫吸附试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体方法的建立

首次建立了斑点－酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ，美洲株）抗体的方法。特异性鉴定表明，ＰＲＲＳＶ不与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒阳性血清反应；与美国进口的ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ诊断试验盒检测结果比较，３５份猪血清的阴、阳性检出总符合率为８２．９％（２９／３５），其中Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性检出率略高于进口试剂盒的检出率。     

Dot—ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究

用差速离心法提纯ＰＲＲＳ病毒，利用ＮＣ膜作为载体，在国内外首次成功建立了检测ＰＲＲＳ血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为１００μｇ／ｍｌ，被检血清工作浓度为１：１０，酶标兔抗猪ＩｇＧ工作浓度为１：６００。对７２份北京地区猪血清分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率为３３．３％，ＩＦ检测阳履率为３０．６％，与ＩＦ符合率较高，对部分待检血清检测     

猪瘟Dot－ELISA诊断试剂盒的研究

猪瘟Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒的研究黄骏明，朱庆虎（中国农科院哈尔滨兽医研究所）应用与猪瘟病毒有共同可溶性ＰＰ抗原的牛病毒性腹泻病毒ＯｒｅｇｏｎＣ。；Ｖ毒株制备抗原，进行免疫斑点试验（ＤＯｔ－ＥＬＩＳＡ）已成功地用于猪瘟血清抗体的监测［、’］。为了...     

间接法Dot—ELISA检测鸡减蛋综合症抗体的建立及应用研究

应用ＳｅｐｈａｄｃｘＧ－２００层析法纯化鸡减蛋综合症病毒，利用ＮＣ膜作为载体，成功建立了检测ＥＤＳ－７６血请抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为２μｇ／ｍｌ，被检血清浓度为１：２０，酶标兔抗鸡１ｇＧ浓度为１：２００．底物溶液最适ｐＨ值为７．２。对Ａ－Ｆ６个养禽场随机抽检血清１６０份，分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ、ＨＩ和ＡＧＰ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检出阳性率为５１．９％，ＨＩ检出阳性率为４６．９％，ＡＧＰ检出阳性率为３１．９％。对１４０日龄鸡人工感染试验，测定抗体消长规律。本方法不需特殊仪器。适用于基层兽医部门和养鸡场对ＥＤＳ－７６的血清学诊断和流行病学调查。     

2015年山东省肉鸡饲料原料中重金属污染情况调查及风险评估

本试验旨在调查2015年山东省肉鸡饲料原料中砷、铅、镉、铬和汞元素的污染情况,评估饲料原料的污染风险。试验收集烟台市莱阳、威海市文登、青岛市莱西、潍坊市诸城、日照市莒县、临沂市沂水、德州市夏津等地不同饲料生产厂家使用的8种饲料原料,包括玉米、豆粕、麸皮、花生粕、棉籽粕、玉米蛋白粉、干酒糟及其可溶物( DDGS)和微量元素预混料,应用电感耦合等离子体原子发射光谱法( ICP-AES)检测镉、铅和铬元素的含量,应用原子荧光光谱法( AFS)检测砷和汞元素的含量,计算检出率、平均含量、超标率、最高含量与平均含量比值( HC/AC)和离散系数。结果表明：饲料原料中砷、铅、镉、铬和汞元素的检出率分别为32.29%、7.29%、12.50%、100.00%和100.00%;阳性样品中平均含量分别为0.21、1.27、2.12、3.48和0.02 mg/kg,超标率分别为0.00、1.04%、1.19%、54.76%和9.52%;微量元素预混料中砷、铅和镉元素,棉籽粕中铬元素及花生粕中汞元素的HC/AC最大,微量元素预混料中镉元素、花生粕中汞元素、豆粕中砷元素及棉籽粕中铅和铬元素离散系数最大。综上所述,肉鸡饲料原料中铬和汞元素污染严重;微量元素预混料中砷、镉、铬和铅元素、棉籽粕中铬和铅元素、花生粕和豆粕中汞元素易出现严重污染,因此建议制定预混料和饼粕类饲料中多种重金属元素的限量标准。     

促卵泡素和促黄体生成素对儋州鸡生殖激素调控规律的研究

为研究促卵泡素（FSH）和促黄体生成素（LH）对儋州鸡体内其他生殖激素的调控规律,本试验通过改变FSH和LH在儋州鸡血液中的浓度,并采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）对处理前后儋州鸡血液中FSH、LH、催乳素（PRL）、孕酮（P）、雌二醇（E₂）的浓度进行测定。结果发现,注射外源性FSH和LH分别能提高儋州鸡血液中FSH和LH浓度;当儋州鸡血液中FSH或LH浓度显著升高时则均能引起PRL浓度显著降低（P < 0.05）,但当FSH和LH浓度同时显著升高时,PRL浓度显著升高（P < 0.05）;当儋州鸡血液中FSH浓度显著升高时,E₂及P浓度显著提升（P < 0.05）,且在高浓度LH的协同下提升幅度更大;当儋州鸡血液中LH浓度显著升高时E₂及P浓度升高但不显著（P > 0.05）。本研究结果表明,儋州鸡血液中FSH或LH浓度的提高均能降低PRL的浓度,并能不同程度的提升E₂及P的浓度,但FSH与LH浓度同时提高则能通过协同作用刺激E₂及P浓度的大幅提升,当E₂及P浓度过高时能通过刺激PRL的释放,负反馈调节血液中FSH与LH,并恢复血液中E₂及P浓度。     

