猪瘟兔化弱毒疫苗——半个世纪的回顾

 猪瘟是一种严重危害养猪业的毁灭性传染病。20世纪50年代中国首创了举世闻名的猪瘟兔化弱毒疫苗（即C株），随后创制了不同的疫苗制造工艺，如细胞培养苗、乳兔组织苗和牛体反应组织苗等。C株是一株非常安全的弱毒疫苗，对各种年龄和品种的猪都没有副作用，并且有良好的免疫效力，它能同时诱导体液免疫和细胞免疫应答，对不同基因型的猪瘟病毒株均能提供有效的免疫保护。免疫母猪通过母乳可对仔猪提供被动免疫保护，但过高水平的母源抗体会影响仔猪对C株疫苗的主动免疫应答。目前已经完成了包括C株及其亲本株在内的几十株猪瘟病毒的全基因组序列测定和注释，建立了猪瘟病毒的反向遗传操作系统，初步解析了猪瘟病毒主要基因的结构与功能，并构建了不同的反向遗传操作标记疫苗，赋予了C株疫苗新的生命和内涵。C株疫苗可以用于猪瘟的控制和根除，借助于C株疫苗密集接种和综合控制措施，有关国家有效地控制了猪瘟，甚至消灭了猪瘟。尽管如此，要在全球范围内根除猪瘟，今后依然有漫长的路要走，这可能有赖于对C株进行进一步改造和利用。     

猪瘟兔化弱毒牛体反应疫苗简介

猪瘟是一种毁灭性传染病,遍及全世界,死亡率为80～90％。巴黎国际兽医局(OIE)的国际卫生法规,将猪瘟列入A类16种法定传染病之一. 50年代我国和世界其他国家均用猪瘟结晶紫 疫苗预防猪瘟,生产这种疫苗的原材料需用猪,利用率仅50～60％、每头猪(50kg)生产的疫苗仅能预防300头猪,生产周期要2.5个月,效力只有70％左     

马传贫弱毒继代细胞疫苗的研究——Ⅱ.马传贫弱毒LP继代细胞疫苗及其免疫效力的研究

将马传贫弱毒通过LP继代细胞传代研制成LP继代细胞疫苗,接种马匹,血清阳转率可达80％以上;用L系传贫血清强毒攻击,可保护75％以上;免疫持续期至少16个月。该苗10~(-4)1ml接种马,保护75％;10~(-5)1ml接种驴,保护50％。按1:1加入牛驴清制成的冻干疫苗,与湿苗一样对马有较好的免疫力。用异源传贫强毒(Wyoming株及云南株)攻击疫苗接种马,表现有交叉免疫性。疫苗现地区域试验的结果,与试验室结果一样,对马具有较好的安全性及免疫性。     

马传贫琼脂扩散无色透明冻干抗原的研究 Ⅱ.马传贫琼脂扩散试验方法的改进

用双扩散方阵滴定试验标定马传贫琼脂扩散无色抗原。凡能使原液至256倍系列稀释的阳性血清产生阳性反应者均为合格抗原。此法标定的无色透明合格抗原,经用法国马传贫琼脂扩散试验国际标准阴、阳性血清及古巴马传贫琼脂扩散抗原所标化的阳性参照血清进行考核试验,已证明达到国际标准。将双扩散方阵滴定试验与现行“规程”的辐射扩散法对抗原进行标定对比,证明后者效价标准高于国际标准,检出率低于前者。选用能与抗原原液及不同系列稀释倍数抗原产生阳性反应的16单位阳性血清为阳性参照血清。采用血清孔与抗原孔的孔径均为5mm、阳性参照血清孔与被检血清孔之比为“3:3”的新术式代替现行“规程”术式,可以提高检出率。     

