胶乳凝集试验在鸡传染性法氏囊病诊断中的应用

应用鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体致敏的聚苯乙稀胶乳，建立了检测ＩＢＤＶ抗原和抗体的胶乳凝集和胶乳凝集抑制试验。ＬＰＡ可检测出６ｍｇ／Ｌ的ＩＢＤＶ蛋白。比较了ＬＰＡ，直接萤光抗体试验和琼脂扩散沉淀试验三种方法检测ＩＢＤＶ抗原的特异性，敏感性和相关性，明确了ＬＰＡ和ＤＦＡ的检出率高于ＡＧＰ，ＬＰＡ和ＤＦＡ检测结果的符合率为８６％。     

雏番鸭细小病毒病诊断技术和试剂的研究

根据番鸭细小病毒单克隆抗体（ＭＰＶ－ＭｃＡｂ）致敏的胶乳可与ＭＰＶ产生特异性凝集反应，而这种特异性凝集反应可被ＭＰＶ抗体所抑制的原理，建立了胶乳凝集试验（ＬＰＡ）和胶乳凝集抑制试验（ＬＰＡＩ）。致敏抗体蛋白浓度为０．５ｇ／Ｌ时，ＬＰＡ可检测出ＭＰＶ最小蛋白量为２μｇ／Ｌ。对ＬＰＡ与ＦＡ、ＬＰＡＩ与ＡＧＰ作了比较，结果：ＬＰＡ阳性率９０．５％，ＦＡ阳性率９２．４％，两者的符合率９２．４％；鸭血清ＬＰＡＩ抗体效价在Ｌｏｇ２５以下时，ＡＧＰ试验均阴性，前者比后者敏感性高３２～６４倍。ＬＰＡＩ抗体效价与保护力相关性试验结果表明，当鸭血清中ＬＰＡＩ抗体效价在Ｌｏｇ２１以上时，雏番鸭均能耐受强毒的攻击，两者呈正相关。致敏胶乳和抗原保存时间在４～８℃时，分别为５个月和６个月；在２２～２８℃时，分别为７ｄ和１５ｄ。     

应用间接免疫荧光法检测禽网状内皮组织增生病病毒抗体的研究

用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原，建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１：６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１：３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测，接种后４天时均呈阴性反应，７天时８只鸡呈阳性反应，１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原Ⅰ型特异性和群共同性决定簇的单克隆抗体

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体。以Ⅰ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的２株单克隆抗体细胞株，定名为ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ＭＤＶ均呈阳性反应；单抗ＢＡ４只对Ⅰ型ＭＤＶ（包括ＣＶＩ９８８疫苗株）呈阳性反应。免疫沉淀反应进一步确证２株单抗识别的是ＭＤＶ糖蛋白Ｂ抗原。     

应用间接免疫荧光法检测禽网状内皮组织增生病病毒抗体的研究

用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原,建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１∶６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１∶３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测,接种后４天时均呈阴性反应,７天时８只鸡呈阳性反应,１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、ＡＩＶ等标准阳性血清的交叉试验,证明该方法特异性强。应用该ＩＦＡ方法对我国辽宁、山东、黑龙江省部分鸡群进行ＲＥＶ抗体检测,证明该方法特异性强、敏感性高,适于在生产中推广应用。     

用抗传染性氏囊病毒单克隆抗体建立夹心阻断ELISA检测鸡血清抗体及 …

用酶标记抗传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体，建立夹心阻断ＥＬＩＳＡ，检测ＩＢＤＶ鸡血清抗体。用Ｄ７８细胞毒免疫２４日龄的雏鸡，每周采血一次，共４次，用夹心阻断ＥＬＩＳＡ、微量细胞中和试验（ＶＮ）、琼脂扩散试验（ＮＧＰ）检测鸡血清抗体，结果表明：夹心阻断ＥＬＩＳＡ同ＶＮ之间具有较高的相关性（ｒ＝０．８１２６），与ＡＧＰ的相关性较低（ｒ＝０Ｘ．７５７５）。     

鸡传染性法氏囊病ELISA快速诊断盒的研制及应用

用ＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ快速诊断盒对ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒及ＩＢＤ阳性出血清，ＩＢＤＶ阴性法氏囊及ＩＢＤ阴性血清和ＩＢ，ＩＬＴ，ＥＳＤ－７６，ＲＥＯ，ＮＤ，ＭＤ等６种鸡传染病的抗原及阳性血清检测，只有ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒及阳性血清呈阳性反应，证明快速诊断盒对ＩＢＤＶ法氏囊囊毒抗原及其抗体的检测是特异的，与其它６种传染病的抗原和抗体无效叉反应。与ＡＧＰ对比试验结果表明，检测ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒时，快     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原I型特异性和群共同性决定簇的…