牛、羊、人叠朊基因的克隆与分析

为了解我国哺乳动物叠朊基因Prnd的生物信息，本实验采用PCR方法克隆了秦川黄牛、甘肃土种绵羊和汉族人的Prnd，运用分子生物学软件对这些序列进行了分析比较。结果表明，获得的三种哺乳动物的Prnd均位于1个单一的外显子内，与GenBank登录的相应序列具有高度同源性。秦川黄牛与甘肃土种绵羊Prnd的同源性为96．8％，推导氨基酸序列同源性为93．3％。汉族人Prnd与秦川黄牛和甘肃土种绵羊Prod的同源性均为80％，推导的氨基酸序列同源性均为76．3％。氨基酸一级结构分析显示3种Prod编码的叠朊均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPI锚结合区组成。二级结构预测表明，3种Prod编码的叠朊均由3个α-螺旋和2个β-片层组成。本研究获得的这3种主要哺乳动物的Prnd信息为一进步研究叠朊的结构与功能奠定了基础。     

Study on Regulation of Reproductive Hormones in Danzhou Chicken by FSH and LH

To investigate the regulation of reproductive hormones in Danzhou chicken by follicle-stimulating hormone (FSH) and luteotropic hormone (LH),the concentration of FSH and LH in Danzhou chicken blood were changed by different treatments and the concentration of FSH,LH, prolactin (PRL), progesterone (P), and estradiol (E₂) in the blood were determined using the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).The results showed that exogenous FSH and LH could improve the concentrations of FSH and LH,respectively. When one of FSH and LH increased alone,the concentration of PRL was significantly decreased (P < 0.05),while it was significantly increased when FSH and LH were both increased (P < 0.05).The high level of the FSH could result the significant increase of E₂ and P (P < 0.05),and it would expand the increasing effect in cooperation with the high concentration of LH. While the high level of the LH could elevate the concentration of E₂ and P,but effect was not significant (P > 0.05).In conclusion,the study suggested that the increase level of FSH or LH could reduce the concentration of PRL in Danzhou chicken,meanwhile,it could increase the concentration of E₂ and P in varying degrees. However,both of the FSH and LH increase in the blood could result the significant increase of E₂ and P as the synergy. When the concentration of E₂ and P were too high,it could stimulate the release of PRL which could adjust the concentration of FSH and LH,and rebalance the concentrations of E₂ and P in the blood.     

鬼臼多糖对免疫功能低下小鼠自由基产生酶活性的影响

采用环磷酰胺腹腔注射(50mg/kg)小鼠建立免疫抑制模型,观察鬼臼多糖(PEP)不同剂量(50,100,200mg/kg和400mg/kg)配合环磷酰胺应用后,对小鼠脾脏中黄嘌呤氧化酶(XOD)、髓过氧化物酶(MPO)及一氧化氮合成酶(NOS)水平的影响。结果表明,PEP能显著降低免疫抑制小鼠脾脏XOD、MPO的活性;对脾脏总NOS活性无显著影响,但400mg/kg多糖可降低小鼠脾脏诱导型NOS活性,提示PEP可通过降低免疫抑制小鼠体内自由基产生酶水平而起到抗氧化作用。     

磺胺甲噁唑抗原合成及其抗体的制备

采用重氮化法将磺胺甲噁唑(SMZ)与人血清白蛋白偶联形成免疫原,免疫大白兔制备多克隆抗体。通过紫外扫描和高效液相色谱分析偶联物,免疫抗原的偶联率为19∶1,改良辛酸-饱和硫酸铵纯化抗体,多克隆抗体效价达1∶105,间接酶联免疫吸附试验建立的SMZ检测的线性范围在0.1ng/mL~10μg/mL之间,50%抑制率检测限为22.53ng/mL,抗体与磺胺甲噁唑交叉反应率为100%,与其他7种磺胺药交叉反应率很低。表明制备的磺胺甲噁唑多克隆抗体具有很高的特异性,可用于SMZ在动物性产品中残留的检测。     

