间接Dot－ELISA检测猪细小病毒抗原的研究

本文成功地建立了间接斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）用于检测ＰＰＶ抗原对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为２．５ｎｇ／点。ＰＰＶ阳性猪血清的特异性阻断试验及交叉反应试验证明，该方法对ＰＰＶ抗原的检测具有特异性。以该方法检测ＰＰＶ人工感染兔样本和自然染猪样本，ＰＰＶ抗原的阳性检出率分别为肾样本１００％（１７／１７）、８１．８２％（９１／１１），肝样本１００％（１６／１６）、５６．５２％（１３／２３）。２０份随机样本的间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测结果与病毒分离和鉴定结果相符。     

银加强胶体金技术检测猪细小病毒的研究

本研究首次成功地建立了检测猪细小病毒（ＰＰＶ）抗原的银加强胶体金检测法（ＳＥＣＧＡ），并确定了操作流程中的最佳试验条件。应用该法对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为０．３１２５ｎｇ／点，其敏感性分别为间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＨＡ的８倍和１０００倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明ＳＥＣＧＡ具有较高的特异性。２０份样本ＳＥＣＧＡ的检测结果与病毒分离和鉴定结果完全相符。ＳＥＣＧＡ和间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对７７份样本检测的阳性率分别为８３．１％和８０．５％，其阳性符合率为９６．９％。研究结果表明本法具有经济、敏感性、特异性强等优点，可用于ＰＰＶ感染的特异诊断。为胶体金技术应用于畜禽传染病的诊断和研究奠定基础。     

斑点酶联免疫吸附试验检测小鹅瘟病毒的研究

应用斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）能检出少至４．８８３ｎｇ／ｍｌ的小鹅瘟抗原。与鸭瘟病毒（ＤＰＶ）、雏鸭病毒性肝炎病毒（ＤＶＨＶ）、猪细小病毒（ＰＰＶ）等对照，病毒不发生交叉反应。能从人工感染１２小时后的雏鹅组织中检出小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）。对１８只人工感染死的雏鹅的检同率为１００％，其中对不同组织的阳性检出率为：肝脏、肾脏、空肠为１００％，心脏、脾脏、十二指肠为９４．４％，回肠８８．９     

酶标SPA抑制染色法检测貉细小病毒的研究（Ⅱ）对样品的检测试验

应用酶标ＳＰＡ抑制染色法（ＰＰＡＩ）对ＲＰＶ及相关各种样品进行了检测，并与ＨＡ／ＨＩ进行了比较。本法检测已知阳性粪便样品的效价比ＨＡ高３倍，检测ＲＰＶ细胞培养物的效价比ＨＡ高５倍，能检出少至８０．８ｎｇ／ｍｌ的病毒抗原。应用ＰＰＡＩ、ＨＡ／ＨＩ对来自不同地区２５１份可疑粪样的检测结果表明：ＰＰＡＩ平均检出率为６９．７％，ＨＡ／ＨＩ平均检出率为４６．６％。ＰＰＡＩ比ＨＡ／ＨＩ高２３．１％，与ＨＡ／Ｈ     

牛结核病诊断新技术

皮试试验是诊断牛结核病的常规方法，但由于纯蛋白质衍化结核菌素（ＰＰＤ）多次使用，会明显影响牛结核病的诊断结果。为此，英国学者利用ＥＳＡＴ－６和ＭＰＢ７０两种特异性结核病抗原建立了全血ＩＦＮ—ｒ（ｒ干扰素）试验，并评价了其诊断效果。试验采集１８０头牛血样作皮试试验检测，其中１３１头被证实患有结核病，并且１２８头来自非结核牛群。对上述血清用两种抗原建立的ＩＦＮ－ｒ试验进行检测，结果两试验具有明显的阳性相关性（Ｐ＜０．００１）。与皮试试验比较，该方法的敏感性为７６．３％，特异性为９９．２％，而皮试试验…     

