传染性法氏囊病病毒抗体检测诊断试剂盒的研制与应用

本文用提纯的ＩＢＤＶ细胞毒为抗原,抗鸡Ｉｇ单抗１Ｂ７ＨＲＰ酶结合物为第二抗体建立了检测ＩＢＤＶ抗体的间接ＥＬＩＳＡ。在此基础上研制出ＩＢＤＶ抗体检测诊断试剂盒。经对１２００份血清进行检测,结果表明：本试剂盒特异性强,灵敏度高,重复性好,快速稳定,易于操作,为雏鸡ＩＢＤＶ母原抗体和疫苗注射后特异性抗体检测提供了可靠的诊断工具。     

传染性法氏囊病病毒抗体检测诊断试剂盒的研制与应用

本文用提纯的ＩＢＤＶ细胞毒为抗原,抗鸡Ｉｇ单抗１Ｂ７－ＨＲＰ酶结合物为第二抗体建立了检测ＩＢＤＶ抗体的间接ＥＬＩＳＡ,在此基础研制出ＩＢＤＶ抗体检测诊断剂盒,经过１２００份血清进行检测,结果表明,本试剂盒特异性强,灵敏度高,重复性好,快速稳定,易于操作,为雏鸡ＩＢＤＶ母原抗体和疫苗注射后特异性本检测提供了可靠的诊断工具。     

斑点免疫金银染色法检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的研究

用建立的斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１：４００,ＳＰＡ－胶体金探针的工作浓度为１：８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点,用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管,肺,肾病科,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％,对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,Ｉ     

应用双抗体夹心法ELISA检测IBDV的研究

从抗ＩＢＤＶ高免蛋黄液中提取ＩｇＧ，用作包被抗体和酶标记，建立了检测ＩＢＤＶ的双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ。经抗原阻断，无关病毒对照、取代、验证等项试验，并与常规ＡＧＰ法比较，对来源不同的１００多个样品进行检测，结果表明：该法对患鸡腔上囊、脾脏的检出率均为１００％，比ＡＧＰ法敏感１００倍以上，用肉眼观察阳性与阴性之间颜色差异显著，不存在非特异性反应。试验证明该法具有满意的待异性、敏感性、快速性和稳定性，是ＩＢＤ早期病原学诊断和流行病学调查的有效手段。     

用对流免疫电泳试验检测鸡传染性法氏囊病血清抗体

利用自制传染性法氏囊病抗原,采用对流免疫电泳试验检测鸡ＩＢＤＶ抗体。结果表明,该方法能在３０－６０ｍｉｎ内使阳性血清和抗原之间出现明显的沉淀反应,且能被特异性抗原阻断;用ＮＤＶ,ＩＢＶ和ＥＤＳ７６Ｖ等血清代替ＩＢＤＶ血清无交叉反应,对同一批样品进行两次检测,结果具有良好的重复性,同琼脂免疫扩散方法比较,ＣＩＥ法需时短,敏感性高。     

应用ELISA双抗体夹心法检测传染性法氏囊病免疫器官病毒抗原分布动态

利用ＩＢＤＶ高免血清ＩｇＧ作为包被抗体，成功地建立了双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ，对人工感染雏鸡免疫器官抗原动态分布进行了检测。结果表明，不同毒株感染雏鸡免疫器官病毒抗原含量不一致，持续时间也有差异。采用本方法共检测ＩＢＤ阳性样品２７５份，检出率为１００％，检测对照阴性样品２５份，结果均为阴性，比ＡＧＰ法检出率高４０％左右，灵敏度高１００～２００倍。试验证明双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ可用于组织抗原分布的检测，并且该方法具有特异性、高度敏感性，稳定性、快速性等优点，是一种实用的组织病毒检测方法。     