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体，以Ｉ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的１株单克隆抗体细胞株，定义名ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ｉ，ⅡⅢ型ＭＤＶ均呈阳     

抗IBDV独特型抗体疫苗的制备与应用

应用提取纯化的抗ＩＢＤＶＩｇＧ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／０细胞在ＰＥＧ作用下融合，应用ＥＬＩＳＡ法检测筛选，经有限稀释法克隆２次，获得２株（２Ｂ６株，５Ｆ４株）分泌抗ＩＢＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞株，其能诱生ＢＡＬＢ／ｃ小鼠产生高效价的含抗ＩＢＤＶ独特型抗体的腹水。用此独特型抗体分别与福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂按１∶１比例乳化制备成抗ＩＢＤＶ独特型抗体疫苗，免疫接种ＳＰＦ鸡和普通京白公鸡，然后用ＩＢＤＶ野毒株经点眼和滴鼻方式攻毒，保护率分别为８／８、１４／１４，从而证实抗独特型抗体疫苗有潜在的研究和应用价值。     

分泌抗IBDV独特型抗体细胞株的建立

应用提取纯化的抗ＩＢＤＶ ＩｇＧ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，其脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在ＰＥＧ作用下融合，应用ＥＬＩＳＡ法检测筛选，经有限稀释法克隆２次，获得了２株（２Ｂ６株、５Ｆ４株）分泌抗ＩＢＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞株，并能诱生Ｂａｌｂ／ｃ小鼠产生高效价的含抗ＩＢＤＶ独型抗体腹水。     

免疫过氧化物酶单层试验检测鸡传染性法氏囊病病毒抗体的研究

建立了检测鸡血清中传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）抗体的免疫过氧化物酶单层试验（ＩＰＭＡ）。用于野外鸡血清中ＩＢＤＶ抗体检测。结果表明，ＩＰＭＡ比琼脂凝胶扩散试验（ＡＧＤ）更敏感、快速稳定。这为ＩＢＤ和其它疾病的诊断提供了一种新方法。     

IBDV灭活病毒口服接种雏鸡后诱导的保护性免疫

本研究检测了口服福尔马林灭活的传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）对雏鸡的免疫效果。灭活ＩＢＤＶ悬浮于含碳酸钠的ＰＢＳ中，当口灌服后，这种抗原可使雏鸡产生一种抗ＩＢＤＶ血清抗体，这些雏鸡可以抵抗病毒的攻击，当用ＥＬＩＳＡ检测时，证实血清中ＩＢＤＶ特异抗体的免疫球蛋白属于ＩｇＧ，曾报道霍乱毒素对哺乳动物有很地的粘膜辅助特性，但不能增强血清抗体应答，雏鸡经口接种，随后经非肠道途径接种抗原可使抗体应答增强。     

鉴别新城疫病毒弱毒株的抗多肽抗体制备

针对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）弱毒株Ｆ蛋白前体（Ｆ０）Ｆ２片段的特异结构,人工合成特异性多肽,将多肽与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）化学偶联制和轩成全抗原后免疫小鼠,制备抗多肽血清。经ＥＬＩＳＡ检测,该抗体与ＭＤＶ弱毒株呈阳性反应,而与鸡痘病毒（ＦＰＶ）,鸡传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）,ＭＤＶ强毒Ｆ４８Ｅ８株和四平析呈阴性反应,试验结果证明该抗体可以用于鉴别ＮＤＶ弱毒株。     

鸡传染性法氏囊病（IBD）琼脂扩散试验（AGP）诊断试剂的研制

用典型发病鸡的法氏囊制备抗原,以免疫鸡卵黄抗体代替阳性对照血清,研制出鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）琼脂扩散试验（ＡＧＰ）诊断试剂,用于检测免疫鸡群的ＩＢＤ抗体,指导疫苗免疫;检测发病鸡群的法氏囊组织ＩＢＤ抗原,达到确诊     

