氨苯磺胺多克隆抗体的制备

采用重氮化法将氨苯磺胺与人血清白蛋白偶联形成免疫原，免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。通过紫外扫描分析，免疫原中药物分子与蛋白质分子的偶联比为32：1，改良辛酸-饱和硫酸铵法纯化抗体，多克隆抗体效价达1：10^5，间接ELISA建立的氨苯磺胺检测的线性范围为1ng／mL～100μ/mL，70％抑制率可检测最低浓度为0．09μ/mL，以抗体与氨苯磺胺的反应率为100％，抗体与其他7种磺胺药交叉反应率很低。结果表明，制备的氨苯磺胺多克隆抗体具有很高的特异性，可用于动物性食品中氨苯磺胺残留的检测。     

磺胺甲恶唑人工抗原的合成与鉴定

为检测磺胺甲恶唑(SMZ)的残留,用重氮化方法将SMZ偶联于载体蛋白BSA和OVA上,合成了免疫抗原BSA-SMZ和包被抗原OVA-SMZ。经紫外扫描、SDS-PAGE电泳鉴定后,免疫BALB/c小鼠,制备多抗血清;利用间接ELISA法测定多抗血清效价,竞争ELISA测定多抗血清的敏感性和特异性。结果表明,所合成的免疫抗原效果较好,6只免疫小鼠多抗血清的效价均大于1∶1.28×104,5号小鼠的多抗血清敏感性最高,半数抑制浓度为47.1ng/mL,与其他磺胺类药物无交叉反应,具备良好的特异性。试验成功合成了SMZ人工抗原,并制得了敏感性高、特异性好的鼠源多抗血清,为SMZ单克隆抗体制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。     

免疫胶体金法检测磺胺甲噁唑残留的研究

应用胶体金免疫层析技术（GICA）进行磺胺甲嗯唑（SMZ）的残留检测研究。制备抗磺胺甲嗯唑多克隆抗体，并采用柠檬酸三钠法制备20nm胶体金颗粒。胶体金标记多抗后喷涂到玻璃纤维膜上，特异性抗原（SMZ-OVA）以线状包被在硝酸纤维素膜上，制成快速检测试纸条。滴加检测溶液后，若呈现一条红色条带则为阴性，无红色条带则为阳性。该方法对SMZ标准溶液的灵敏度达到50ng／mL，试纸条显色结果清晰，反应灵敏，整个检测反应在5～10min内完成，稳定性及重复性良好。     

链霉素人工抗原的合成及其多克隆抗体的制备

利用直接化学交联法将链霉素(SM)与蛋白载体(BSA,OVA)偶联生成免疫原和包被原,对偶联产物采用紫外扫描和麦芽酚试验鉴定偶联成功。用免疫原免疫BALB/C小鼠,用间接ELISA检测抗体效价,采用竞争ELISA测IC50,获得了效价为1:51200,IC50为23.62ng/ml的链霉素多克隆抗体,与双氢链霉素的交叉反应率为107%,与同类的其它药物均无交叉反应。     

应用胶体金免疫层析法测定牛奶中的磺胺类药物残留

应用胶体金免疫层析法对牛奶中的磺胺类药物残留进行检测,研究该方法的灵敏度、假阳性率、假阴性率及特异性。结果表明,用胶体金免疫层析法测定牛奶中的磺胺类药物,检测限分别为磺胺嘧啶60μg/L、磺胺二甲基嘧啶20μg/L、磺胺喹噁啉80μg/L、磺胺氯哒嗪30μg/L、磺胺间二甲氧嘧啶50μg/L、磺胺间甲氧嘧啶50μg/L、磺胺甲噁唑80μg/L、磺胺苯酰50μg/L、磺胺对甲氧嘧啶30μg/L、磺胺异噁唑10μg/L、磺胺甲氧哒嗪70μg/L、磺胺多辛70μg/L,假阳性率为2%,假阴性率为0;方法的特异性较好,对其他抗生素无交叉反应;检测实际样本的结果与液相色谱-质谱/质谱法基本一致。可见,该方法简便、快速、准确、稳定,适用于牛奶中磺胺类药物残留的现场快速检测。     

恩诺沙星完全抗原的合成及兔源多抗血清的制备

为了合成恩诺沙星（enrofloxacin,EFLX）完全抗原,制备兔源多克隆抗体血清,试验通过活化酯法将小分子的EFLX偶联到牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白(OVA)上,形成偶联物EFLX-BSA和EFLX-OVA,以EFLX-BSA为免疫原免疫兔,以EFLX-OVA为检测原通过ELISA方法检测兔血清效价。结果表明,免疫兔血清效价都在1∶51200以上,其中2号兔效价最高,达到1∶204800,敏感性好,半数抑制浓度IC₅₀为169.91 ng/mL,检测范围为37.52～302.31 ng/mL。本试验成功制备了EFLX完全抗原,获得了敏感的兔源多克隆抗体血清,为以后ELISA试剂盒和胶体金试纸条的研发奠定了基础。     