琼脂扩散试验检测雏鹅新型病毒性肠炎病毒及抗体的研究

本文报道１种检测雏鹅新型病毒性肠炎病毒及抗体的琼脂扩散试验。以１／１５Ｍ ｐＨ７．２ＰＢＳ配制的含０．８５％琼脂糖凝胶检测效果最好,对ＮＧＶＥＶ提纯抗原和兔抗ＮＧＶＥＶ的ＩｇＧ的最低检出量分别为０．１５ｍｇ／ｍｌ和０．０５ｍｇ／ｍｌ。１次加样和２次加样对ＮＧＶＥＶ感染死亡雏鹅的肠、肝脏、心、脾、肾、胰腺的阳性检出率分别为１００％、８０％、４０％、５０％、２０％、６０％和１００％、１００％、５６％、     

用重组基因产物PP^3^8作为抗原检测抗鸡马立克氏病毒抗体

用重组杆状病毒ＢＰ~（３８）Ⅱ染ｓｆ９细胞表达马立克氏病毒ＰＰ~（３８）基因产物，以此作为抗原建立了马立克氏病毒抗体的免疫荧光检测方法。实验结果表明，该抗原不仅能与Ⅰ型ＭＤＶ抗血清反应，而且还能与Ⅱ型Ｚ４和Ⅲ型ＨＶＴ毒株的抗血清反应；该方法对ＭＤＶ抗体检测的灵敏度是琼脂扩散法的１６０倍，对田间血清样本的阳性检出率该方法为８７．５％，而以琼脂扩散法检测同样的样本，阳性率仅为２０％。该方法简便快速，可用于疫苗免疫后抗体水平的检测和ＳＰＦ鸡场马立克氏病的监测。     

双抗体夹心ELISA检测牛病毒性腹泻病毒的研究

建立了从粪便中检测牛病毒性腹泻（ＢＶＤ）病毒抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ。试验方法的最佳工作条件为，抗体包被量为１００μｇ／孔，酶标抗体的浓度为１：４００。对不同地区牛、羊、鹿粪样检测结果，牛的ＢＶＤＶ感染率为１６．５％￣８９．０％，羊为１４．６％￣８３．３％，鹿为１９．６％￣４４．４％，并且从许多地区的牛、羊同时检测到ＢＶＤＶ，表明本病在国内某些地区存在着严重的感染。     

应用ELISA双抗体夹心法检测＼猪细小病毒抗原的研究

研究建立了从胎猪脏器中检测猪细小病毒（ＰＰＶ）抗原的ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法。试验方法的最侍工作条件为，抗体浓度１：４００，酶标抗体浓度１：５０。５４份胎猪样品阳性检出率为５９．３％，不同脏器的阳性检 出率分别为，心３６．４％、肝脏７２．２％、肺脏６６．７％、肾脏６６．７％。     

山羊关节炎－脑炎与其相关病的血清学关系

用琼脂扩散法检测，山羊关节炎－脑炎病毒（ＣＡＥＶ）抗原与马传染性贫血（ＥＩＡ）阳性血清不发生反应，ＥＩＡＶ抗原与ＣＡＥ阳性血清亦不发生反应．ＣＡＥＶ抗原与绵羊进行性肺炎（ＯＰＰ）阳性血清不发生反应．但ＯＰＰＶ抗原与ＣＡＥ阳性血清发生反应．     

单抗介导的斑点ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

用群特异性的单克隆抗体作第一抗体,用酶标兔抗体ＩＢＶＩｇＧ作第二抗体,建立夹心法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ程序检测鸡传染性支气管炎病毒抗原。试验表明,本程序检测ＩＢＶ抗原高度敏感性和特异性。最低抗原检出量为０．５μｇ,约１００个气管环半数感染量（１００ＴＯＣＩＤ５０）,阳性检出率为９６％。     