应用Dot—ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

用差速离心结合琼脂糖凝胶层析纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）制备抗原免疫兔,获得高效价的多克隆免疫血清,提纯ＩｇＧ后用辣根过氧化物酶标记,建立了检测ＩＢＶ的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）方法。对影响本方法因素的研究表明,当酶标抗体作１：１００稀释、工作时间为３７℃、６０ｍｉｎ时结果最理想;对待检组织用氯仿处理、对硝酸纤维素膜用０．３％Ｈ２Ｏ２处理３０ｍｉｎ可有效地消除组织内过氧化物酶的影响。该方法具有较强的特异性和敏感性,对病毒的最低检出量为０．０１２４ｍｇ／ｍＬ。本法不仅可检测到纯化ＩＢＶ,而且可直接用于检测鸡胚尿囊液或病变组织（如气管、肾）中的病毒;对临床上疑似ＩＢＶ感染的病鸡的阳性检出率达７８．６％,而病毒分离率仅达６０％,两者符合率为９０％。试验结果表明,Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ可作为ＩＢＶ早期诊断的方法,具有简单、快速、样品用量少等优点。     

鸡传染性法氏囊病ELISA快速诊断盒的研制及应用

用ＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ快速诊断盒对ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒及ＩＢＤ阳性出血清，ＩＢＤＶ阴性法氏囊及ＩＢＤ阴性血清和ＩＢ，ＩＬＴ，ＥＳＤ－７６，ＲＥＯ，ＮＤ，ＭＤ等６种鸡传染病的抗原及阳性血清检测，只有ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒及阳性血清呈阳性反应，证明快速诊断盒对ＩＢＤＶ法氏囊囊毒抗原及其抗体的检测是特异的，与其它６种传染病的抗原和抗体无效叉反应。与ＡＧＰ对比试验结果表明，检测ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒时，快     

胶乳凝集试验在鸡传染性法氏囊病诊断中的应用

应用鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体致敏的聚苯乙稀胶乳，建立了检测ＩＢＤＶ抗原和抗体的胶乳凝集和胶乳凝集抑制试验。ＬＰＡ可检测出６ｍｇ／Ｌ的ＩＢＤＶ蛋白。比较了ＬＰＡ，直接萤光抗体试验和琼脂扩散沉淀试验三种方法检测ＩＢＤＶ抗原的特异性，敏感性和相关性，明确了ＬＰＡ和ＤＦＡ的检出率高于ＡＧＰ，ＬＰＡ和ＤＦＡ检测结果的符合率为８６％。     

应用ELISA双抗体夹心法检测传染性法氏囊病免疫器官病毒抗原…

利用ＩＢＤＶ高免血清ＩｇＧ作为包被抗体，成功地建立了双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ，对人工感染雏鸡免疫器官抗原动态分布进行了检测。结果表明，不同毒株感染雏鸡免疫器官病毒抗原含量不一致，持续时间也有差异。采用本方法共检测ＩＢＤ阳性样品２７５份，检出率为１００％，检测对照阴性样品２５份，结果均为阴性，比ＡＧＰ法检测率高４０％左右，灵敏度高１００￣２００倍。试验证明双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ可用于组织抗原分布的检测     

气管环组织培养中和试验及间接血凝试验检测鸡传染性支气管炎病毒…

本试验利用气管环组织培养中和试验和间接血凝试验检测鸡清中传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗体，同此确定７株ＩＢＶ之间的抗原交叉范围，从而比较两种检测方法之间的相关性，结果表明，在间接血凝血试验中７株ＩＢＶ之间的抗原相关性Ｒ值介于３．１３～１００之间，而气管环组织培养中和试验Ｒ值介于０．７８～１００之间，中和试验Ｒ值变化范围较血凝试验宽得多，两种检测方法相关关系Ｒ可达０．８５３。     