四环素多克隆抗体的制备、鉴定及ELISA检测

采用戊二醛交联法和混合酸酐法制备了四环素-BSA完全抗原,分别将两种不同偶联法制备的四环素-BSA完全抗原按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,酶联免疫吸附法鉴定出多抗中含有四环素的特异性抗体,特异性抗体效价最高达1:320000,抑制率为50%(IC50)时的四环素浓度为92.6μg/mL,四环素的最低检测限为6.25μg/mL,四环素和金霉素的交叉反应率达到78%,该方法灵敏度高,为试纸条法快速检测四环素类的残留奠定了基础。     

磺胺甲(噁)唑单克隆抗体的制备及初步鉴定

以重氮化方法将磺胺甲噁唑分别与人血清白蛋白(HSA)、卵清蛋白(OVA)载体蛋白连接,分别作为免疫原与包被原进行抗血清制备及酶联免疫吸附测定法(ELISA)试验,经筛选产生了特异性单克隆抗体。交叉试验表明:产生的特异性抗体与磺胺甲噁唑反应明显,与其他类似物交叉反应不明显。     

倍他米松ELISA检测方法的建立

为建立倍他米松(BET)ELISA检测方法,先使BET与琥珀酸酐反应,再采用活化酯法与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原;其次,利用免疫动物获得多克隆抗体,经Sephrose 4B-proteinA方法对抗体进行纯化;最后,建立倍他米松ELISA检测方法。结果表明,免疫抗原偶联成功,获得了亲和力较高的多克隆抗血清,间接竞争ELISA测定其滴度为102 400、IC15为6.60×10-5 ng/mL和IC50为0.97ng/mL。该方法适用于残留在动物性食品中的BET现场大批量检测。     

盐酸四环素人工抗原的合成及鉴定

本试验旨在合成盐酸四环素人工抗原,为其单克隆抗体的制备奠定试验基础。将盐酸四环素(TCH)发生霍夫曼降解和重氮化反应生成重氮盐,再与蛋白质载体(BSA,OVA)偶联生成免疫原和包被原,对偶联产物采用三氯化铁及紫外扫描法鉴定偶联成功,且免疫原和包被原的摩尔结合比分别约为3.4∶1和4.2∶1。用免疫原免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA检测抗体效价,采用竞争ELISA法测IC50,获得了效价为1∶51200I、C50为16.91 ng/mL的多克隆抗体,最终证明人工抗原制备成功。     

促卵泡素和促黄体生成素对儋州鸡生殖激素调控规律的研究

为研究促卵泡素（FSH）和促黄体生成素（LH）对儋州鸡体内其他生殖激素的调控规律,本试验通过改变FSH和LH在儋州鸡血液中的浓度,并采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）对处理前后儋州鸡血液中FSH、LH、催乳素（PRL）、孕酮（P）、雌二醇（E₂）的浓度进行测定。结果发现,注射外源性FSH和LH分别能提高儋州鸡血液中FSH和LH浓度;当儋州鸡血液中FSH或LH浓度显著升高时则均能引起PRL浓度显著降低（P < 0.05）,但当FSH和LH浓度同时显著升高时,PRL浓度显著升高（P < 0.05）;当儋州鸡血液中FSH浓度显著升高时,E₂及P浓度显著提升（P < 0.05）,且在高浓度LH的协同下提升幅度更大;当儋州鸡血液中LH浓度显著升高时E₂及P浓度升高但不显著（P > 0.05）。本研究结果表明,儋州鸡血液中FSH或LH浓度的提高均能降低PRL的浓度,并能不同程度的提升E₂及P的浓度,但FSH与LH浓度同时提高则能通过协同作用刺激E₂及P浓度的大幅提升,当E₂及P浓度过高时能通过刺激PRL的释放,负反馈调节血液中FSH与LH,并恢复血液中E₂及P浓度。     

