鸭瘟病毒UL51基因在感染宿主细胞中的定位和转录特征

对鸭瘟病毒(DPV)UL51基因在感染宿主细胞内的定位和转录时相进行分析,为进一步研究该基因的特性和功能提供有用的试验数据和材料。构建pET32a-UL51原核表达载体,将其转化至E.coliBL21(DE3)中进行IPTG诱导表达后,用Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱层析法纯化该表达产物。以纯化的重组蛋白为抗原免疫兔子,制备兔抗UL51多克隆抗血清,通过间接免疫荧光和RT-PCR法检测该基因在DPV感染的鸭胚成纤维细胞(DEF)内的定位和转录情况。间接免疫荧光结果显示,最早可在感染后8h的胞浆中检测到特异性荧光点,24～36h有大量绿色荧光团块聚集于近核区域,之后随着细胞病变的增强,胞浆中的绿色荧光开始减弱,且在感染晚期的胞核中也出现了少量弥散的绿色荧光。RT-PCR结果显示,DPVU L51基因从感染后4h开始转录,其后转录量不断增大,从6～48h一直保持在较高水平,之后又降低。DPVU L51蛋白主要定位于感染的宿主细胞的胞浆中特别是近核区域,与其在α-疱疹病毒中的同源物的定位结果一致;并且与其他几种α-疱疹病毒的转录情况对比后,可认为该基因是一个晚期(γ类)基因。     

大豆异黄酮对去卵巢大鼠脾脏NGF、IL 2蛋白表达的影响

为了探讨大豆异黄酮（SI）对去卵巢大鼠脾脏中神经生长因子（NGF）、白细胞介素2（IL-2）蛋白表达的影响,本研究在成功建立去卵巢大鼠模型的基础上,对去卵巢大鼠分别隔天皮下注射高（1.5 mg·kg-1）、中（1.0 mg·kg-1）、低（0.5 mg·kg-1 ）剂量的SI,假手术组（仅手术而不去卵巢）和溶媒组（去卵巢）大鼠隔天皮下注射溶媒剂（乙醇）。补充SI至14 d和42 d时,每组随机剖杀5只大鼠,采用免疫组织化学方法,对大鼠脾脏NGF、IL-2蛋白的表达变化进行研究。结果表明,脾脏中广泛分布着NGF、IL-2蛋白,主要分布于被膜下方的红髓区,在白髓分布量极少。去卵巢后,大鼠脾脏中NGF、IL-2蛋白的表达强度和阳性细胞数目均显著下降,而且随着去除卵巢时间的延长下降加剧。体外补充SI后14 d,各剂量组和42 d低、中剂量组仅有部分恢复,变化不显著;补充高剂量SI 42 d后,脾脏NGF、IL-2蛋白的表达强度和阳性细胞数目基本恢复至假手术组的水平。大豆异黄酮能上调NGF、IL-2蛋白在脾脏内的表达,并呈现时间和剂量的依赖性。     

用黄曲霉毒素B1单抗介导免疫组化法检测雏鸭感染黄曲霉毒素的分布规律研究

【目的】（1）建立单抗介导的、能够对黄曲霉毒素AFB1进行亚细胞定位的免疫组化方法;（2）探明AFB1侵染和分布于雏鸭靶器官（细胞）规律,为阐明AFB1对雏鸭的致病机理提供基础实验数据,为AFB1感染人类提供研究模型。【方法】（1）利用AFB1单抗、免疫组化理论和方法,结合石蜡切片技术,建立检测感染雏鸭组织器官和细胞中AFB1方法;（2）7日龄樱桃谷鸭饲喂黄曲霉毒素（AFB1）含量为150 µg•kg-1的全价饲料,分别于6、12、24、48、72、96、120、144、168和192 h各剖杀2只,取心、肝、脾、肺、肾、脑、十二指肠、法氏囊、胸腺和胰腺等组织器官多聚甲醛固定、石蜡包埋,应用建立的单抗介导免疫组化对AFB1在感染雏鸭体内侵染的组织器官和细胞进行定位检测。【结果】（1）建立的单抗介导的免疫组化能够特异性检测到感染雏鸭组织中的AFB1,而对鸭病毒性肝炎病毒、鸭疫里默氏杆菌、鸭多杀性巴氏杆菌、鸭沙门氏菌和鸭大肠杆菌感染鸭组织呈现阴性反应;（2）雏鸭采食含AFB1饲料后,24 h可在肝脏和肾脏中检测到AFB1,随后在脾脏（48 h）、胰腺（96 h）、十二指肠（120 h）、心肌（144 h）及法氏囊（168 h）检测到AFB1,其中肝脏和肾脏的阳性结果最强;AFB1分布于肝脏肝窦及汇管区周围炎性反应带的肝细胞,肾脏肾小管、集合管上皮细胞以及肾小球毛细血管,脾脏白髓及炎性细胞,胰腺腺上皮细胞,十二指肠脱落的黏膜上皮细胞,心脏血管周围和心脏发生空泡变性的心肌纤维中;AFB1主要集中分布于细胞核内,而细胞膜和细胞浆内也有少量的分布。【结论】（1）单抗介导免疫组化能够特异检测AFB1感染雏鸭组织石蜡切片中的AFB1和亚细胞定位, 还可用于AFB1感染雏鸭的实验室诊断和甲醛固定组织的回顾性诊断;（2）AFB1可广泛侵害感染雏鸭各个组织器官,以肝脏和肾脏最为严重。AFB1主要蓄积于被感染的细胞核。     