鸡新城疫,减蛋综合症,传染性支气管炎三联油佐剂灭活苗的研究：I…

分别用三个滴度的ＮＤＶ、ＥＤＳ７６Ｖ、ＩＢＶ作正交配比，制成八组不同配比的三联油佐剂灭活苗，鸡免疫后每月采血分离血清，应用ＨＩ监测其抗体，结果表明，三种病毒适当配比，不产生干扰，疫苗的免疫效果与抗原量有关。本疫苗与Ｉｎｔｃｒｖｃｔ公司生产的ＮＤ－ＩＢ－ＩＢＤ三联油佐剂灭活苗作比较试验，免疫鸡所产生的ＮＤ、ＩＢ抗体无显著性差异。应用含抗原量最低配比的疫苗，对不明原因的有产蛋率下降疫病感染史的鸡群作免     

鸡新城疫、减蛋综合症、传染性支气管炎三联油佐剂灭活苗的研究Ⅱ、不同单位病毒配比的三联苗对鸡免疫抗体产生的影响

分别用三个滴度的ＮＤＶ、ＥＤＳ_７６Ｖ、ＩＢＶ作正交配比，制成八组不同配比的三联油佐剂灭活苗，鸡免疫后每月采血分离血清，应用ＨＩ监测其抗体，结果表明，三种病毒适当配比，不产生干扰，疫苗的免疫效果与抗原量有关。本疫苗与Ｉｎｔeｒｖｃｔ公司生产的ＮＤ－ＩＢ－ＩＢＤ三联油佐剂灭活苗作比较试验，免疫鸡所产生的ＮＤ、ＩＢ抗体无显著性差异。应用含抗原量最低口比的疫苗，对不明原因的有产蛋率下降疫病感染史的鸡群作免疫接种，冬季该场蛋鸡群普遍发生产蛋率明显下降的疫病，用本苗免疫的鸡群产蛋享未受影响。     

胶乳凝集试验在鸡传染性法氏囊病诊断中的应用（摘要）

本文应用鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体（ＩＢＤＶ—ＭｃＡｂ）致敏的聚苯乙烯胶乳，建立了检测ＩＢＤＶ抗原和抗体的胶乳凝集（ＬＰＡ）和胶乳凝集抑制（ＬＰＡＩ）试验。ＬＰＡ可检测出６μｇ／ｍｌＩＢＤＶ蛋白。作者比较了ＬＰＡ、直接荧光抗体试验（ＤＦＡ）和琼脂扩散沉淀试验（ＡＧＰ）三种方法检测ＩＢＤＶ抗原的特异性、敏感性和相关性，明确了ＬＰＡ和ＤＦＡ试验的检出率高于ＡＧＰ。ＬＰＡ和ＤＦＡ试验结果的符合率为８６％。     

用间接荧光抗体试验检测鸡肾型传染性支气管炎抗原的研究

建立检测鸡肾型传染性支气管炎抗原的间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）其抗体感染作时间Ｉ抗以５０～６０ｍｉｎ，Ⅱ抗以３０～４０ｍｉｎ最佳。该法具有良好的特异性，可检测出人工感染鸡肾型传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ａｕｓｔ－Ｔ，ＨＮ９３０１，ＴＪ９３０１，ＢＪ９３０１毒株后的抗原；对自然发病病例检测结果，阳性符合率高于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和气管环中和试验法。     

抗传染性以气管炎病毒单克隆抗体的研究

经密度梯度离心法提纯鸡胚尿囊液中的传染性支气管炎病毒Ｈ１２０，获得了较纯的Ｈ１２０抗原。动用细胞杂交瘤技术，区获得了２３株阳性杂交瘤细胞株。对２３株阳性杂交瘤细胞株进行特异性鉴定，其中３株稳定白，命名Ｍｃ。用单抗介导的间接免疫荧光抗体技术检测鸡鸡胚尿囊细胞中ＩＢＶ的方法测定Ｍｃ的ＩＢＶ的反应谱，证明Ｍｃ反应谱较广，是１株ＩＢＶ群特异性单克隆抗体。     