间接免疫荧光检测禽脑脊髓炎病毒抗体

ＡＥＶＶａｎＲｏｅｋｅｌ鸡胚适应株在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚神经胶质细胞（ＣＥＢ）传代,用盲传至第６代的ＣＥＦ、ＣＥＢ制成荧光标本。建立了ＡＥＶ荧光抗体检测方法,确定了待检血清稀释度１∶１０和荧光抗体ＦＩＴＣ羊抗鸡ＩｇＧ的稀释度１∶１０的工作浓度。通过对ＮＤＶ、ＭＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＩＶ、Ｒｅｏ等标准阳性血清的交叉试验,证实该法特异性强,且简单、方便、经济,适合于鸡群ＡＥＶ抗体的检测。     

斑点免疫金银染色法检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的研究

用建立的斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１：４００,ＳＰＡ－胶体金探针的工作浓度为１：８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点,用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管,肺,肾病科,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％,对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,Ｉ     

应用双抗体夹心法ELISA检测IBDV的研究

从抗ＩＢＤＶ高免蛋黄液中提取ＩｇＧ，用作包被抗体和酶标记，建立了检测ＩＢＤＶ的双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ。经抗原阻断，无关病毒对照、取代、验证等项试验，并与常规ＡＧＰ法比较，对来源不同的１００多个样品进行检测，结果表明：该法对患鸡腔上囊、脾脏的检出率均为１００％，比ＡＧＰ法敏感１００倍以上，用肉眼观察阳性与阴性之间颜色差异显著，不存在非特异性反应。试验证明该法具有满意的待异性、敏感性、快速性和稳定性，是ＩＢＤ早期病原学诊断和流行病学调查的有效手段。     

鸡新城疫琼扩试验与血凝抑制试验相关性的研究

应用ＮＤＶ－Ｌａｓｏｔａ株鸡胚液，经灭活、透个和浓缩而制成琼脂扩散（ＡＧＰ）抗原，对ＮＤ抗体进行检测，通过阻断等试验，表明ＡＧＰ检测ＮＤ具有特异性；应用血凝抑制试验（ＨＩ）和ＡＧＰ试验同步检测血清及卵黄中ＮＤ抗体，结果ＨＩ抗体Ｎ ＡＧＰ抗体两者具有相关性（ＮＤ－ＨＩ为４１ｏｇ时，ＡＧＰ是性率达９７．４％，＞５１ｏｇ时ＡＧＰ阳性率为１００％；ＡＧＰ试验简便，准确性高；特别适合大量血清样品的检测。     

PCR方法快速检测鸡传染性支气管炎病毒

本试验建立了一种快速检测鸡传染性支气管炎病毒的通用性 Ｐ Ｃ Ｒ 方法。通过对纯化后 Ｉ Ｂ Ｖ核蛋白基因进行直接 Ｐ Ｃ Ｒ及套式 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增表明，两次 Ｐ Ｃ Ｒ 产物的大小为０．７ ｋｂ 和０．５ ｋｂ，与实际设计相符。而对照的 Ｎ Ｄ Ｖ 及 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 的 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增产物均为阴性。用 Ｉ Ｂ Ｖ Ｈ Ｂ株感染 Ｓ Ｐ Ｆ鸡后，应用我们所建立的 Ｐ Ｃ Ｒ 方法去检测不同时期所采集的肾脏、气管、盲肠扁桃体、肺脏和肝脏中的 Ｉ Ｂ Ｖ，在 Ｓ Ｐ Ｆ鸡感染 Ｉ Ｂ Ｖ后的２１ ｄ 仍然能够检测到 Ｉ Ｂ Ｖ 的基因组， Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 杂交试验证明了我们获得的 Ｐ Ｃ Ｒ 产物为 Ｉ Ｂ Ｖ 的核蛋白基因。该 Ｐ Ｃ Ｒ 检测方法比免疫荧光抗体（ Ｆ Ａ）法更具敏感、特异、快速等特点，完全适用于不同来源及不同血清型 Ｉ Ｂ Ｖ 的检测。     

应用间接免疫荧光法检测鸡传染性贫血病病毒抗体的研究

用鸡传染性贫血病病毒（ＣＩＡＶ）ＭＳＢＩ－ＴＫ５８０３毒株感染的ＭＤＣＣ－ＭＳＢ；细胞涂片为抗原，建立了检测ＣＩＡＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＩＦＡ）。应用该ＩＩＦＡ方法对人工感染的ＳＰＦ鸡进行了检测１５只１日龄ＳＰＦ鸡在接种后第７、１４天时均呈阴性反应；２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，３５天时呈明显阳性反应；１４只４０日龄ＳＰ