鸡传染性法氏囊病快速诊断方法的研究

本文报道了一种既可以检测ＩＢＤ囊毒抗原，又可以检测ＩＢＤ抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）双抗体夹心法。用本方法检测ＩＢＤ阳性法氏囊样品１２２份，结果检出阳性１２０份，符合率为９８．４％。检测阴性法氏羹样品８８份，均为阴性。本方法与琼脂扩散试验方法比较，共检测人工感染发病的病死鸡法氏囊９７份，结果琼脂扩散检出阳性法氏囊４９份（５０．５１％），阴性４８份（４９．４８％），而用本方法检测结果，全为阳性，检出阳性率为１００％，比ＡＧＰ法检出率高４９．４８％。检测高免蛋黄液的抗体。１６个样品（以２倍递增进行稀释），结果本方法比琼脂扩散试验高１～２个滴度。试验证明该方法特异、敏感，并且快速简便，试验在室温条件下进行，不需要任何仪器设备，用肉眼观察颜色的变化就可判断试验结果，试验反应时间仅需１０分钟左右。     

间接法Dot－ELISA检测传染性法氏囊病病毒的研究

本文应用间接法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ进行鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）抗原的检测，其最低检出量为０．４３μｇ／ｍｌ。对人工感染／自然病例的各组织脏器进行检测，结果法氏囊的ＩＢＤＶ检出率为１００％，脾脏的检出率为８０％／８４．９％，其它器官组织如肾、胸腺、心、肝、肺、盲肠扁桃体、胸肌等均含有一定量的病毒（１１～６０％）。经统计学分析，法氏囊与脾脏的病毒检出率之间具有显著性差异（人工感染差异极显著Ｐ＜０．０１，自然病例差异显著Ｐ＜０．０５），进一步证实法氏囊是ＩＢＤＶ最主要的靶器官。试验结果表明，该法检测ＩＢＤＶ抗原，敏感性高、特异性强、重复性好，并且经济、方便、快速，适于大批量样品检测，可作为一种诊断ＩＢＤ的比较理想的方法。     

用免疫组织化学染色法检测猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)抗原的研究

本试验用抗 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 单克隆抗体（ Ｓ Ｄ Ｏ Ｗ １７）建立了检测猪体内 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 抗原的免疫组化染色法,主要步骤：组织块在１００ ｍ Ｌ／ Ｌ中性缓冲液福尔马林中固定２４～４８ ｈ→常规脱水、石蜡包埋、切片４～５μｍ →二甲苯脱蜡→１００％ 酒精→１０ ｍ Ｌ／ Ｌ盐酸酒精 ３０ ｍ ｉｎ（消除内源性过氧化物酶）→９５％ 酒精→８５％ 酒精→７５％ 酒精→蒸馏水→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ→１０％ 马血清３７ ℃３０ ｍ ｉｎ 后转４ ℃过夜→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ３×５ ｍ ｉｎ→生物素化马抗鼠 Ｉｇ Ｇ（１∶２００） ３７ ℃ ６０ ｍ ｉｎ→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ３× ５ ｍ ｉｎ→辣根酶标记链亲和素（１∶２００）３７℃ ６０ ｍ ｉｎ→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ３×５ ｍ ｉｎ→新鲜配制的 Ｄ Ａ Ｂ室温下显色 ５～１５ ｍ ｉｎ→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ洗→常规脱水、透明、封片。经对８ 例试验感染 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 仔猪各种组织内 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 抗原的检测,本法具有简单、快速、特异性强,结果清晰、稳定及重复性好等特点,是检测组织内 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 抗原的一种好方法。     

胶体金快速诊断方法对鸡减蛋综合征病毒的检测

选择15nm的胶体金颗粒作为标记物，制备了鸡减蛋综合征病毒（EDSV）胶体金试纸条。该试纸条能检出浓度约为1．35μg／mL的纯化EDSV，用该试纸条检测135份临床样本，并与HA方法相比较，结果显示，二者的阳性符合率为89．8％。特异性试验结果显示，与鸡新城疫病毒（NDV）、鸡传染性腔上囊病病毒（IBDV）、鸡传染性支气管炎病毒（IBV）无交叉反应。表明，该试纸条用于检测EDSV具有快速、操作简便、特异性强等优点，可用于大批量抗原样本的检测。     