Study on Regulation of Reproductive Hormones in Danzhou Chicken by FSH and LH

To investigate the regulation of reproductive hormones in Danzhou chicken by follicle-stimulating hormone (FSH) and luteotropic hormone (LH),the concentration of FSH and LH in Danzhou chicken blood were changed by different treatments and the concentration of FSH,LH, prolactin (PRL), progesterone (P), and estradiol (E₂) in the blood were determined using the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).The results showed that exogenous FSH and LH could improve the concentrations of FSH and LH,respectively. When one of FSH and LH increased alone,the concentration of PRL was significantly decreased (P < 0.05),while it was significantly increased when FSH and LH were both increased (P < 0.05).The high level of the FSH could result the significant increase of E₂ and P (P < 0.05),and it would expand the increasing effect in cooperation with the high concentration of LH. While the high level of the LH could elevate the concentration of E₂ and P,but effect was not significant (P > 0.05).In conclusion,the study suggested that the increase level of FSH or LH could reduce the concentration of PRL in Danzhou chicken,meanwhile,it could increase the concentration of E₂ and P in varying degrees. However,both of the FSH and LH increase in the blood could result the significant increase of E₂ and P as the synergy. When the concentration of E₂ and P were too high,it could stimulate the release of PRL which could adjust the concentration of FSH and LH,and rebalance the concentrations of E₂ and P in the blood.     

补饲醋酸甲羟孕酮基础上分别进行前列腺素、N-甲基-D-天冬氨酸和来曲唑处理对母羊血浆繁殖激素水平的影响

试验旨在研究醋酸甲羟孕酮（medroxyprogesterone acetate,MPA）与前列腺素（prostaglandin,PG）、N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA）和来曲唑（letrozole,LE）的不同配伍对母羊血浆繁殖相关激素水平的影响。选取3岁经产萨福克母羊39只,平均体重（75.51±11.55） kg,随机均分为3组,试验Ⅰ组饲喂基础日粮+34 mg/（d·只） MPA+1 mL/只PG,试验Ⅱ组饲喂基础日粮+34 mg/（d·只） MPA+600 mg/（d·只） NMDA,试验Ⅲ组饲喂基础日粮+34 mg/（d·只） MPA+14 mg/（d·只） LE,试验期18 d。结果发现,补饲MPA基础上进行PG处理,母羊血浆中FSH水平呈极显著升高（P<0.01）;补饲MPA基础上进行NMDA处理,母羊血浆中E2、MLT、FSH和LH水平均呈极显著升高（P<0.01）;补饲MPA基础上进行LE处理,母羊血浆中MLT、LH和T水平均呈极显著升高（P<0.01）。综合比较各生殖激素之间的关系及变化规律,在本试验条件下,建议MPA与NMDA和LE分别结合使用,可作为调控母羊繁殖性能的药品;且通过比较激素水平得出,MPA与NMDA组合效果最佳。     

Effects of Prostaglandin,N-methyl-D-aspartate and Letrozole on Ewes Plasma Levels of Reproductive Hormones were Evaluated on the Basis of Medroxyprogesterone Acetate Supplementation

This study was aimed to investigate the effects of the different compatibility of medroxyprogesterone acetate (MPA) with prostaglandin(PG), N-methyl-D-aspartate (NMDA) and letrozole (LE) on plasma related hormones levels of reproductive ewes. Thirty-nine and 3-year-old multiparity Suffolk ewes with average weight (75.51+11.55)kg were selected,and assigned into 3 groups,test group Ⅰ:Basis diet+34 mg/d MPA+1 mL/ewe PG, test group Ⅱ:Basis diet+34 mg/d MPA+600 mg/d NMDA, test group Ⅲ:Basis diet+34 mg/d MPA+ 14 mg/d LE, respectively, the trial period lasted for 18 days. The results showed as follows:On the basis of supplemental feeding MPA with PG treated,the levels of FSH in plasma of ewes were extremely significantly increased (P<0.01); Treated with NMDA, the levels of E₂, MLT,FSH and LH in plasma of ewes were extremely significantly increased (P<0.01), respectively;Treated with LE, the levels of MLT,LH and T in plasma of ewes were extremely significantly increased (P<0.01), respectively. This study suggested that MPA+NMDA and MPA+LE could be used as medicines for regulate and control oestrus of ewes, and the effect of MPA+NMDA was the best.     