补饲醋酸甲羟孕酮基础上分别进行前列腺素、N-甲基-D-天冬氨酸和来曲唑处理对母羊血浆繁殖激素水平的影响

试验旨在研究醋酸甲羟孕酮（medroxyprogesterone acetate,MPA）与前列腺素（prostaglandin,PG）、N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA）和来曲唑（letrozole,LE）的不同配伍对母羊血浆繁殖相关激素水平的影响。选取3岁经产萨福克母羊39只,平均体重（75.51±11.55） kg,随机均分为3组,试验Ⅰ组饲喂基础日粮+34 mg/（d·只） MPA+1 mL/只PG,试验Ⅱ组饲喂基础日粮+34 mg/（d·只） MPA+600 mg/（d·只） NMDA,试验Ⅲ组饲喂基础日粮+34 mg/（d·只） MPA+14 mg/（d·只） LE,试验期18 d。结果发现,补饲MPA基础上进行PG处理,母羊血浆中FSH水平呈极显著升高（P<0.01）;补饲MPA基础上进行NMDA处理,母羊血浆中E2、MLT、FSH和LH水平均呈极显著升高（P<0.01）;补饲MPA基础上进行LE处理,母羊血浆中MLT、LH和T水平均呈极显著升高（P<0.01）。综合比较各生殖激素之间的关系及变化规律,在本试验条件下,建议MPA与NMDA和LE分别结合使用,可作为调控母羊繁殖性能的药品;且通过比较激素水平得出,MPA与NMDA组合效果最佳。     

Effects of Prostaglandin,N-methyl-D-aspartate and Letrozole on Ewes Plasma Levels of Reproductive Hormones were Evaluated on the Basis of Medroxyprogesterone Acetate Supplementation

This study was aimed to investigate the effects of the different compatibility of medroxyprogesterone acetate (MPA) with prostaglandin(PG), N-methyl-D-aspartate (NMDA) and letrozole (LE) on plasma related hormones levels of reproductive ewes. Thirty-nine and 3-year-old multiparity Suffolk ewes with average weight (75.51+11.55)kg were selected,and assigned into 3 groups,test group Ⅰ:Basis diet+34 mg/d MPA+1 mL/ewe PG, test group Ⅱ:Basis diet+34 mg/d MPA+600 mg/d NMDA, test group Ⅲ:Basis diet+34 mg/d MPA+ 14 mg/d LE, respectively, the trial period lasted for 18 days. The results showed as follows:On the basis of supplemental feeding MPA with PG treated,the levels of FSH in plasma of ewes were extremely significantly increased (P<0.01); Treated with NMDA, the levels of E₂, MLT,FSH and LH in plasma of ewes were extremely significantly increased (P<0.01), respectively;Treated with LE, the levels of MLT,LH and T in plasma of ewes were extremely significantly increased (P<0.01), respectively. This study suggested that MPA+NMDA and MPA+LE could be used as medicines for regulate and control oestrus of ewes, and the effect of MPA+NMDA was the best.     

MDV对雏鸡血浆MDA含量与SOD活性的影响

为探讨丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)在雏鸡马立克病(MD)发病过程中的作用,研究了雏鸡在人工攻毒后血浆MDA含量与SOD活性的动态变化.结果表明,攻毒组接种马立克病病毒(MDV)后第14天,血浆中MDA的含量显著高于对照组(P＜0.05),第7天和第28天高于对照组,第56天时基本接近;血浆中SOD活性在第7天时对照组显著高于攻毒组(P＜0.05),第14天和第28天高于攻毒组,但差异不显著.表明雏鸡在感染MDV后血浆中MDA含量显著升高,SOD活性明显降低,对雏鸡MD的发病诊断有重要的指导作用.     

温度胁迫对亚热带常用草坪草活性氧代谢相关酶的影响

研究了在高温和低温胁迫下,亚热带建坪常用草坪草叶片的活性氧代谢相关酶与细胞膜透性的变化,并依据"自由基"假说,探讨了温度胁迫条件下自由基对草坪草细胞(主要是细胞膜体系)的伤害机理,初步揭示了不同温度胁迫下草坪草受害的致成原因以及不同品种间的差异.研究结果表明,以活性氧代谢指标与细胞膜透性为评判抗性大小的依据,各类品种的抗寒性大小顺序是匍匐剪股颖Agrostis stolonifere>草地早熟禾Poa pratensis>多年生黑麦草Lolium perenne>高羊茅Festuca arundinacea>狗牙根Cynodon dactylon,抗热性大小顺序是狗牙根 > 高羊茅 > 草地早熟禾 > 多年生黑麦草 > 匍匐剪股颖.研究运用了亚热型草坪草活性氧代谢相关酶测定的方法进行了草坪草品种鉴定和抗性比较,为亚热带地区草坪草品种选择、建植和维护提供了科学的理论依据.