猪细小病毒病的研究 Ⅱ猪群细小病毒HI抗体的血清学调查

对河南省８个地市１０个猪场不同品种、年龄的２１０头母猪和６０头育肥猪进行了猪细小病毒（ＰＰＶ）血凝抑制（ＨＩ）抗体的检测．结果表明１００％的场ＰＰＶ抗体阳性，其中８０％的场阳性率为１００％，１０％的场阳性率为８４％，另１０％的场阳性率为５５％．４月龄以下的后备母猪和肥育猪抗体阳性率分别为８５％和９０％，其它成年猪的阳性率均为１００％．１０个场的总阳性率为９４．４％．ＨＩ抗体效价最低者为１：１０，最高者为１：５１２０。     

绵羊血清中阿维菌素的高效液相色谱法测定

本文报道了测定绵羊血清阿维菌素的高效液相色谱法。样本经免疫亲合色谱净化后直接用高效液相色谱进行测定（ＵＶ２４５ｎｍ）。在２～１００ｎｇ／ｍｌ添加浓度范围内，样本添加回收率为９０．９±４．８％，变异系数＝８．４±５．６％。样本检测极限为２ｎｇ／ｍｌ。     

应用Dot—ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

用差速离心结合琼脂糖凝胶层析纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）制备抗原免疫兔,获得高效价的多克隆免疫血清,提纯ＩｇＧ后用辣根过氧化物酶标记,建立了检测ＩＢＶ的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）方法。对影响本方法因素的研究表明,当酶标抗体作１：１００稀释、工作时间为３７℃、６０ｍｉｎ时结果最理想;对待检组织用氯仿处理、对硝酸纤维素膜用０．３％Ｈ２Ｏ２处理３０ｍｉｎ可有效地消除组织内过氧化物酶的影响。该方法具有较强的特异性和敏感性,对病毒的最低检出量为０．０１２４ｍｇ／ｍＬ。本法不仅可检测到纯化ＩＢＶ,而且可直接用于检测鸡胚尿囊液或病变组织（如气管、肾）中的病毒;对临床上疑似ＩＢＶ感染的病鸡的阳性检出率达７８．６％,而病毒分离率仅达６０％,两者符合率为９０％。试验结果表明,Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ可作为ＩＢＶ早期诊断的方法,具有简单、快速、样品用量少等优点。     

单抗捕捉ELISA检测AEV抗体方法的研究

本研究初步建立了检测ＡＥＶ抗体的单抗捕捉ＥＬＩＳＡ　方法。ＡＥＶ腹水单抗（腹水效价为１　∶１×１０６）最佳稀释度为１∶２００，ＡＥＶ抗原工作浓度为１６．０８　μｇ／ｍＬ，血清稀释度为１∶１　００，　兔抗鸡酶标抗体工作浓度为１∶５００。经阻断试验、交叉试验、重复试验，以及与进口试剂　盒　进行平行检测４０份血清，总符合率为９２．５％，表明该方法特异性强、重复性好、敏感性高，　是一种有应用前景的方法。     

首乌蜜精营养素分析研究

定量分析首乌蜜精所含的氨基酸、粗蛋白、还原糖、蔗糖，Ｖｃ、ＶＢ１、ＶＢ２、ＶＥ、ＶＤ、ＶＡ、灰份和矿物质。结果表明，首乌蜜精含有１６种氨基酸，其总含量为２９８．１９ｍｇ／１００ｍ１；粗蛋白含量为３６６．００ｍｇ／１００ｍ１；还原糖、蔗糖、灰份含量为５５．９７％、８．５９％、０．２２％；Ｖｃ、ＶＢ１ＶＢ２、ＶＥ、ＶＤ、ＶＡ含量（每１００ｍｌ）分别为０．０６ｍｇ、１７．４６ｍｇ、０．２１ｍｇ、２．３５ｍｇ、４１．０６μｇ、１８，６２μｇ；含有民民Ｚｎ、Ｃｏ、Ｆｅ、Ｍｎ、Ｍｇ、Ｎａ、Ａｌ、Ｃａ、Ｃｕ、Ｓｒ’Ｔｉ、Ｋ１４种矿物质，其总含量为１１４７．７５ｍｇ／Ｌ，不含对人体有害的矿物质。首乌蜜精所含的各种营养素是其多种食疗保健作用的物质基础。