疱疹病毒UL34基因及其编码蛋白的研究进展

论述了疱疹病毒UL34基因的序列特点、编码蛋白结构特点、基本功能以及它与UL31蛋白、Us3蛋白、动力蛋白、核纤层蛋白的相互作用。表明，UL34基因对病毒的早期包装、成熟和出芽以及对UL31蛋白和核纤层蛋白在感染细胞中的正确定位都具有重要作用。     

鸭肿头出血症病毒强毒的致病性及感染组织细胞的超微病理变化

将鸭肿头出血症病毒（DSHDV）强毒株以不同途径接种10日龄鸭胚，研究了病毒在鸭胚中的繁殖规律，并用透射电镜观察了感染鸭胚各组织器官的超微结构变化，同时用DSHDV人工感染不同日龄雏鸭，比较了不同感染途径对雏鸭的致病性和对不同日龄雏鸭的致病性。结果显示，尿囊腔和卵黄囊2种途径均能使病毒在鸭胚上繁殖并传代，对鸭胚的半数致死量分别为10^-7.24／0．2mL和10^-6.4／0．2mL。病毒感染鸭胚后，电镜下可观察到肝和尿囊膜中的病毒粒子，病毒粒子呈球形或椭圆形，大小为60～80nm，无囊膜；病毒在细胞浆内复制，可形成特征性包涵体；病毒侵害的主要靶器官为尿囊膜与肝，细胞器的变化主要表现为粗面内质网扩张以及线粒体肿胀和嵴断裂、消失。病毒经肌肉注射、口服和滴鼻均能使28日龄鸭感染发病，致死率分别为86％、89％和97％。研究表明，DSHDV能很好地在鸭胚上生长并致鸭胚各组织器官超微结构发生变化，不同感染途径均能使雏鸭感染发病且致病性强。     

一种新发现的雏鹅传染病研究

１９９３年以来，四川省一些地区的３－３０日龄雏鹅发生一种传染病，死亡高峰期１０－１８日龄，发病率３０％－１００％，死亡率２５％－７５％有时可高达１００％，其临床症状和病理变化与小鹅曾有很多相似之处。利用原代鸭胚成纤维细胞培养及蚀斑克隆技术从不同地区分离到１０株病毒，分离病毒呈球形成椭圆形，无囊膜，直径７０－９０ｍｍ，不凝集鸡，鸭，鹅，鸽，黄牛，水牛及猪的红细胞，对氟仿不敏感，５６℃作用３－５ｈ不影     

鸭乙型肝炎病毒PCR检测方法的建立及初步应用

鸭乙型肝炎病毒(Duck hepatitis B v irus,DHBV)是禽嗜肝DNA病毒科禽嗜肝DNA病毒属(A v ihepadnav irus)的代表种,其形态结构、核酸组成、生物学特性、发病机理和相对嗜肝性等与乙型肝炎病毒(hepatitis B v irus,HBV)很相似,感染鸭后也可引起急、慢性肝炎及肝硬化等[1,2]。由于     

种鸭大肠杆茵性生殖器官病的研究——6.氢氧化铝甲醛灭活菌苗免疫原性的研究

本文对大肠杆菌灭活菌苗的免疫原性、免疫鸭的外周血液免疫动态及卵黄凝集抗体的测定进行了研究。结果表明,菌苗对小白鼠、可疑感染鸭和健康鸭具有良好免疫原性,鸭的免疫期达4—5个月,可提高种鸭产蛋率和种蛋孵化率。鸭只免疫后45天平均凝集抗体滴度达270.4和313.6,免疫后5个月仍有62.5％鸭只的凝集抗体滴度≥40。免疫鸭血清r-球蛋白含量显著(P<0.05)或极显著(P<0.01),高于非免疫鸭。