马流感病毒的分离及其亚型的初步鉴定

1994年春我国西宁市附近暴发了马流感。本试验从现地典型发病又未经治疗的马采集了鼻甲、鼻分泌物、脾、咽、血液,用9～11日龄SPF鸡胚尿囊腔接种、传代,进行病毒分离。最后从脾和鼻甲粘膜分离到2株病毒,经血凝试验和电镜检查,证明是马流感病毒,经标准毒株和抗标准毒株亚型抗血清以及现地采集的耐过马血清交叉进行血凝抑制试验证明该病毒为A型流感病毒A2亚型,命名为A/马-2/西宁/94。     

马传贫驴白细胞弱毒疫苗株跨膜蛋白主要免疫决定区基因的克隆与表达

从感染驴白细胞的马传贫驴白细胞弱毒疫苗株前病毒DNA中克隆了编码跨膜蛋白主要免疫决定区(TMIR)的基因，并在大肠杆菌中进行了表达。所表达的融合蛋白有一部分是可溶的，其氨基端带有6个组氨酸的标签，因此可以用固定化金属离子亲和层析法在非变性条件下进行纯化。在间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹试验中，重组的TMIR蛋白可与马传贫阳性血清样品发生反应，而与健康马血清无任何反应。这表明该重组蛋白具有良好的抗原性和特异性，可用于马传贫弱毒疫苗株在体内外复制、接种马体内免疫应答及马传贫诊断的研究。     

一种简单、快速提纯腹水单克隆抗体(IgG)的方法

利用辛酸首先沉淀掉非 IgG 类蛋白,再用硫酸铵沉淀出 IgG.此法提纯的 IgG 纯度与 DEAE-32柱层析、Pro-tein A 亲和层析纯化的结果相似.抗体提纯前、后的效价不变,抗体收获量达90%以上。该法可广泛应用于鸡、猪、绵羊血清 lgG 的纯化,适用于从大批量样品中提纯lgG.     

马传贫病毒ELISA抗原有效成份分析及免疫学活性测定的研究

对21批马传贫病毒ELISA抗原样品,以SDS-PAGE进行组分分析及分子量测定表明,虽抗原批次不同,组分数亦不完全相同,但分子量范围却均在13600～110500道尔顿之间。通过酶联免疫电传移印渍技术(EITB)确定抗原的有效成份证明,有免疫学活性的蛋白主要是28600道尔顿组分,其次是13600道尔顿的组分。而马传贫病毒ELISA抗原免疫学活性与28600道尔顿组分的相对百分含量显著相关(P<0.01)。用特异的糖蛋白染色技术分析糖蛋白的组分表明,分子量为78000～8100及57000～5900道尔顿的两个组分呈阳性反应,但在EITB中没有表现出明显的免疫学活性。     

猪戊型肝炎病毒ORF2片段克隆及原核表达

设计套式引物，内套引物含有BamHⅠ／XhoⅡ酶切位点，采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒（UEV）结构蛋白基因ORF2部分片段，长度为634bp，将其克隆于PGEX-T载体，测序结果表明插入的片段属于戊型肝炎病毒ORF2部分，将该片段插入PproEXHTb表达载体，经酶切鉴定证实获得了重组表达质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL21，经1mmol／L IPTG诱导，得到表达，表达蛋白分子量为27Ku，以包涵体形式存在。Western blot分析表明，该蛋白可以与猪戊型肝炎阳性血清反应，表明该蛋白具有良好的反应原性。     

猪群HEV血清抗体调查及一株新的猪HEV ORF2部分基因序列分析

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)主要引起人的戊型肝炎,新近研究发现猪在病毒传播中可能发挥重要作用.本研究对我国部分省区HEV感染血清学调查,在被检的1 138份血清中,有666份(57.5%)为HEV抗体阳性,猪群抗体阳性率随着月龄增长而升高.通过RT-PCR方法从一份猪粪中扩增并克隆了HEVORF2 N端主要抗原决定区339bp基因片段,序列分析显示,该段基因与我国人群HEV基因4型毒株核苷酸序列同源性为85.9%,但氨基酸序列完全一致.这一结果提示我国猪群存在广泛的HEV感染,并在一定程度上与人群HEV毒株密切相关.