禽流感抗体斑点—ELISA诊断技术的研究

以混合纤维素酯微孔滤膜为固相载体,用自制的禽流感全病毒抗原和酶标抗体,建立了禽流感抗体斑点 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测法,其抗原最适包被量为 ０．０６μｇ／点;血清抗体最佳稀释度为 １１００;酶标抗体作 １２００ 稀释;出现明显清晰的斑点者判为禽流感抗体阳性。该方法对 Ｓ Ｐ Ｆ鸡血清及新城疫、传染性法氏囊病等其它 １１ 种鸡疫病阳性血清均为阴性,对不同亚型特异性的禽流感病毒（ Ａ Ｉ Ｖ）分型血清、琼扩（ Ａ Ｇ Ｐ）阳性血清及血凝抑制（ Ｈ Ｉ）阳性而 Ａ Ｇ Ｐ疑似的血清样品均呈阳性;对人工接种 Ａ Ｉ Ｖ 的 Ｓ Ｐ Ｆ鸡第 ３ 天即能检出抗体阳性,第 ５～１１７ 天可全部检出。与间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法比较,不仅其特异性、敏感性、重复性相一致,而且结果可用肉眼判定,更适合现地禽流感抗体监测及流行病学调查。     

应用单克隆抗体探针检测IBDV病毒抗原

应用单克隆抗体２Ｅ６和２Ｇ１０对传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）Ｐ３００９株作免疫斑点试验，检测细胞培养物法氏囊组织和脾组织中的ＩＢＤＶ抗原。这两株单克隆抗体探针测定病毒抗原的界限为４８ｎｇ。应用这两株探针检测出５株血清Ⅰ型和１株血清Ⅱ型的病毒，结果显示具有显著的特异性。这两种探针与来自７株其他非相关禽病病毒抗原不发生交叉反应。探针检测ＩＢＤＶ抗原，在接种后两天即可从小鸡囊和脾脏组织中检测到。用这两     

同胚增殖鸡新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的效果观察及免疫应答反应

鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）和鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）混合在同一鸡胚中增殖,当ＮＤＶ和ＩＢＶ接种浓度控制在一定范围时,最佳收毒时间选择使ＮＤＶ有足够时间增殖到最佳滴度,且在这一时间内不至于因孵育时间过长而致ＩＢＶ毒力减弱。结果表明ＮＤＶＬａｓｏｔａ株经１０倍稀释分别与４株ＩＢＶ１０００倍稀释液等体积混合后接种,能在同一鸡胚中正常增殖,即９６ｈ收毒,血凝（ＨＡ）方法测定两种病毒的血凝价均能达到最佳滴度,其血凝价不低于各自单独增殖的滴度。４种ＩＢＶ株与ＮＤＶ同胚增殖的ＨＡ滴度进一步证实,在合适的条件下,ＩＢＶ均不对ＮＤＶ的复制产生干扰作用,４种ＩＢＶ的血凝价无明显差异。免疫试验中用同胚增殖两种病毒二联苗接种,鸡体血清中可产生抗两种病毒的ＨＩ抗体,与各自单独接种时的ＨＩ抗体水平几乎一致。本试验中制备的ＩＢ血凝抗原在４℃保存一个月,其血凝活性保持不变。ＩＢＶ微量血凝抑制（ＨＩ）试验特异性测定结果证实,用自制ＩＢＶ血凝抗原进行ＨＩ试验检测鸡ＩＢ阳性血清均能产生稳定的特异性反应,并且无交叉反应。说明ＨＩ试验是检测ＩＢＶ抗体水平的有效可行的方法。     

兔源抗IBDV独特型抗体疫苗的制备

用纯化的抗鸡传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）抗体免疫家兔，将所获效从较高（１：１６）的兔源抗ＩＢＤＶ独特型抗体分别与福氏完全和福氏不完全佐剂按１：１比例乳化制备成抗ＩＢＤＶ独特型抗体疫苗，用该疫轩免疫迪卡公雏鸡和ＳＰＦ组鸡，经用ＩＢＤＶ强毒株以点眼和滴鼻方式攻击，试验组的保护率分别为９８／９８，１００／１００，４９／４９，大群免疫接种的应答率为１００％。