2015年山东省肉鸡饲料原料中重金属污染情况调查及风险评估

本试验旨在调查2015年山东省肉鸡饲料原料中砷、铅、镉、铬和汞元素的污染情况,评估饲料原料的污染风险。试验收集烟台市莱阳、威海市文登、青岛市莱西、潍坊市诸城、日照市莒县、临沂市沂水、德州市夏津等地不同饲料生产厂家使用的8种饲料原料,包括玉米、豆粕、麸皮、花生粕、棉籽粕、玉米蛋白粉、干酒糟及其可溶物( DDGS)和微量元素预混料,应用电感耦合等离子体原子发射光谱法( ICP-AES)检测镉、铅和铬元素的含量,应用原子荧光光谱法( AFS)检测砷和汞元素的含量,计算检出率、平均含量、超标率、最高含量与平均含量比值( HC/AC)和离散系数。结果表明：饲料原料中砷、铅、镉、铬和汞元素的检出率分别为32.29%、7.29%、12.50%、100.00%和100.00%;阳性样品中平均含量分别为0.21、1.27、2.12、3.48和0.02 mg/kg,超标率分别为0.00、1.04%、1.19%、54.76%和9.52%;微量元素预混料中砷、铅和镉元素,棉籽粕中铬元素及花生粕中汞元素的HC/AC最大,微量元素预混料中镉元素、花生粕中汞元素、豆粕中砷元素及棉籽粕中铅和铬元素离散系数最大。综上所述,肉鸡饲料原料中铬和汞元素污染严重;微量元素预混料中砷、镉、铬和铅元素、棉籽粕中铬和铅元素、花生粕和豆粕中汞元素易出现严重污染,因此建议制定预混料和饼粕类饲料中多种重金属元素的限量标准。     

MDV对雏鸡血浆MDA含量与SOD活性的影响

为探讨丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)在雏鸡马立克病(MD)发病过程中的作用,研究了雏鸡在人工攻毒后血浆MDA含量与SOD活性的动态变化.结果表明,攻毒组接种马立克病病毒(MDV)后第14天,血浆中MDA的含量显著高于对照组(P＜0.05),第7天和第28天高于对照组,第56天时基本接近;血浆中SOD活性在第7天时对照组显著高于攻毒组(P＜0.05),第14天和第28天高于攻毒组,但差异不显著.表明雏鸡在感染MDV后血浆中MDA含量显著升高,SOD活性明显降低,对雏鸡MD的发病诊断有重要的指导作用.     

鬼臼多糖对免疫功能低下小鼠自由基产生酶活性的影响

采用环磷酰胺腹腔注射(50mg/kg)小鼠建立免疫抑制模型,观察鬼臼多糖(PEP)不同剂量(50,100,200mg/kg和400mg/kg)配合环磷酰胺应用后,对小鼠脾脏中黄嘌呤氧化酶(XOD)、髓过氧化物酶(MPO)及一氧化氮合成酶(NOS)水平的影响。结果表明,PEP能显著降低免疫抑制小鼠脾脏XOD、MPO的活性;对脾脏总NOS活性无显著影响,但400mg/kg多糖可降低小鼠脾脏诱导型NOS活性,提示PEP可通过降低免疫抑制小鼠体内自由基产生酶水平而起到抗氧化作用。     

牛、羊、人叠朊基因的克隆与分析

为了解我国哺乳动物叠朊基因Prnd的生物信息，本实验采用PCR方法克隆了秦川黄牛、甘肃土种绵羊和汉族人的Prnd，运用分子生物学软件对这些序列进行了分析比较。结果表明，获得的三种哺乳动物的Prnd均位于1个单一的外显子内，与GenBank登录的相应序列具有高度同源性。秦川黄牛与甘肃土种绵羊Prnd的同源性为96．8％，推导氨基酸序列同源性为93．3％。汉族人Prnd与秦川黄牛和甘肃土种绵羊Prod的同源性均为80％，推导的氨基酸序列同源性均为76．3％。氨基酸一级结构分析显示3种Prod编码的叠朊均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPI锚结合区组成。二级结构预测表明，3种Prod编码的叠朊均由3个α-螺旋和2个β-片层组成。本研究获得的这3种主要哺乳动物的Prnd信息为一进步研究叠朊的结构与功能奠定了基础。     

我国部分地区蛋鸡群ALV-J及与REV、MDV、CAV混合感染检测

为了解J亚群禽白血病病毒(ALV-J)及其与禽网状内皮细胞增生症病毒(REV)、马立克氏病病毒(MDV)和鸡传染性贫血病病毒(CAV)的混合感染现象,本研究从宁夏、湖北、广东、山东、辽宁、吉林、黑龙江7个省的39个蛋鸡群收集临床表现和剖检病理变化疑似禽白血病的病料样品184份,采用PCR、病毒分离和IFA检测样品中ALV-J、REV、MDV和CAV。结果表明,7个省蛋鸡场均存在ALV-J感染,病料样品阳性率为60.9%,检测鸡群阳性率为82.1%,与REV、MDV、CAV的混合感染率分别为13.6%、24.5%、22.8%,其中存在较为严重的双重感染(29.0%)和3重感染(18.8%),甚至4重感染(1.7%)。研究结果表明,我国蛋鸡群中普遍存在ALV-J感染,而且与REV、MDV、CAV混合感染严重;提示ALV-J已经可以引起蛋鸡群发病,在临床诊断和致病性研究中,应考虑到多重感染的影响。